UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE HUAMANGA FACULTAD DE CIENCIAS CIENCIAS DE LA SALUD S ALUD ESCUELA PROFESIONAL DE OBSTETRICIA
ÍNDICE GENERAL ÍNDICE GENERAL I.
Página 2
..........................................................................................................
GENERALIDADES ................ ................................ ................................. ................................. ................................. ...................... .....3
II. PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN
6
III. MARCO TEÓRICO ..................................................................................... 10 3.1. Antecedentes .............................................................................................. 10 3.2. Physalis peruviana L. “Aguaymanto” ................................. ................................................. ......................... ......... 13 3.3. Aparato reproductor femenino .................. ........ ................... ................... ................... .................. .................. ............ ... 15 3.4. Útero
16
3.5. Útero grávido
18
3.6. Actividad muscular del útero humana
19
3.7. Factores que participan participan en el inicio del parto ................... .......... ................... ................... ................ ....... 20 20 3.8. Oxitocina Oxitocina ................................. .................................................. .................................. ................................. ................................. ................. 20
I.- GENERALIDADES 1.- TITULO Efecto contráctil del extracto hidroalcohólico de Physalis peruviana L. “aguaymanto” en tejido uterino grávido a término, aislado de Cavia porcellus “cobayo” Ayacucho 2016.
2.- PERSONAL INVESTIGADOR 2.1.- AUTOR ROMERO NAJARRO, Elvia Daill, estudiante egresada de la Escuela Profesional de Obstetricia, de la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga.
2.2.- ASESORES Dra. Luisa ALCARRAZ CURI M.V. William Ulises. PALOMINO CONDE
3.- TIPO DE INVESTIGACIÓN Tipo de investigación: Aplicada
Recolección de datos Interpretación de resultados Presentación del informe
X
X X X
7.- RECURSOS DISPONIBLES 7.1. RECURSOS HUMANOS -
Una estudiante de Obstetricia
-
Una obstetra
-
Un veterinario
7.2. RECURSOS MATERIALES 7.2.1. Material Biológico -
30 cobayos preñadas con un peso comprendido entre 600 – 800 g
-
2 kg de frutos Physalis peruviana L. “aguaymanto”.
7.2.3. Materiales de Laboratorio A.- Materiales -
9 jeringas de tuberculina
8.- PRESUPUESTO RUBROS 30
cuyes
COSTO PARCIAL
COSTO TOTAL
hembras
preñadas de 600-800
S/. 20,00
S/. 600,00
S/. 0,50
S/. 50,00
S/. 1,50
S/. 130,00
S/. 6,90
S/. 20,70
gramos. Alimento
para
los
cuyes. Frutos de aguaymanto para
el
extracto
concentrado. 3 litros de alcohol 96° para el preparado de
II.- PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN 2.1. SITUACIÓN PROBLEMÁTICA: En el campo de la ginecología y la obstetricia se hace uso de fármacos; en la pre concepción, embarazo (uso de micronutrientes), parto y puerperio (uso de analgésicos y oxitócicos); sin embargo las mujeres embarazadas de zonas rurales y alto andinas practican la medicina complementaria con el uso de las plantas medicinales, hierbas aromáticas, extractos, esencias, fusiones, etc. ya sea por recomendación, iniciativa propia, sugerencia de familiares, médicos, amigos, como chamanes, curanderos, parteras, herbolarios, etc. Debido a ello es de necesidad conocer mediante ensayos más científicos las propiedades de dichas plantas que se usan en el embarazo y el parto. Los problemas de salud y la difícil consecución de los medicamentos han llevado a la humanidad a la búsqueda de la medicina tradicional; por lo que diversas plantas han sido usadas para curar males, entre ellas el
preparación y prescripción se ha llevado a cabo bajo bases empíricas mas no científicas. Se han demostrado los efectos de diversas plantas medicinales en la medicina, mas no en el campo propio de la ginecología y obstetricia por lo cual el uso de dichas plantas por las mujeres embarazadas podría tener efectos nocivos o contrarios para la salud del feto y/o la mujer gestante. En la región de Ayacucho existe mayor población que se ubica en las zonas alto andinas y suelen recurrir a la medicina tradicional, mediante el uso de hierbas, extractos, raíces, frutos, como la del “aguaymanto”. En nuestra región el aguaymanto es de fácil adquisición
y conocido por distintas comunidades. Por otra parte la auto-atención considerada como parte de la estructura social, se basa en la necesidad de iniciar acciones que den una solución a los problemas que se presentan en el campo de la ginecología y obstetricia. Por lo tanto, la auto-atención y el consumo de plantas medicinales, guardan una estrecha relación, ya que los tratamientos que se utilizan en la auto-
¿cuál será la concentración del extracto hidroalcohólico de Physalis peruviana L “aguaymanto” que genere mayor efecto contráctil en tejido
uterino grávido a término aislado en cobayos? Ayacucho 2016
Comparar los picos de la variabilidad y la duración de la contracción uterina del tejido uterino grávido a término aislado en cobayos en comparación con el grupo control.
Comparar la variabilidad de las contracciones uterinas en tejido uterino grávido a término aislado en cobayos post-administración de acetilcolina, oxitocina y extracto hidroalcohólico de Physalis peruviana L. “aguaymanto”.
2.5. JUSTIFICACIÓN En la actualidad cientos de plantas medicinales no están siendo analizados y estudiados por la ciencia entre ellas el Physalis peruviana L. “aguaymanto”, por ello la presente investigación aportara a los
conocimientos amplios a cerca de dicha planta. 2 Teniendo en cuenta que
acortamiento y la generación de una fuerza de contracción de mayor magnitud.2 Es por ello que el estudio del Physalis peruviana tiene como objetivo demostrar el efecto contráctil y su posterior uso como un tratamiento natural en Ginecología y Obstetricia.
2.6. OBJETIVOS Objetivo general Determinar el efecto contráctil del extracto hidroalcohólico de Physalis peruviana L. “aguaymanto” en tejido uterino grávido a término aislado en
cobayos.
Objetivos específicos
Demostrar la variabilidad de las contracciones uterinas post aplicación del extracto hidroalcohólico de Physalis peruviana L “aguaymanto” en tejido uterino grávido a término aislado en cobayos.
III.- MARCO TEÓRICO 3.1. ANTECEDENTES A nivel mundial se han reportado diversos estudios de los efectos de las plantas medicinales entre ellos lo del Physalis peruviana L. "aguaymanto":
Kamau PW. (Nairobi 2006) demostró las actividades farmacológicas de Bridelia micrantha, Erythrina abyssinica, Microglossa pyrifolia, Physalis peruviana y Vernonia lasiopus kamau. Objetivo: examinar su utilización en
las
actividades
farmacológicas
confirmando
sus
conocimientos
etnomédicos. Diseño/método: experimental. Resultados: los resultados obtenidos indican que los extractos de Bridelia micrantha, Vernonia lasiopus causan efecto contráctil en el músculo liso del corazón de conejo,
tráquea de cobayo y útero de la rata. Mientras que los extractos de Erythrina abyssinica, Microglossa pyrifolia y Physalis peruviana mostraron efecto
contráctil sobre el íleon, tráquea y el útero del ratón y cobayo. Conclusión: la conclusión de este estudio confirmó las aplicaciones etnomédicos de las
antinflamatoria, las cuales parecen ser promisorias para el desarrollo de fitopreparados.4
Zavala y Col. (Perú 2006). Determinaron el efecto citotóxico del Physalis peruviana L. “capulí” en cáncer de colon y leucemia mieloide crónica.
Objetivo: Determinar la actividad citotóxica de Physalis peruviana en las líneas colo-205 (cáncer de colon) y k562 (leucemia mieloide crónica).
Diseño/métodos: Estudio experimental. Este trabajo se llevó a cabo en los laboratorios del departamento de Farmacología de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos y de la Facultad de Ciencias y Filosofía de la Universidad Peruana Cayetano Heredia. Resultados/conclusiones: Los extractos etanólicos de hojas y tallos de Physalis peruviana L. son más citotóxicos que el 5-fu, en las líneas colo-205 y k562. Además, son menos citotóxicos en relación al 5-fu (control positivo 5-fluorouracilo) en la línea 3t3 (fibroblastos normales del ratón). 5
Quispe y Col. (Lima-Perú 2009). Determinaron la actividad citotóxica del
inducida. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Objetivo: Determinar la actividad hipolipidémica del fruto de Physalis peruviana “tomatillo” en un modelo de hiperlipidemia aguda inducida con tritón. Diseño/método: Estudio experimental. Se utilizaron ratón casero. swis machos como animales de experimentación. Se trabajó con cuatro grupos de ratones, el grupo blanco recibió agua destilada por vía oral y solución salina fi siológica por vía intraperitoneal, el grupo control recibió agua destilada por vía oral y tritón por vía intraperitoneal, el grupo problema 1 recibió por vía oral 0.05g/100g del extracto de Physalis peruviana y tritón por vía intraperitoneal y el grupo problema 2 recibió por vía oral 0.2g/100g del extracto de Physalis peruviana y tritón por vía intraperitoneal. Resultados: Luego de 24 horas
de administrar los tratamientos se realizaron las mediciones en suero de las concentraciones de colesterol y triglicéridos. Los niveles promedio de colesterol (mg/dL) fueron: 58.87±11.54 (blanco), 121.71±15.00 (control), 58.08±9.21 (problema 1) y 66.78±16.77 (problema 2). Los niveles promedio
de 0,25 mg/mL, con alturas de contracciones uterinas similar a la oxitocina (p>0,05), pero diferente a la acetilcolina y al blanco (p<0,05).
Conclusiones: el extracto hidroalcohólico de Physalis peruviana L. si presenta efecto oxitócico sobre útero aislado de cobayo, con tendencia a la relajación de la motilidad uterina por dos mecanismos posibles: movilización de Ca 2+ citoplasmático hacia el espacio extracelular y la remoción de las reservas de Ca 2+ internas.2
3.2. Phys alis peruviana L. “Aguaymanto ” Es una planta originaria de los andes suramericanos, específicamente en Perú. Pertenece a las familias de las solanáceas, al género Physalis y posee distintas denominaciones comunes. En chile se conoce por Golden berries o Physalis, en Colombia “uchuva” y en Ecuador “uvilla”, en Perú “aguaymanto”, en España “alquenje” y en Sudáfrica ” cape gooseberry” a
nivel del mercado internacional el nombre más común es “goldenberry”. Perenne.8
El fruto es una baya carnosa, el color y aroma del fruto varía según los ecotipos encontrándose desde el color verde limos hasta el amarillo dorado cuando está maduro. La corteza es ligeramente amarga. La pulpa amarilla y jugosa es muy agradable por su sabor azucarado, así como la materia mucilaginosa que rodea las semillas. El diámetro o calibre del fruto es bastante variable, que va desde 1.25 a 2,30 cm con un promedio de 1.80 cm el peso de los frutos varían grandemente de acuerdo a los ecotipos, desde 1.70 g a 8.10 g con un promedio de 5,30 g. La fruta contiene muchas semillas. Cuando completa la madurez, el cáliz y la fruta caen a la tierra juntas (por efecto de la gravedad), el fruto se desarrolla durante 60 a 80 días.8, 11
3.2.3. Composición química nutricional del fruto de Phys alis peruviana L. “aguaymanto”.12 Componentes
Cantidad en 100 g.
Valores diarios (basados en una dieta de 2000 calorías)
3.3. Aparato reproductor femenino Se compone de dos partes: el que traslada el esperma a las trompas de Falopio y los ovarios, que producen los ovocitos o gametos femeninos. Estas partes son internas; la vagina es el canal que comunica con los órganos externos en la vulva, que incluye los labios genitales, el clítoris y el meato de la uretra. La vagina está unida al útero a través del cérvix, mientras que el útero está unido a los ovarios vía las trompas de Falopio. Si, durante el tránsito, se encuentra con esperma, un espermatozoide puede introducirse y fusionarse con el óvulo, fecundándolo. El equivalente en hombres es el aparato genital masculino.13, 14
3.4. Útero El útero, también denominado matriz, es el órgano de la gestación y el mayor de los órganos del aparato reproductor femenino de la mayoría de los mamíferos, incluyendo los humanos. Es un órgano muscular, hueco, en forma de pera, infraperitoneal, situado en la pelvis menor de la mujer que, cuando adopta la posición en anteversión, se apoya sobre la vejiga urinaria por delante, estando el recto por detrás. Aloja a la blástula, que se implanta en el endometrio, dando comienzo a la gestación, que en la especie humana dura unos 280 días. 16
superior entre los puntos de inserción de las trompas de Falopio. La mayor parte del cuerpo del útero, no así el cuello, está constituida por músculo. Las caras internas de las paredes anterior y posterior yacen casi en contacto entre sí y la cavidad interpuesta forma una mera hendidura. 15, 17
3.4.1. Tamaño y forma Se describe al útero como “piriforme”, según se muestra en la figura 3, ya que simula a una pera aplanada. Consta de dos partes mayores, pero no equivalentes: una porción triangular superior, el cuerpo y una inferior, cilíndrica, el cuello, que se proyecta hacia la vagina. 15
3.4.2. Función La función principal del útero es recibir al cigoto para su implantación y nutrición, por medio de vasos sanguíneos especialmente desarrollados para ese propósito. El huevo fertilizado se convierte luego en un embrión que se desarrolla en un feto, para luego nacer un feto de la especie determinada.14, 16
3.5. Útero grávido Útero durante el embarazo. Es un término que utilizan los especialistas en ecografía en sus informes para indicar que el útero contiene un embrión o un feto.16 El embarazo estimula un notorio crecimiento uterino por hipertrofia de las fibras musculares. El peso del órgano aumenta de 70 g hasta casi 1 100 g a término. Su volumen total es en promedio de 5 L. El fondo uterino, una convexidad antes poco notoria entre las inserciones tubarias, ahora se torna cupuliforme (figura 4). Los ligamentos redondos se observan
3.6. Actividad muscular del útero humano El útero es una estructura muscular lisa capaz de contraerse y ejercer suficiente presión en su interior como para expulsar al exterior su contenido, en algunas situaciones fisiológicas como la menstruación y el parto. 14 En el estudio de la fisiología de a contractibilidad del útero humano hay que apreciar el tono, que es la presión de reposo, la intensidad, la amplitud de la contracción de reposo, medidos ambos en mmHg y la frecuencia, la que arbitrariamente se mide por la cantidad de contracciones que se producen en un periodo de 10 minutos.18 El útero tiene contractibilidad durante todo el embarazo, en las etapas iniciales y hasta las 28 semanas, se registran las contracciones de Hermogenes Alvarez de muy baja intensidad y de escasa frecuencia. No son percibidas por la embarazada. Entre las 28 semanas y el parto aparecen las contracciones de Brakton Hicks con intensidades superiores a los 10 mmHg, tono de 3 a 8 mmHg y frecuencia baja que aumenta a
totalidad del órgano. Este es el primer componente del triple gradiente descendiente de propagación. Todas las ondas desde arriba hacia abajo llegan a su punto máximo o acmé al mismo tiempo, pero como tuvieron distintos orígenes en tiempo, se deduce que la duración de la fase de contracción es mayor en el fondo que en las zonas inferiores del útero. Esto constituye la segunda fase del triple gradiente, el gradiente descendente. Finalmente, la intensidad de las contracciones en las partes más altas del útero es mayor que en las partes inferiores, constituyendo la tercera fase del triple gradiente, el gradiente de intensidad. 14, 18
3.7. Factores que participan en el inicio del parto Al conocer las causas del parto, se debe de considerar que la preparación para el proceso del parto se inicia ya desde primerísimas etapas de la gestación.19
3.7.1. Factores miometriales Activación de la contractilidad miometrial es el punto crucial para el
Distensión del útero en el cuello y el cuerpo uterino. Estimulación mecánica del útero o de la vagina. Coito. Excitación mecánica de las mamas. Estímulos emocionales. Estímulos osmóticos (por su actividad presora y antidiuréticos) Estimulación del hipotálamo o de la corteza cerebral.
En el embarazo y el parto, la actividad uterina y la liberación de oxitocina se influyen mutuamente. 20
3.9. Cavia porcellus “Cobayo” Mamífero que pertenece al orden rodentia. Conocido como especie nativa del Perú y patrimonio natural de la nación; tiene un ciclo de reproducción corto (después del parto se presenta ovulación a las 2 o 3 horas de finalizada este). Seleccionada por su precocidad corregida por el número de crías nacidas, es la que mejor se adapta a nivel de productores logrando lo más altos índices de sobrevivencia. Alcanza en promedio un peso de 800
decepcionar el óvulo y transportarlo hasta el cuerno uterino. Es en estos oviductos donde se realiza la fecundación de los óvulos. Útero: presentan útero bicorne, en forma de V. Las paredes internas de los cuernos uterinos están revestidas por la mucosa llamada endometrio que es la encargada de secretar sustancias nutritivas para alimentar al huevo o cigoto hasta que se transforme en feto. Vagina: Es un tubo de músculo fibroelástico. Vulva: Es la abertura en forma de V o Y que se ve en la parte externa de la hembra. En su porción media ventral presenta una escotadura que forma dos pequeños labios en cuyo fondo se haya el meato urinario. En posición dorsal presenta una porción pequeña que sería el clítoris. 23 Madurez Sexual: las hembras alcanzan la pubertad a los 60 - 70 días de vida y los machos entre los 70 y los 100 días de vida. Ciclo Estrual: poliéstrico no estacional, con una duración de 15 a 17 días. Estro: dura 6 a 11 horas, durante el mismo la cobaya muestra congestión
IV.- HIPÓTESIS El Physalis peruviana L. “aguaymanto” tiene efecto contráctil en tejido uterino grávido a término aislado en cobayos.
V.- VARIABLES: 5.1. Variable independiente Extracto del Physalis peruviana L. “aguaymanto”
5.2. Variable dependiente Efecto contráctil en tejido uterino grávido de cobayo.
5.3. Variable intervinientes
Tiempo de gestación del cuy Edad cronológica del cuy Peso del cuy
5.4. Operacionalización de variables VARIABLES
DEFINICI N CONCEPTUAL OPERATIVA
INDICADORES
Variable independiente
Planta herbácea oriunda de los andes sudamericanos, que tiene efecto oxitócico, de tallo Physalis peruviana ramificado, flores bisexuales y fruto valla esférica. “aguaymanto” Variable dependiente
Concentración mg/mL): - 1ra: 4 mg/mL - 2da: 8 mg/mL - 3ra: 12 mg/mL
Tiempo de contracción ejercida - 15 minutos en el tejido uterino grávido - 10 minutos aislado de cobayo. - 5 minutos
Efecto contráctil en tejido uterino grávido. Variable interviniente
Tiempo que ha transcurrido desde el empadre hasta el tiempo de gestación parto. del cuy Tiempo que ha transcurrido Edad cronológica desde el nacimiento hasta el del cuy empadre. Peso del cuy
65 – 67 días de gestación Edad: 8 – 10 semanas Peso: 600 a 800 gr
Masa del cuy expresada en gramos al empadre.
25
CRITERIOS DE MEDICIÓN
INSTRUMENTOS
Miligramos de Gotero, sonda. extracto diluido
Tiempo en minutos
Equipo quimografo y cronometro.
Cronograma y peso
Calendario y balanza analítica.
VI.- DISEÑO METODOLÓGICO 6.1. Tipo de investigación: Aplicativo Nivel de investigación: Experimental 6.2. Definición de la población y muestra 6.2.1. Población: 100 cobayos de raza Perú del centro experimental Pampa del Arco.
6.2.2. Muestra: 30 cobayos de raza Perú primogestas de 65 a 67 días de gestación del centro experimental Pampa del Arco.
6.2.3. Unidad experimental: Tejido uterino grávido 6.3. Muestreo: aleatorio probabilístico. 6.3.1. Criterios de inclusión: Cobayos primogestas que estén en buenas condiciones: -
Peso entre 600 a 800 g para el empadre Edad cronológica del cobayo entre 8 -10
que el alcohol se distribuya homogéneamente en la muestra. Filtrar la muestra al vacío y desechar los componentes sólidos. 25, 26
6.6.2. Preparación de materiales y reactivos.
Preparar acetilcolina en agua destilada a una concentración de 2 x 10-2M.
Preparar las ampollas de oxitocina de 10 UI/mL.
Preparar el extracto hidroalcohólico a diferentes concentraciones: 4 mg/mL, 8 mg/mL y 12 mg/mL, que se prepararan con solución nutricia de Tyrode; de manera que el extracto hidroalcohólico forme una suspensión con la solución de Tyrode. 27
6.6.2. Determinación del efecto contráctil in vitro sobre el útero grávido aislado de cobayo.27
Los animales serán mantenidos en un ambiente con un ciclo de 12 horas luz/oscuridad y a temperatura de 20-24 ºC, con acceso libre a
Se dejará estabilizar aproximadamente por 5 min, y una vez conseguida una línea basal estable, se adicionará 0,25 mL de acetilcolina y observando por 3 minutos.
Luego se le adicionará 0,25 ml oxitocina 10 UI/mL. realizando un registro control durante 3 minutos.
Después
se
adicionará
el
extracto
hidroalcohólico
con
concentraciones de 4 mg/mL, 8 mg/mL y 12 mg/mL, para cada muestra de útero y se dejará en observación. Todos los cambios y movimientos serán captados por un transductor y registrados en la computadora.27
6.7. Diseño experimental Se empleará un Diseño Completamente Randomizado (DCR) con cinco tratamientos; por el cual se extraerán el útero de cada animal de experimentación, y se dividirán en cinco grupos de cinco repeticiones cada uno y un grupo control.
VII.- ANÁLISIS DE DATOS La diferencia significativa existente entre los tratamientos será evaluada mediante análisis de varianza (ANOVA) con un nivel de significación estadística de 95%. Las comparaciones entre cada tratamiento se harán con la Prueba HSD de Tukey, 28 para evaluar las diferencias estadísticas al 95% de confianza. Se hará uso del software estadístico SPSS, versión 22,0.
VIII.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Vásquez A. Evaluación de la actividad contráctil uterina de las hojas de Urtica magallánica Poir. “ortiga blanca” en útero aislado de rata. Tesis para optar título de química farmacéutica. Ayacucho – Perú. 2005.Tesis post grado.
2. Romero NG. Efecto oxitócico del extracto hidroalcohólico de los frutos de Physalis peruviana L. “aguaymanto” en útero aislado de cobayo. Tesis para obtener título de Químico Farmacéutica. UNSCH. Ayacucho, 2015. 3. Kamau PW. The pharmacological activities of Bridelia micrantha, Erithrina abyssinica, Microglossa peirifolia, Physalis peruviana L.
and Vernonia lasiopus. Doctoral dissertation, university of Nairobi. [Revista en internet] 2006. [acceso diciembre, 2016] disponible en: www.ethnopharmacologia.org/.../pdf/biblio-hs-18-ssegawa.pdf 4. Franco LA. y col. Actividad antiinflamatoria de extracto y fracciones
Universidad Nacional de Trujillo. [Revista en internet] 2011. [acceso diciembre, 2016] disponible en: 8. Aucasime L. 2011. B.a. Descripción personal. Laboratorios de Farmacobotánica. UNSCH. Ayacucho. 9. Cronquist, A “The evolution and classification of f lowering plants” de Universidad de Michigan, Edit
New York Botanical Garden,Edic.
2, ilustrada 24 Feb 2010 SBN0893273325, 9780893273323 10. Kuklinski C. Farmacognosia. Barcelona: Omega, S.A.; 2003. 11. Angulo P. 1995. Plantas Medicinales y Medicamento Vegetal. Primer Symposium de Plantas Medicinales y Medicamento Vegetal en el Perú. 12. Madriñan CE. Caracterización morfológica de accesiones de Physalis peruviana L. [Revista en internet] 2010. [acceso diciembre,
2016] disponible en: www.bdigital.unal.edu.co/1875/1/07505002. 2010.pdf
21. 636.9323/A39. BC UNSCH. Producción de cuyes. Luis Aliaga Rodríguez. 22. Moron F. 1996. Actividad Espasmolítica del Extracto de Matricaria recutita “manzanilla” en órganos aislados. Revista Cubana. La
Habana, Cuba. 23. Camargo C. Suministro de probióticos en raciones suplementarias de cuyes (Cavia aparea f, porcellus) en las etapas de lactancia y recría. Tesis. Licenciada en Biología. Carrera de Biología. Cochabamba, Bolivia. Universidad Mayor de San Simón. Facultad de Ciencias y Tecnología. [Revista en internet] 2010. [acceso diciembre, 2016] disponible en: repositorio.utc.edu.ec/bitstream/27 000/668/1/T-UTC-0530.pdf 24. Gonzalo AC. Fisiología reproductiva de los cobayos. [Revista en internet]
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[acceso
diciembre,
dpd.fvet.uba.ar/cartelera/00007212.pdf
2016]
disponible
en:
ANEXOS