UNE EN ISO 9439

norma española

UNE-EN ISO 9439

Noviembre 2000

Calidad del agua

TÍTULO

Evaluación de la biodegradabilidad aerobia final de los compuestos orgánicos en medio acuoso Método por valoración del dióxido de carbono producido (ISO 9439:1999) Water quality. Evaluation of ultimate aerobic biodegradability of organic compounds in aqueous medium. Carbon dioxide evolution test (ISO 9439:1999). Qualité de l'eau. Evaluation de la biodégradabilité aérobie ultime en milieu aqueux des composés organiques. Essai de dégagement de dioxyde de carbone (ISO 9439:1999). 9439:1999).

CORRESPONDENCIA

Esta norma es la versión oficial, en español, de la Norma Europea EN ISO 9439 de abril 2000, que a su vez adopta íntegramente la Norma Internacional ISO 9439:1999.

OBSERVACIONES

Esta norma anula y sustituye a la Norma Nor ma UNE-EN 29439 de abril 1994.

ANTECEDENTES

Esta norma ha sido elaborada por el comité técnico t écnico AEN/CTN 77 Medio Ambiente cuya Secretaría desempeña AENOR.

Editada e impresa por AENOR Depósito legal: M 43745:2000

LAS OBSERVACIONES A ESTE DOCUMENTO HAN DE DIRIGIRSE A:

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Grupo 15

S


EN ISO 9439

NORMA EUROPEA EUROPEAN STANDARD NORME EUROPÉENNE EUROPÄISCHE NORM

Abril 2000

ICS 13.060.70

Versión en español

Calidad del agua Evaluación de la biodegradabilidad aerobia final de los compuestos orgánicos en medio acuoso Método por valoración del dióxido de carbono producido (ISO 9439:1999) Water quality. Evaluation of ultimate aerobic biodegradability of organic compounds in aqueous medium. Carbon dioxide evolution test (ISO 9439:1999).

Qualité de l'eau. Evaluation de la biodégradabilité aérobie ultime en milieu aqueux des composés organiques. Essai de dégagement de dioxyde de carbone (ISO 9439:1999).

Wasserbeschaffenheit. Bestimmung der vollständigen aeroben biologischen Abbaubarkeit organischer Stoffe im wäßrigen Medium. Verfahren mit Kohlenstoffdioxid-Messung (ISO 9439:1999).

Esta norma europea ha sido aprobada por CEN el 2000-03-11. Los miembros de CEN están sometidos al Reglamento Interior de CEN/CENELEC que define las condiciones dentro de las cuales debe adoptarse, sin modificación, la norma europea como norma nacional. Las correspondientes listas actualizadas y las referencias bibliográficas relativas a estas normas nacionales, pueden obtenerse en la Secretaría Central de CEN, o a través de sus miembros. Esta norma europea existe en tres versiones oficiales (alemán, francés e inglés). Una versión en otra lengua realizada bajo la responsabilidad de un miembro de CEN en su idioma nacional, y notificada a la Secretaría Central, tiene el mismo rango que aquéllas. Los miembros de CEN son los organismos nacionales de normalización de los países siguientes: Alemania, Austria, Bélgica, Dinamarca, España, Finlandia, Francia, Grecia, Irlanda, Islandia, Italia, Luxemburgo, Noruega, Países Bajos, Portugal, Reino Unido, República Checa, Suecia y Suiza.

CEN COMITÉ EUROPEO DE NORMALIZACIÓN European Committee for Standardization Comité Européen de Normalisation Europäisches Komitee für Normung SECRETARÍA CENTRAL: Rue de Stassart, 36 B-1050 Bruxelles © 2000 Derechos de reproducción reservados a los

Miembros de CEN.


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ANTECEDENTES El texto de la norma internacional del Comité Técnico ISO/TC 147 "Calidad del agua", de la Organización Internacional de Normalización (ISO), ha sido adoptado como norma europea por el Comité Técnico CEN/TC 230 "Análisis del agua", cuya Secretaría desempeña DIN. Esta norma europea deberá recibir el rango de norma nacional mediante la publicación de un texto idéntico a la misma o mediante ratificación antes de finales de octubre de 2000, y todas las normas nacionales técnicamente divergentes deberán anularse antes de finales de octubre de 2000. De acuerdo con el Reglamento Interior de CEN/CENELEC, los siguientes países están obligados a adoptar esta norma europea: Alemania, Austria, Bélgica, Dinamarca, España, Finlandia, Francia, Grecia, Irlanda, Islandia, Italia, Luxemburgo, Noruega, Países Bajos, Portugal, Reino Unido, República Checa, Suecia y Suiza.

DECLARACIÓN El texto de la Norma Internacional ISO 9439:1999 ha sido aprobado por CEN como norma europea sin ninguna modificación.


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ÍNDICE Página 1

OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN............................................................................

6

2

TÉRMINOS Y DEFINICIONES..........................................................................................

6

3

FUNDAMENTO ....................................................................................................................

8

4

CONDICIONES AMBIENTALES DEL ENSAYO............................................................

8

5

REACTIVOS .........................................................................................................................

8

6

APARATOS ...........................................................................................................................

9

7

PROCEDIMIENTO ..............................................................................................................

10

8

CÁLCULO .............................................................................................................................

12

9

VALIDEZ DE LOS RESULTADOS....................................................................................

13

10

INFORME DE ENSAYO......................................................................................................

14

ANEXO A (Informativo) FUNDAMENTO DE UN SISTEMA DE ENSAYO PARA LA MEDIDA DEL DIÓXIDO DE CARBONO (EJEMPLO)..........

15

ANEXO B (Informativo) EJEMPLOS DE DETERMINACIÓN DEL DIÓXIDO DE CARBONO LIBERADO.....................................................................

16

ANEXO C (Informativo) EJEMPLO DE UNA CURVA DE BIODEGRADACIÓN................

18

ANEXO D (Informativo) DETERMINACIÓN COMBINADA DE DIÓXIDO DE CARBONO Y DEL COD ....................................................................

19

BIBLIOGRAFÍA...............................................................................................................................

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INTRODUCCIÓN Las condiciones que se describen en esta norma internacional no siempre corresponden con las condiciones óptimas que permitan que se produzca la máxima tasa de biodegradación. Con este método, el dióxido de carbono (CO 2) que se produce por acción microbiológica, se mide en trampas a través de las cuales se hace pasar un gas exhausto desde los recipientes de ensayo. Parte del CO 2 permanece en el medio dentro de los recipientes como carbón inorgánico disuelto (CID), la concentración de éste puede aumentar debido a la continuación del proceso de biodegradación. A medida que el carbono orgánico se aproxima a su eliminación completa, la concentración del CID desciende gradualmente y tiende a cero a medida que finaliza la incubación. Por consiguiente, es necesario acidificar el medio al final del ensayo para medir completamente el CO 2 formado biogenicamente. La medida de CO 2 medido en trampas externas puede ser diferente del CO2 producido realmente y la relación cinética puede también, ser menor que la relación basada en la medida de la extracción del COD. La consecuencia puede ser que las curvas de biodegradación basadas en el CO 2 atrapado puede no representar completamente la relación cinética microbiana. En las Normas ISO 15462 y en particular en la Norma ISO 14593 se describen métodos de biodegradación alternativos que están basados también en la producción de CO 2 pero no tienen este defecto.

PRECAUCIÓN - Los lodos activados y las aguas residuales contienen organismos potencialmente patógenos. Es conveniente tomar las precauciones adecuadas para su manipulación. Es conveniente manipular con precaución los compuestos de ensayo tóxicos y aquellos cuyas propiedades se desconocen. 1 OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN Esta norma internacional especifica un método para la evaluación, mediante la determinación del dióxido de carbono (CO2), de la biodegradabilidad final en medio acuoso, de los compuestos orgánicos, presentes en una concentración determinada, bajo la acción de microorganismos aerobios. El método descrito en esta norma internacional es aplicable a los compuestos orgánicos que: a) sean solubles en agua en las condiciones de ensayo, en cuyo caso puede determinarse, como dato adicional, la eliminación del COD (véase el anexo D); b) sean poco solubles en agua en las condiciones de ensayo, en cuyo caso puede resultar necesario poner en práctica medidas que garanticen una buena dispersión del compuesto (véase, por ejemplo, la Norma ISO 10634); c) no sean volátiles o tengan una presión de vapor despreciable en las condiciones del ensayo; NOTA – Para sustancias volátiles se utilizan, por ejemplo, las Normas ISO 9408 o ISO 14593.

d) no tengan un efecto inhibidor sobre los microorganismos de ensayo a los niveles de concentración seleccionados para el ensayo. NOTA – La presencia de efectos inhibidores se puede determinar conforme a lo especificado en el apartado 8.3, o mediante la utilización de cualquier otro método para determinar el efecto inhibidor que un compuesto ejerce sobre las bacterias (véase, por ejemplo, la Norma ISO 8192).

2 TÉRMINOS Y DEFINICIONES Para los fines de esta norma internacional, son de aplicación las siguientes definiciones:

2.1 biodegradación aerobia final: Descomposición de un compuesto químico o de materia orgánica en dióxido de carbono, agua y sales minerales de cualquier otro elemento presente (mineralización), con producción de nueva biomasa, por acción de microorganismos y en presencia de oxígeno. 2.2 biodegradación primaria: Modificación estructural (transformación) de un compuesto químico por acción de microorganismos, que produce la pérdida de una propiedad específica.


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2.3 lodo activado: Biomasa producida en el tratamiento aerobio de las aguas residuales por el crecimiento de bacterias y de otros microorganismos en presencia de oxígeno disuelto. 2.4 concentración de sólidos en suspensión: cantidad de sólidos obtenidos por filtración o centrifugación de un volumen conocido de lodo activado y secado a una temperatura aproximada de 105 ºC, hasta masa constante. 2.5 carbono orgánico disuelto COD: Fracción del carbono orgánico presente en la muestra de agua que no puede eliminarse por el método de separación de fases especificado. NOTA – Por ejemplo, por centrifugación a 40 000 m·s-2 durante 15 min, o la filtración a través de una membrana con un diámetro de poro de 0,2 µm a 0,45 µm.

2.6 carbono inorgánico total CIT: Totalidad del carbono inorgánico presente en el agua que proviene del dióxido de carbono y de los carbonatos. 2.7 carbono inorgánico disuelto CID: Fracción del carbono inorgánico presente en el agua que no puede eliminarse por el método de separación de fases especificado. NOTA – Por ejemplo, por centrifugación a 40 000 m·s-2 durante 15 min, o la filtración a través de una membrana con un diámetro de poro de 0,2 µm a 0,45 µm.

2.8 cantidad teórica de dióxido de carbono formado CO2T: Cantidad máxima teórica de dióxido de carbono formado tras la oxidación completa de un compuesto químico. NOTA – Se calcula a partir de la fórmula molecular y se expresa, en este caso, en miligramos de dióxido de carbono por miligramo (o por gramo) del compuesto a analizar.

2.9 fase de latencia: Período de tiempo transcurrido desde el inicio de un ensayo hasta el momento en el que se consigue la adaptación y/o la selección de los microorganismos responsables de la degradación y en el que la tasa de biodegradación de un compuesto químico o de la materia orgánica ha aumentado hasta un 10% aproximadamente del nivel máximo de biodegradación. NOTA – Generalmente se expresa en días.

2.10 nivel máximo de biodegradación: Tasa máxima de biodegradación de un compuesto químico o de una materia orgánica en un ensayo, por encima de la cual ya no tiene lugar biodegradación alguna en el transcurso del ensayo. NOTA – Generalmente se expresa como un porcentaje.

2.11 fase de biodegradación: Período de tiempo transcurrido desde el final de la fase de latencia de un ensayo hasta el momento en que se alcanza el 90% del nivel máximo de degradación. NOTA – Generalmente se expresa en días.

2.12 fase de meseta: Período de tiempo transcurrido desde el final de la fase de biodegradación hasta el final del ensayo. NOTA – Generalmente se expresa en días.

2.13 pre-exposición: Preincubación del inóculo en presencia del compuesto químico de ensayo o de materia orgánica, con el fin de aumentar la capacidad de dicho inóculo para biodegradar el material de ensayo, por adaptación y/o selección de los microorganismos.


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2.14 pre-acondicionamiento: Preincubación del inóculo en las condiciones de ensayo, pero en ausencia del compuesto químico de ensayo o de la materia orgánica, con el fin de mejorar la eficacia del ensayo, por aclimatación de los microorganismos a las condiciones de ensayo. 3 FUNDAMENTO Determinación de la biodegradación de los compuestos orgánicos por microorganismos aerobios mediante un ensayo en medio acuoso estático. La mezcla para el ensayo contiene un medio inorgánico, el compuesto orgánico como única fuente de carbono y energía, a una concentración comprendida entre 10 mg/l y 40 mg/l, y un inóculo mixto procedente de una planta de tratamiento de aguas residuales o de cualquier otro origen medioambiental. La mezcla se agita dentro de recipientes de ensayo y se airea con aire exento de CO 2, normalmente hasta 28 d (véase un ejemplo en el anexo A). El CO2 formado durante la degradación microbiana se recoge en recipientes externos y se determina por un método de análisis adecuado (véanse ejemplos en el anexo B). Después se compara con la cantidad teórica (CO 2T) y se expresa en forma de porcentaje. Para los compuestos suficientemente solubles en agua, es posible determinar (opcionalmente) la eliminación de carbono orgánico disuelto (COD), con el fin de obtener información adicional relativa a la biodegradación final. Esto puede efectuarse por este método, pero en el anexo D se describe un procedimiento apropiado que permite utilizar el compuesto a analizar y el inóculo a concentraciones más elevadas, lo que aumenta el potencial de biodegradación del ensayo. Puede obtenerse información acerca de la biodegradación primaria siempre que se disponga de un método analítico específico para la sustancia.

4 CONDICIONES AMBIENTALES DEL ENSAYO La incubación debe realizarse en la oscuridad o con iluminación difusa, a una temperatura que se encuentre en el intervalo comprendido entre 20 ºC y 25 ºC y que no varíe en más de ± 2 ºC durante el ensayo.

5 REACTIVOS Deben utilizarse únicamente reactivos de calidad analítica reconocida.

5.1 Agua, Agua destilada o desionizada cuyo contenido en COD sea inferior a 1 mg/l. 5.2 Medio de ensayo 5.2.1 Composición a) Solución a) Se disuelven: dihidrógenofosfato de potasio anhidro (KH 2PO4)

8,5 g

hidrógeno fosfato de dipotasio anhidro (K2HPO4)

21,75 g

hidrógeno fosfato de disodio dihidratado (Na 2HPO4·2H2O)

33,4 g

cloruro de amonio (NH 4Cl)

0,5 g

en agua (5.1), y se enrasa a

1 000 ml


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Con objeto de controlar esta solución tampón, es recomendable medir el pH, que debe tener un valor aproximado de 7,4. En caso contrario, debe prepararse una nueva solución. b) Solución b) Se disuelven 22,5 g de sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO 4·7H2O) en agua (5.1) y se enrasa a 1 000 ml. c) Solución c) Se disuelven 36,4 g de cloruro de calcio dihidratado (CaCl 2·2H2O) en agua (5.1) y se enrasa a 1 000 ml. d) Solución d) Se disuelven 0,25 g de cloruro de hierro (III) hexahidratado (FeCl 3·6H2O) en agua (5.1) y se enrasa a 1 000 ml. La solución se prepara inmediatamente antes de su utilización, o se añade una gota de ácido clorhídrico concentrado (HCl), para evitar la formación de precipitados.

5.2.2 Preparación del medio de ensayo. Para preparar 1 000 ml de medio de ensayo se añaden, a unos 800 ml de agua (5.1): – 10 ml de la solución a); – 1 ml de cada una de las soluciones b), c) y d). Se enrasa a 1 000 ml con agua (5.1).

6 APARATOS Es necesario asegurarse de que todo el material de vidrio ha sido limpiado cuidadosamente y que se encuentra exento de cualquier sustancia orgánica o tóxica.

6.1 Recipientes de ensayo, de vidrio (por ejemplo matraces Erlenmeyer o frascos), que permitan la purga de los gases y la utilización de un agitador, incluidos tubos no permeables al CO 2. Deben situarse en una habitación con temperatura constante o en un entorno controlado por termostato (por ejemplo un baño María). 6.2 Sistema de producción de aire exento de CO2, capaz de alimentar cada uno de los recipientes de ensayo con un caudal constante comprendido entre 50 ml/min y 100 ml/min para 3 l de medio (véase en el anexo A un ejemplo de montaje de los recipientes de ensayo). 6.3 Equipo analítico para la determinación de CO2. Cualquier equipo o técnica que tenga exactitud suficiente como, por ejemplo un analizador de CO 2 o de CID, o un dispositivo para determinación volumétrica tras una completa absorción en una solución alcalina (véanse ejemplos en el anexo B). 6.4 Equipo analítico para la determinación del carbono orgánico disuelto (COD) opcional. 6.5 Centrífuga o sistema de filtración, provisto de filtros de membrana (con un tamaño nominal de poro comprendido entre 0,20 µm y 0,45 µm), cuya adsorción o liberación de carbono orgánico sea mínima. 6.6 pH-metro


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7 PROCEDIMIENTO 7.1 Preparación de las soluciones de ensayo 7.1.1 Compuesto de ensayo. Se prepara una solución madre de un compuesto de ensayo suficientemente soluble en agua (5.1), o en el medio de ensayo (5.2) y se añade una cantidad adecuada de esta solución a los recipientes de ensayo, de modo que se obtenga una concentración de carbono orgánico en el medio de ensayo final comprendida entre 10 mg/l y 40 mg/l. En función de las propiedades del compuesto de ensayo (por ejemplo, la toxicidad) y del objetivo del ensayo, pueden utilizarse otras concentraciones. Los compuestos poco solubles se añaden directamente en los recipientes de ensayo. Se determina la cantidad añadida con exactitud. NOTA – Para más detalles relativos a la manipulación de compuestos débilmente solubles en agua, véase la Norma ISO 10634.

7.1.2 Compuesto de referencia. Se utiliza como compuesto de referencia un compuesto orgánico de biodegradabilidad conocida, como por ejemplo la anilina o el benzoato de sodio. Se prepara una solución madre del compuesto de referencia en el medio de ensayo (5.2), de la misma forma que se hace para el caso de un compuesto de ensayo soluble en agua (7.1.1), con objeto de obtener una concentración final de carbono orgánico de 20 mg/l o una concentración equivalente a la del compuesto de ensayo. 7.1.3 Solución de control de la inhibición. Si fuera necesario (por ejemplo, cuando no se dispone de información acerca de la toxicidad del compuesto de ensayo), se prepara una solución que contenga, en el medio de ensayo (5.2), a la vez el compuesto de ensayo (7.1.1) y el compuesto de referencia (7.1.2), preferiblemente con unas concentraciones de carbono orgánico de 20 mg/l para cada compuesto. 7.2 Preparación del inóculo 7.2.1 Generalidades. Se prepara el inóculo a partir de lodos activados (7.2.2) o a partir de las fuentes descritas en los apartados 7.2.3 y 7.2.4 o de una mezcla de dichas fuentes, de modo que se obtenga una población microbiana que presente una suficiente actividad de biodegradación. Se controla la actividad del inóculo a través del compuesto de referencia (7.1.2 y capítulo 9). La producción de CO 2 del blanco debería satisfacer las exigencias del criterio de validez (véase el capítulo 9). Para reducir la influencia del blanco, puede resultar de utilidad realizar un pre-acondicionamiento del inóculo, por ejemplo lavándolo con el medio (5.2.2) y aireándolo durante un período comprendido entre 1 d y 7 d antes de su utilización. Se utiliza un volumen adecuado para la inoculación (véase la nota 2 posterior). NOTA 1 – Con objeto de permitir una predicción general del comportamiento de degradación en el medio ambiente, generalmente no se debería realizar una pre-exposición del inóculo al compuesto de ensayo. No obstante, en ciertas circunstancias y según el propósito del ensayo, puede realizarse una pre-exposición del inóculo, siempre que este hecho se especifique claramente en el informe de ensayo (por ejemplo, porcentaje de biodegradación = x %, utilizando un inóculo pre-expuesto) y, que se detalle el método de pre-exposición en el informe de ensayo. Los inóculos pre-expuestos pueden obtenerse a partir de ensayos de biodegradación en laboratorio, efectuados en diferentes condiciones (por ejemplo, ensayo de Zahn-Wellens, conforme a la Norma ISO 9888 y el ensayo SCAS según la Norma ISO 9887) o a partir de muestras recogidas de lugares en los que se dan circunstancias ambientales particulares (por ejemplo, plantas depuradoras que tratan compuestos similares o zonas contaminadas). NOTA 2 – Basándose en la experiencia, un "volumen adecuado" es aquel: –

que es suficiente para permitir obtener una población que ofrece suficiente actividad de biodegradación;

–

que degrada el compuesto de referencia en el porcentaje estipulado (véase el capítulo 9);

–

que proporciona entre 103 y 106 unidades formadoras de colonias por mililitro en la mezcla final;

–

cuya concentración de materias en suspensión es como máximo equivalente a 30 mg/l de sólidos en suspensión de lodo activado en la mezcla final;

–

que la cantidad de carbono orgánico disuelto aportado por el inóculo sea preferentemente menor al 10% de la concentración inicial de carbono orgánico introducida por el compuesto de ensayo;

–

que, en general sean suficientes de 1 ml a 10 ml de inóculo para 1 000 ml de solución de ensayo.


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7.2.2 Inóculo procedente de planta de tratamiento con lodos activados. Se toma una muestra de lodo activado de un tanque de aireación de una planta de tratamiento de aguas residuales, o de una planta piloto de laboratorio, que trate predominantemente aguas de origen urbano. Se mezcla bien y se determina la concentración de sólidos en suspensión del lodo activado (utilizando, por ejemplo, la Norma ISO 11293). Si es necesario se eliminan las partículas gruesas por filtración a través de un tamiz y se concentra el lodo por decantación, de manera que el volumen de lodo añadido en el ensayo sea mínimo. Se mantiene la muestra en condiciones aerobias y es preferible utilizarla el mismo día de su toma. Se emplea un volumen adecuado para obtener una concentración de 30 mg/l de sólidos en suspensión en la mezcla final. 7.2.3 Inóculo de agua residual. Se toma una muestra del influente o del efluente de una planta de tratamiento de aguas residuales, o de una planta piloto de laboratorio, que trate predominantemente aguas de origen urbano. Si fuera necesario, se eliminan las partículas gruesas por filtración grosera y se concentra la muestra, por ejemplo, por centrifugación. Se mezcla bien y se mantiene la en condiciones aerobias y se emplea preferiblemente el mismo día de su toma. Antes de su utilización, se deja asentar la muestra durante 1 h y se toma un volumen adecuado del sobrenadante para la inoculación. 7.2.4 Inóculo procedente de aguas superficiales. Se toma una muestra de un agua superficial adecuada. Si fuera necesario, se concentra la muestra por filtración sobre un papel de filtro grosero o por centrifugación. Se mantiene la muestra en condiciones aerobias y se utiliza, preferiblemente, el mismo día de su toma. Se emplea un volumen adecuado como inóculo. 7.3 Procedimiento de ensayo Se prepara un número suficiente de recipientes (6.1) con el fin de disponer de: – al menos dos recipientes de ensayo (símbolo FT) que contengan el compuesto de ensayo (7.1.1); – al menos dos recipientes para el ensayo en blanco (símbolo FB) que contengan el medio de ensayo y el inóculo; – al menos un recipiente destinado al control del procedimiento (símbolo FC) que contenga el compuesto de referencia (7.1.2); – si fuera necesario, un recipiente (símbolo FI) destinado a verificar un posible efecto inhibidor del compuesto de ensayo, que contenga la solución 7.1.3; – si fuera necesario, un recipiente (símbolo FS) para verificar la posible degradación abiótica, que contenga el compuesto de ensayo (7.1.1) pero no inóculo, esterilizado mediante autoclave o por adición de un compuesto inorgánico tóxico apropiado para inhibir la actividad microbiana. Se utiliza, por ejemplo, 1 ml/l de una solución de 10 g/l de cloruro de mercurio (II) (HgCl 2). Se añade la misma cantidad de sustancia tóxica dos semanas después del inicio del ensayo. Se añaden, en cada uno de los recipientes de ensayo las cantidades apropiadas de medio de ensayo (5.2) y de inóculo (7.2), según se indica en la tabla 1, de modo que se obtenga un volumen de ensayo final, por ejemplo, de 3 l. Es posible utilizar volúmenes finales de ensayo diferentes; en este caso, hay que adaptar todos los parámetros pertinentes así como el cálculo de los resultados del ensayo. Se conectan los recipientes al sistema de producción de aire exento de CO 2 (véase el anexo A). Se incuba a la temperatura de ensayo deseada (véase el capítulo 4) y se airean los recipientes durante 24 h para purgar el CO 2 del sistema. Durante todo el ensayo se agita con ayuda de un agitador magnético. Si se observa una excesiva formación de espuma, se sustituye la inyección de aire por una aireación del espacio de cabeza mientras se agita. Tras el período de preaireación, se conecta la salida de aire de cada recipiente a la trampa de CO 2 o al sistema de medida. Se añaden la muestra de ensayo (7.1.1) y el compuesto de referencia (7.1.2) en las concentraciones deseadas a los correspondientes recipientes, según lo indicado en la tabla 1 y se comienza el ensayo borboteando aire exento de CO 2 a través de los recipientes que contienen 3 l de medio, a un caudal comprendido entre 50 ml/min y 100 ml/min.


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Se mide la cantidad de CO 2 liberado de cada recipiente a intervalos de tiempo, dependiendo de la velocidad de evolución de CO 2, utilizando un método adecuado y suficientemente exacto (véase el anexo B). Si se alcanza un nivel de formación de CO 2 prácticamente constante (fase de meseta) y no se espera que se produzca una mayor degradación, se considera completado el ensayo. Usualmente, el período máximo de ensayo no debería sobrepasar los 28 d. Se prolonga el ensayo en una o dos semanas, si es obvio que la degradación ha empezado pero no se ha alcanzado la fase de meseta.

Tabla 1 Distribución final de los compuestos de ensayo y de referencia en los recipientes de ensayo Medio de ensayo (5.2)

Compuesto de ensayo (7.1.1)

Compuesto de referencia (7.1.2)

Inóculo

FT Compuesto de ensayo FT Compuesto de ensayo

+ +

+ +

-

+ +

FB Blanco FB Blanco

+ +

-

-

+ +

FC Control del inóculo

+

-

+

+

FI Control de inhibición (opcional)

+

+

+

+

FS Control de la degradación abiótica (opcional)

+

+

-

-

Recipiente

(7.2)

Se mide el pH el último día del ensayo, se acidifican todos los recipientes con un volumen entre 1 ml y 10 ml de ácido clorhídrico concentrado para descomponer los carbonatos y bicarbonatos y se purga el CO 2. Se continúa la aireación durante 24 h y posteriormente, se mide la cantidad de dióxido de carbono producida en cada uno de los recipientes. NOTA 1 – Durante la manipulación de las muestras para la medida regular del CO2 en las trampas, no se puede descartar que, especialmente en el caso de determinaciones de CID, pequeñas cantidades de CO 2 atmosférico sean incluidas y añadidas durante el ensayo. Normalmente, esto no tiene ningún efecto sobre los resultados del ensayo, ya que se restan las cantidades de CO 2 ya presentes en los recipientes correspondientes al blanco. Sin embargo, en el caso del control de eliminación abiótica (recipiente FS), este hecho puede hacer pensar en una degradación aparente e injustificada. Por tanto, se recomienda determinar el desprendimiento de CO2 a partir del recipiente FS sólo al final del ensayo. NOTA 2 – Si se mide la eliminación de COD para disponer de datos complementarios sobre la biodegradabilidad de un compuesto a analizar soluble en agua, o si se utiliza un método analítico especifico de una sustancia para determinar la biodegradabilidad primaria, se utiliza la información indicada en el anexo D.

8 CÁLCULO 8.1 Cantidad teórica de dióxido de carbono contenida en el compuesto a analizar La cantidad teórica, en miligramos, de dióxido de carbono (CO 2T) formado en los recipientes de ensayo viene dada por la ecuación (1): CO 2 T

ρ C

VL

44 12

(1)

donde ρ C

es la concentración de carbono orgánico del compuesto de ensayo en el recipiente de ensayo, en miligramos por litro, medida o calculada a partir de la solución madre del compuesto a analizar (7.1.1);

V L

es el volumen de solución de ensayo contenido en el recipiente de ensayo, en litros;

44 y 12 son la masa molecular relativa del CO 2 y la masa atómica del carbono, respectivamente, que sirven para calcular la cantidad de CO 2 a partir del carbono orgánico medido. El CO2T del compuesto de referencia y de la solución control de inhibición (7.1.3) se calculan de modo similar.


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8.2 Porcentaje de biodegradación El porcentaje de degradación Dm (%) en cada recipiente de ensayo F T, para cada intervalo de medida se determina mediante la ecuación (2): Dm

mT t m Bt 100 CO 2 T

(2)

donde ΣmTt

es la masa, en miligramos, de CO 2 liberado en el recipiente F T, desde el comienzo del ensayo hasta el tiempo t.

ΣmBt

es la masa, en miligramos, de CO 2 liberado en los controles de blanco F B, desde el comienzo del ensayo hasta el tiempo t.

Se calcula de manera similar el grado de biodegradación del compuesto de referencia en el recipiente de control del inóculo FC y, si procede, el de la mezcla del compuesto de ensayo y de compuesto de referencia en el control de inhibición FI, así como el grado de biodegradación del compuesto de ensayo, sin sustraer el blanco, en el control de eliminación abiótica, F S. NOTA – Si se mide la eliminación de COD y la biodegradación primaria mediante análisis específicos, es recomendable que los resultados se calculen conforme al anexo D.

8.3 Expresión de resultados Se presentan en forma de tabla los valores de CO 2 liberado (ΣmTt y ΣmBt) y los porcentajes de biodegradación (D m) para cada intervalo de medida y para cada recipiente de ensayo. Se traza una curva de biodegradación, en porcentaje, en función del tiempo y se indican las fases de latencia y de degradación. Opcionalmente, se representa una curva representativa del desprendimiento neto de dióxido de carbono en función del tiempo. Si se obtienen resultados comparables en los dos recipientes de ensayo FT (con una diferencia < 20%) se traza la curva representativa de la degradación media; en caso contrario, se traza una curva para cada recipiente (véase el ejemplo descrito en el anexo C). Se traza de la misma forma una curva representativa de la biodegradación del compuesto de referencia FC y, si estuvieran incluidos en el ensayo, del control de degradación abiótica FS y del control de inhibición FI. Se determina el valor medio del porcentaje de biodegradación en la fase de meseta o se utiliza el valor más alto, por ejemplo, cuando la curva descienda en la fase de meseta, y en el informe de ensayo este nivel máximo de biodegradación se indica como "tasa de biodegradación del compuesto de ensayo". La información relativa a la toxicidad del compuesto de ensayo puede resultar de utilidad en la interpretación de los resultados de ensayo que muestren una baja biodegradación. Si en el recipiente FI el porcentaje de degradación < 25% y se observa una degradación insuficiente del compuesto de ensayo, puede entonces suponerse que el compuesto a analizar tiene un efecto inhibidor. En este caso, se debería repetir el ensayo utilizando una concentración menor o empleando otro inóculo. Si en el recipiente FS (control de la degradación abiótica, en el caso de que se incluya en el ensayo) se observa una cantidad significativa de liberación de CO 2 (> 10%), pueden haber tenido lugar procesos de degradación abiótica.

9 VALIDEZ DE LOS RESULTADOS 9.1 Criterios de validez El ensayo se considera válido si: a) el porcentaje de degradación obtenido al decimocuarto día en el recipiente FC (control del inóculo) es superior al 60%; b) la cantidad de CO2 desprendido por la solución de blanco, FB, al finalizar el ensayo es del orden de 40 mg/l y no excede los 70 mg/l para un volumen de ensayo de 3 l;


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c) la cantidad de CID al principio del ensayo es inferior al 5% de la cantidad de carbono orgánico del compuesto a analizar. Si no se satisface alguna de las condiciones a) o b), se debería repetir el ensayo con otro inóculo o bien utilizando un inóculo mejor pre-acondicionado. Si no se satisface la condición c), se verifica que el aire utilizado en la aireación de los recipientes se encuentra completamente exento de CO 2.

9.2 Inhibición Si el recipiente FI (control de inhibición) está incluido en el ensayo, se considera que el compuesto de ensayo tiene un efecto inhibidor cuando el porcentaje de degradación del compuesto de referencia en el recipiente FI es inferior al 40% al finalizar el ensayo. En ese caso, es recomendable repetir el ensayo con una menor concentración del compuesto de ensayo.

9.3 Valor de pH Si, una vez finalizado el ensayo, el valor del pH se encuentra fuera del intervalo comprendido entre 6 y 8,5 y si el porcentaje de degradación del compuesto de ensayo es inferior al 60%, es recomendable repetir el ensayo con una menor concentración del compuesto de ensayo o emplear la modificación del ensayo que se describe en el anexo D de este método.

10 INFORME DE ENSAYO El informe de ensayo debe contener, al menos, la siguiente información: a) una referencia a esta norma internacional y al anexo en caso de utilización de una modificación; b) toda la información necesaria para la identificación del compuesto de ensayo; c) todos los datos (presentados, por ejemplo, en forma tabulada) que se han obtenido, así como la curva de degradación; d) la concentración del compuesto de ensayo utilizado y el CO2T y, en el caso de compuestos solubles en agua, el COD para esta concentración; e) el nombre del compuesto de referencia utilizado y la degradación obtenida con este compuesto; f) el origen, las características, la concentración o el volumen del inóculo utilizado, así como toda la información relativa a cualquier pretratamiento; g) las características principales del sistema utilizado para el análisis del CO2; h) la temperatura de incubación del ensayo; i) si estuviera incluido, el porcentaje de eliminación de COD o la biodegradación primaria; j) si estuviera incluido, el porcentaje de degradación obtenido en el recipiente FS (eliminación abiótica); k) si estuviera incluido, el porcentaje de degradación en el recipiente FI (control de inhibición) y una indicación acerca de la toxicidad del compuesto de ensayo; l) las razones de un eventual rechazo del ensayo; m) toda modificación del procedimiento operativo así como cualquier circunstancia que pueda haber influido en los resultados.


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ANEXO A (Informativo) FUNDAMENTO DE UN SISTEMA DE ENSAYO PARA LA MEDIDA DEL DIÓXIDO DE CARBONO (EJEMPLO) Se disponen los recipientes en serie tal y como se muestra en la figura A.1 y se conectan con tubos impermeables al gas. Se airea el sistema de ensayo con aire exento de CO 2 a un flujo comprendido entre 50 ml/min y 100 ml/min y a una presión constante baja. Se cuentan las burbujas de gas o se emplea un controlador de flujo adecuado para comprobar el flujo. Se utiliza aire sintético exento de CO 2 o aire comprimido. En este segundo caso, el CO 2 se elimina haciendo pasar el aire por un recipiente lleno con sosa en seco, o a través de por lo menos dos frascos lavadores de gases que contengan, por ejemplo, 500 ml de una solución acuosa de NaOH ( c = 10 mol/l). Se utiliza un segundo recipiente que contenga 100 ml de solución de Ba(OH) 2 (c = 0,0125 mol/l) para indicar mediante la formación de turbiedad la existencia de CO 2. Un recipiente vacío que se coloca entre el indicador y el recipiente de ensayo colocado después, evita el transporte de líquido. El CO 2 liberado en el recipiente de ensayo, como consecuencia de la biodegradación, se absorbe en los recipientes sucesivos, tal y como se describe en el anexo B.

Leyenda: 1 Aire comprimido 2 Controlador de flujo 3 Trampa de dióxido de carbono (NaOH) 4 Indicador de dióxido de carbono [Ba(OH)2] 5 Recipientes de ensayo 6 Agitador 7 Trampa de dióxido de carbono [Ba(OH) 2 o (NaOH)]

Fig. A.1


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ANEXO B (Informativo) EJEMPLOS DE DETERMINACIÓN DEL DIÓXIDO DE CARBONO LIBERADO B.1 Determinación del CO2 por medida del CID El CO2 liberado se absorbe en una solución de hidróxido de sodio (NaOH) y se determina como carbono inorgánico disuelto (CID) utilizando, por ejemplo, un analizador de COD, sin incineración ni oxidación. Se prepara una solución de NaOH ( c = 0,05 mol/l) en agua desionizada. Se mide el CID de esta solución y se considera éste el valor de blanco ( ρ B) en el cálculo de la producción de CO 2. Se conectan en serie dos recipientes de absorción con el recipiente de ensayo; cada uno de ellos debe contener al menos 100 ml de la solución de NaOH. Se tapa la salida del último recipiente con un pequeño sifón para evitar la introducción de CO 2 que procede del aire en la solución de NaOH. Los días que se realice la determinación de CO 2, se retira el recipiente que está más próximo al recipiente de ensayo y se toma una muestra suficiente para la medida del CID (p.ej. 10 ml). Se vuelve a colocar en el lugar del segundo y se añade uno nuevo que contenga solución de NaOH de preparación reciente. El último día se mide el CID en los dos recipientes tras la acidificación de la solución de ensayo. Se calcula la cantidad de CO 2 producida a partir de la ecuación (B.1): mTt

ρT

ρ B

 3 ,67

10

(B.1)

donde mTt

es la masa, en miligramos, de CO 2 liberado en el recipiente Ft desde el comienzo del ensayo hasta el tiempo t ;

ρ T

es la concentración de CID medida de la solución de NaOH en el recipiente F T, en el instante t , en miligramos por litro;

ρ B

es la concentración de CID medida de la solución de NaOH en el recipiente de control de blanco, F B, en el instante t , en miligramos por litro;

3,67 es la relación entre las masas moleculares relativa y la masa atómica CO 2 /C (44/12); 10

es el factor de corrección, expresado en litros a la –1, para un volumen de 100 ml de solución de NaOH. En caso de utilización de otros volúmenes, es preciso adaptar este factor.

B.2 Método volumétrico con hidróxido de bario El CO2 liberado reacciona con el hidróxido de bario [Ba(OH) 2.8H2O] y forma un precipitado de carbonato de bario (BaCO3) [ecuación (B.2)]. La cantidad de CO 2 liberado se determina por valoración del Ba(OH) 2 restante con ácido clorhídrico [ecuación (B.3)]. CO2 + Ba(OH) 2 → BaCO3 + H2O

(B.2)

Ba(OH)2 + 2 HCl → BaCl2 + 2H2O

(B.3)

Se disuelven 4,0 g de Ba(OH) 2.8H2O en 1 000 ml de agua desionizada o destilada a fin de obtener una solución de 0,012 5 mol/l. Cuando se está realizando una serie de ensayos, se recomienda preparar de una sola vez una cantidad suficiente de solución, por ejemplo 5 l. Se filtra hasta ausencia de materias sólidas y se determina la normalidad exacta por valoración con una solución patrón de HCl para el cálculo de los resultados del ensayo. Se conserva bien cerrada la solución clarificada para evitar la absorción del CO 2 del aire.


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Se disuelven 50 ml de solución de HCl ( c = 1 mol/l) (36,5 g/l) en 1 000 ml de agua destilada o desionizada para obtener una solución de 0,05 mol/l. Para determinar el punto final se utiliza fenolftaleína como indicador o un valorador automático. Al inicio del ensayo se introducen exactamente 100 ml de la solución de Ba(OH) 2 en cada uno de los tres recipientes de absorción. Se modifican los volúmenes de solución absorbente, en función del carácter y de la cantidad del compuesto a analizar. Regularmente, cada día de medida, se retira el recipiente más próximo al de ensayo para valoración. Esta operación debería efectuarse a medida que sea necesario, por ejemplo, cuando el primer recipiente de absorción esté turbio debido a la precipitación de BaCO 3 y antes de que se observe turbiedad en el segundo recipiente. Al principio del ensayo, normalmente es necesario efectuar la valoración cada dos días y, posteriormente, una vez que se ha alcanzado la fase de meseta, cada cinco días. Después de retirar el recipiente de absorción, se cierra inmediatamente con un tapón para evitar la entrada de CO 2 proveniente del aire. Se acercan los dos recipientes restantes hasta una posición más próxima al recipiente de ensayo y se coloca al final de la serie un nuevo recipiente relleno con solución fresca de Ba(OH)2. Se hace exactamente lo mismo con todos los recipientes que contienen el compuesto de ensayo, el de referencia, el blanco, la solución de control de inhibición y el control del inóculo. Inmediatamente después de retirar el recipiente, se valora la totalidad de su contenido (100 ml) o dos o tres porciones de la solución de Ba(OH) 2 con la solución de HCl. Se anotan los volúmenes de solución de HCl necesarios para la neutralización. La masa de CO 2 retenida en el recipiente de absorción viene dada por la ecuación (B.4): mT

 2cBa V B0 V  V A BT  cHCl 22  c V BZ   HCl

(B.4)

donde mT es la masa de CO 2, en miligramos, retenida en el recipiente de absorción F T; cHCl es la concentración exacta de la solución de HCl, en moles por litro; cBa es la concentración exacta de la solución de Ba(OH) 2, en moles por litro; V B0 es el volumen, en mililitros de la solución de Ba(OH) 2 al comienzo del ensayo; V BT es el volumen, en mililitros, de la solución de Ba(OH) 2 en el instante t antes de la filtración; V BZ es el volumen, en mililitros, de las alícuotas de la solución de Ba(OH) 2 utilizadas para la valoración; V A es el volumen, en mililitros, de la solución de HCl utilizado para la valoración de la solución de Ba(OH) 2;

22 es la mitad de la molaridad del CO 2. Cuando se cumplan las siguientes condiciones: – el volumen de solución de Ba(OH)2 antes y después de la absorción es exactamente 100 ml y se usa la totalidad de la solución para la valoración ( V B0 = = V BT = V BZ); – la concentración de la solución de Ba(OH) 2 es exactamente cBa = 0,0125 mol/l; – la concentración de la solución de HCl es exactamente cHCl = 0,05 mol/l; se utiliza la ecuación (B.5): mT = 1,1 (50 – V A)


(B.5)

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ANEXO C (Informativo) EJEMPLO DE UNA CURVA DE BIODEGRADACIÓN

Figura C.1 - Biodegradación de la anilina en el ensayo de desprendimiento de CO2


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ANEXO D (Informativo) DETERMINACIÓN COMBINADA DE DIÓXIDO DE CARBONO Y DEL COD D.1 Campo de aplicación y fundamento Esta variante del ensayo de producción de CO 2 combina dos parámetros diferentes e independientes en un único sistema de ensayo: la eliminación del COD y la producción de CO 2. Este último es un parámetro inequívoco de la biodegradación y, por lo tanto, permite disponer de información más fiable. Esta variante del ensayo puede utilizarse solamente para compuestos de ensayo que sean suficientemente solubles en agua y está especialmente recomendado cuando se requiere un potencial de degradación elevado ya que permite concentraciones de inóculo y de compuesto a analizar más altas. Este método está también recomendado para determinar la biodegradación y no solamente la eliminación abiótica de los compuestos adsorbentes, en lugar de un ensayo basado únicamente en la eliminación del COD como el descrito en la Norma ISO 9888. Se emplea el mismo principio de medida que en el caso del CO 2 pero, además, se determina también el COD al principio y al final del ensayo o en muestras que se van tomando regularmente durante el período de incubación y, después se calcula la eliminación de COD. Si se dispone de un método analítico específico de la sustancia, puede utilizarse para determinar la biodegradación primaria del compuesto de ensayo, cuando ésta se mide, además de, o en lugar de, el COD. Si se emplea esta variante del ensayo de producción de CO 2, debe quedar reflejado en el informe de ensayo.

D.2 Reactivos En caso de utilizar concentraciones de inóculo y de compuesto a analizar más elevadas, tal y como se recomienda en este anexo, es preciso aumentar la capacidad tampón y el contenido en nutrientes del medio inorgánico. En este caso, se utiliza el siguiente medio de ensayo optimizado: a) Solución a) Se disuelven: dihidrógenofosfato de potasio anhidro (KH 2PO4)

13,6 g

hidrógeno fosfato de disodio dihidrato (Na 2HPO4·2H2O)

26,9 g

cloruro de amonio (NH 4Cl)

2,0 g

en agua (5.1), y se enrasa a

1 000 ml

b) Solución b) Se disuelven 22,5 g de sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO 4·7H2O) en agua (5.1) y se enrasa a 1 000 ml. c) Solución c) Se disuelven 36,4 g de cloruro de calcio dihidratado (CaCl 2·2H2O) en agua (5.1) y se enrasa a 1 000 ml. d) Solución d) Se disuelven 0,25 g de cloruro de hierro (III) hexahidratado (FeCl 3·6H2O) en agua (5.1) y se enrasa a 1 000 ml. La solución se prepara inmediatamente antes de su utilización, o se añade una gota de ácido clorhídrico concentrado (HCl) para evitar la formación de precipitados.


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e) Solución e) (Solución de elementos traza, opcional) Se disuelven en 10 ml de solución acuosa de ácido clorhídrico (HCl) (25%, 7,7 mol/l), en el siguiente orden: 70 mg de ZnCl2, 100 mg de MnCl 2.4H2O, 6 mg de H 3BO3, 190 mg de CoCl 2.6H2O, 3 mg de CuCl 2.2H2O, 240 mg de NiCl2.6H2O, 36 mg de Na 2MoO4.2H2O, 33 mg de Na2WO4.2H2O, 26 mg de Na2SeO3.5H2O y enrasar a 1 000 ml con agua (5.1). Para 1 litro de medio de ensayo, se añaden aproximadamente 800 ml de agua (5.1), 100 ml de solución a) y 1 ml de cada una de las soluciones de la b) a la e). Se enrasa a 1 000 ml con agua (5.1) y se mide el pH.

D.3 Inóculo Se utiliza el mismo inóculo que en el apartado 7.2. Sin embargo, puede aumentarse la concentración de lodos activados hasta 150 mg/l de sólidos en suspensión. En este caso se utiliza el medio de ensayo optimizado.

D.4 Procedimiento de ensayo Se dispone un número adecuado de recipientes tal y como se describe en el apartado 7.3, en el ambiente de ensayo (capítulo 4). Se utilizan recipientes de ensayo conforme a lo indicado en el apartado 6.1, provistos de barras imantadas para agitación. Si se van a tomar muestras durante el ensayo, cada recipiente debe disponer de una salida lateral provista de una llave apropiada para tomar muestras para el análisis del COD o análisis específico de la sustancia. En este caso no se recomienda la agitación. Se conectan los recipientes de incubación a los recipientes de absorción tal y como se describe en el anexo B. Se añade el medio de ensayo estándar o el medio optimizado y el inóculo. Se añaden normalmente 40 mg/l de carbono orgánico del compuesto de ensayo (7.1.1) o del compuesto de referencia (7.1.2). Se utiliza un volumen de ensayo final, por ejemplo, de 1 500 ml. Se comienza la incubación aireando y agitando las mezclas. En el caso de materias en suspensión a un nivel de 150 mg/l, se airea con un flujo de aire, exento de CO 2, entre 150 ml/h y 300 ml/h tal y como se describe en el anexo A. Se toman muestras de volumen suficiente (p. ej. 15 ml), a intervalos de tiempo regulares, tal y como se describe en el apartado 7.3 y se determina en ellas el COD, al menos por duplicado (por ejemplo, conforme a la Norma ISO 8245). Se determina el CO2 liberado tal y como se describe en el apartado 7.3 y en el anexo B. En caso de que se tomen muestras para análisis específicos de la sustancia o de COD, hay que tener en cuenta cada día de muestreo el cambio en CO 2T en el recipiente de ensayo. En este caso se debe adaptar el valor V L en la ecuación (1) (8.1) al nuevo volumen. Si no se debe controlar la eliminación del COD durante todo el ensayo, se toman muestras únicamente al principio y al final del mismo (antes de la acidificación) y se mide el COD. En este caso, no es preciso emplear recipientes especiales. Si existe un método de ensayo analítico específico de la sustancia y si debe determinarse la biodegradación primaria, se mide la concentración del compuesto a analizar en las muestras tomadas para el análisis del COD.

D.5 Cálculo de la biodegradación basada en la producción de CO2 Se calcula el resultado de ensayo tal y como se indica en el apartado 8.1.

D.6 Cálculo de la eliminación de COD Se calcula, para cada recipiente de ensayo F T, el porcentaje de eliminación de carbono orgánico disuelto, DC, por medio de la ecuación (8): DC

  1

ρ CTt ρ CT0

  100 ρ CB0 

ρ CBt


(8)

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donde ρ CT0

es la concentración de COD, en miligramos por litro, en el instante 0 y en el recipiente de ensayo F T;

ρ CB0

es la concentración de COD, en miligramos por litro, en el instante 0 y en el recipiente de control de blanco, F B;

ρ CTt

es la concentración de COD, en miligramos por litro, en el instante t y en el recipiente de ensayo F T;

ρ CBt

es la concentración de COD, en miligramos por litro, en el instante t y en el recipiente de control de blanco, F B;

En presencia de sustancias adsorbentes, es importante determinar caso el valor de ρ B0.

ρ 0

antes de la adición del inóculo e ignorar, en este

Se calcula de la misma manera la biodegradación del compuesto de referencia, F C y, en su caso, del control de eliminación abiótica, F S y del control de inhibición F I.

D.7 Cálculo de la degradación primaria Cuando se realizan análisis específicos del compuesto de ensayo, se calcula el porcentaje de degradación primaria, DS, del compuesto de ensayo a partir de la ecuación (9). DS

ρS

ρ T

100

(9)

ρ S

donde ρ T

es la concentración del compuesto de ensayo, en miligramos por litro, en el recipiente de ensayo F T, en el instante t ;

ρ S

es la concentración del compuesto de ensayo, en miligramos por litro, en el recipiente F BS, en el instante t .

D.8 Expresión de los resultados Se recopilan y manejan los datos, por ejemplo, representando una curva de eliminación, tal y como se describe en el apartado 8.3.

D.9 Criterios de validez Véase el apartado 9.1. Si se ha utilizado una concentración de inóculo más elevada (150 mg/l de materia seca, véase el apartado D.3), la concentración de CO 2 en el blanco al final del ensayo debería ser de aproximadamente 150 mg/l.


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