ANALISIS KUALITATIF DAN KUANTITATIF VITAMIN C MENGGUNAKAN HPLC Febry Difta Rosalina 12/331329/PA/14596 INTISARI Percobaan analisis kualitatif dan kuantitatif vitamin C menggunakan HPLC ini telah dilakukan dengan tujuan untuk mempelajari cara kerja alat HPLC, dan untuk melakukan analisis vitamin C dalam jus buah dan tablet vitamin C dengan HPLC.
ANALISIS KUALITATIF MENGGUNAKAN HPLC I.
II.
DAN
KUANTITATIF
VITAMIN
C
TUJUAN PERCOBAAN 1. Mempelajari cara kerja HPLC 2. Melakukan analisis vitamin C dalam jus buah dan tablet vitamin C dengan HPLC DASAR TEORI Vitamin C (C6H8O6) merupakan master of nutrient. Macam-macam bahan makanan yang menjadi sumber vitamin C yakni hati, ginjal, sayur-sayuran dan buah-buahan segar terutama jeruk baik yang masih dalam bentuk buah asli maupun sudah berupa minuman segar. Asupan gizi rata-rata sehari sekitar 30 sampai 100 mg vitamin C yang dianjurkan untuk orang dewasa. Namun, terdapat variasi kebutuhan dalam individu yang berbeda (Sweetman 2005). Buah yang masih mentah mengandung vitamin C yang cukup banyak sehingga semakin tua buah maka semakin berkurang kandungan vitamin C-nya. Vitamin C juga disebut asam askorbat dapat disintesis dari D-glukosa atau Dgalaktosa merupakan gula heksosa (Winarno , 1981). Susunan kimia vitamin C ditemukan pada tahun 1933 oleh ilmuwan Inggris dan Swiss. Isolasi asam askorbat mula-mula ditemukan oleh King dari USA dan Szent-Gyorgy dari Hungaria. Vitamin ini mempunyai dua bentuk, yaitu bentuk oksidasi (bentuk dehydro) dan bentuk reduksi. Kedua bentuk ini mempunyai aktivitas biologi. Dalam makanan bentuk reduksi yang terbanyak. Banyak dehydro dapat terus teroksidasi menjadi diketogulonic acid yang inaktif.
Keadaan vitamin C inaktif ini sering terjadi pada proses pemanasan (bila sayur-sayuran dimasak). Di dalam suasana asam vitamin ini lebih stabil daripada dalam basa yang menjadi inaktif (diketogulonic acid) (Prawirokusumo, 1991). Teknik HPLC merupakan suatu metode kromatograf cair-cair, yang dapat digunakan baik untuk keperluan pemisahan maupun analisis kuantitatif. Analisis kualitatif dengan teknik HPLC didasarkan pada pengukuran luas area standar. Pada prakteknya, metode pembandingan area standar dan sampel kurang menghasilkan data yang akurat bila hanya melibatkan suatu konsentrasi standar. Oleh karena itu, dilakukan dengan menggunakan teknik kurva kalibrasi. (Wiji, dkk. 2010 : 17). Bila dibandingkan terhadap kromatograf gas-cair/gasliquid chromatography (GLC), maka HPLC lebih bermanfaat untuk isolasi zat tidak mudah menguap, demikian juga zat yang secara termal tidak stabil. Tetapi ditinjau dari kecepatan dan kesederhanaan, GC lebih baik. Kedua teknik ini komplementer satu sama lainnya, keduanya efsien, sangat selektif hanya memerlukan sampel berjumlah sedikit serta keduanya dapat digunakan untuk analisis kuantitatif (Khopkar, 2003).
III.
METODE PERCOBAAN III.1 Alat Dan Bahan III.2 Cara Kerja III.2.1 Analisis kualitatif Mula-mula buah jeruk yang dianalisis vitamin C-nya dikupas dan ditimbang. Kemudian buah jeruk tadi diperas dan diukur volumenya. Setelah itu diambil 1 mL yang selanjutnya diencerkan dengan akuades sampai 100 mL. Terakhir hasil pengenceran kemudian disaring dan diambil 1 mL yang dimasukkan ke dalam eppendorf untuk selanjutnya dianalisis dengan HPLC. III.2.2 Analisis kuantitatif Pertama dibuat larutan induk dengan diencerkannya 0.05 g asam askorbat dalam 50 mL akuades.
IV.
HASIL DAN PEMBAHASAN IV.1 Hasil Percobaan Waktu Retensi
Konsentrasi
Luas Area
Berat sampel : Volume sampel : Luas area sampel : Kadar sampel : IV.2
Pembahasan Percobaan analisis kualitatif dan kuantitatif vitamin C menggunakan HPLC ini dilakukan dengan tujuan untuk mempelajari cara kerja alat HPLC dan untuk melakukan analisis vitamin C dalam jus buah dan tablet vitamin C dengan HPLC. Vitamin C merupakan vitamin yang mudah rusak, vitamin ini dapat terbentuk sebagai asam L-askorbat dan asam L- dehidroaskorbat. Vitamin ini banyak disintesis secara alami baik dari
hewan, tanaman dan mudah larut dalam air. Vitamin C dapat diserap cepat dari alat pencernaan dan masuk ke dalam saluran darah dialirkan keseluruh tubuh. Pada umumnya tubuh menahan vitamin C dapat sangat sedikit. Kelebihannya di buang melalui urin. Dalam vitamin C ini terkandung senyawa yang dominan yaitu asam askorbat. Struktur asam askorbat : Analisis vitamin C dalam bahan pangan maupun suplemen makanan sangat berguna untuk informasi perancangan diet, dimana penetapan kadar vitamin C dalam bahan pangan dapat di analisis dengan berbagai metode, salah satunya dengan metode HPLC. Metode HPLC ini digunakan sebagai dasar dari analisis vitamin C yaitu untuk menentukan susunan kimianya. Selain itu metode HPLC ini dipilih karena metode ini dapat menganalisis cuplikan yang tidak menguap dan labil pada suhu tinggi, tidak terbatas pada senyawa organik tapi mampu menganalisis senyawa anorganik, mampu menganalisis cuplikan yang mempunyai molekul tinggi(beratnya), mampu menganalisis cuplik yang mempunyai titik didih yang sangat tinggi seperti polimer. Prinsip dasar dari penggunaan HPLC (High Performance Liquid Chromatograph) merupakan pemisahan analit-analit berdasarkan kepolarannya dan perbedaan distribusi komponen pada sampel diantara fasa gerak cair dan fasa diam cair. Dimana pada percobaan analisa vitamin C ini yang menjadi fase gerak adalah sampel dan standart sedangkan yang menjadi fase diam adalah kolom. Prinsip kerja alat HPLC sendiri adalah pertama fasa gerak dialirkan melalui kolomkedetektor dengan bantuan pompa. Kemudian cuplikan dimasukan ke dalam aliranfasa gerak dengan cara penyuntikan. Didalam kolom terjadi pemisahan komponen-komponen campuran karena perbedan kekuatan interaksi antara
solut-solut terhadapfasa diam. Solut-solut yang kurang kuat interaksinya dengan fasa diam akan keluardari kolom terlebih dahulu. Sebaliknya solut-solut yang interaksinya kuat dengan fasadiam akan keluar dari kolom lebih lama. Setiap komponen yang campuran yangkeluar kolom dideteksi oleh detektor kemudian direkam dalam bentuk kromatogram. Prinsip dasar dari penggunaan HPLC (High Performance Liquid Chromatograph) merupakan pemisahan analit-analit berdasarkan kepolarannya. Pada percobaan analisa tablet vitamin C dengan menggunakan HPLC terdapat fase gerak dan fase diam. Dimana yang menjadi fase gerak adalah sampel dan standart dan yang menjadi fase diam adalah kolom. Dari hasil percobaan vitamin C dengan berbagai jenis, yaitu Vit C-Pot, B-force, C-IPI, Xon-ce, dan vitacimin diketahui bahwa dalam setiap jenis vitamin C yang di uji keberadaan vitamin C memang ada, yang diketahui dari waktu munculnya setiap peak dari masing-masing sampel, yaitu pada menit 1,589 dimana jika benar ada vitamin C peak muncul antara menit 1 – 3. Dari segi kadar vitamin C, kadar yang diperoleh dari hasil HPLC tidak sesuai dengan kadar pada label untuk masingmasing sampel vitamin C. - Untuk Vit C-Pot yang diketahui pada label kadar vitamin C nya sebesar 25 mg, sementara pada hasil HPLC kadar dari Vit C-Pot tidak terbaca. - Untuk B-force diketahui pada label kadar vitamin C nya sebesar 1000 mg, sementara pada hasil HPLC kadar vitamin C dari B-force sebesar 410.8 ppm atau 410.8 mg/L. - Untuk C-IPI diketahui kadar vitamin C pada label sebesar 50 mg, sementara pada hasil HPLC kadar vitamin C dari C-IPI sebesar 402.9 ppm atau 402.9 mg/L. - Untuk Xon-ce diketahui kadar vitamin C pada label sebesar 500 mg, sementara dari hasil HPLC kadar vitamin C pada Xon-ce sebesar 28.7 ppm atau 28.7 mg/L. - Untuk Vitacimin diketahui kadar vitamin C
V. VI.
VII. VIII.
pada label sebesar 500 mg, sementara hasil HPLC menunjukkan kadar vitamin C pada Vitacimin sebesar 33.9 ppm atau 33.9 mg/L. Ketidaksesuaian kadar vitamin C pada label dengan hasil HPLC dikarenakan praktikan yabg kurang teliti saat melakukan pengenceran dan kurang nya pemahaman praktikan tentang HPLC. KESIMPULAN DAFTAR PUSTAKA Khopkar, S.M., (2003), Konsep Dasar Kimia Analitik, UIPress, Jakarta Prawirokusumo, Soeharto, Prof. Dr. M.Sc., 1991, Biokimia Nutrisi dan Vitamin, BPFE, Yogyakarta. Sweetman SC. 2005. Martindale: The Complete Drug Reference, 34 th ed. London, UK : Pharmaceutical Press. Wiji, dkk. (2010). Penuntun Praktikum Kimia Analitik Instrumen. Bandung : Jurusan Pendidikan Kimia FPMIPA Universitas Pendidikan Indonesia. Winarno R.G, Aman. 1981. Fisiologi Lepas Panen. Jakarta: Penerbit Sastra Hudaya.
LEMBAR PENGESAHAN LAMPIRAN
