EL MICROSCOPIA Y TÉCNICAS PARA HACER PREPARACIONES PREP ARACIONES MICROSCÓPICAS Practica#2 Llamas Mezquita wislays, Castro González Emelina, Álvarez Ballesteros Lucenith, Mora Quiñonez Wendy INTRODUCCIÓN El presente informe de laboratorio de microbiología titulado el microscopio y técnicas para hacer preparaciones microscópicas pretende exponer métodos y conceptos de gran relevancia a la hora de preparar muestras con la ayuda del microscopio óptico, de manera que optimice el entendimiento de seres supremamente pequeños es decir microorganismos que no pueden ser vistos por el ojo humano y que para nosotros estudiantes de ingeniería ambiental nos compete estudiar porque a causa de la acción de estos microorganismos se presentan todos y cada uno de los fenómenos positivos y negativos en el equilibrio natural del planeta tierra . Las ciencias a través de los tiempos han generado diversos medios técnicos tangibles e intangibles que nos han permitido avanzar en distintos aspectos en la investigación investigaci ón de nuestros orígenes naturales. Para el caso de la microbiología ha sido necesario generar herramientas de observación de seres imposibles de detallar con la vista humana y mucho menos determinar e identificar con claridad morfologías propiedades físicas y químicas específicas que poseen cada muestra estudiada. El estudio de los microorganismos a partir del microscopio es muy importante porque de estas invisibles formas de vida se genera todo aquello que conforma la vida. Remontándonos en las antigüedades era casi imposible creer que existían diminutos organismos vivos generando y degenerando vida en la tierra, de manera que se engendró incógnitas a cerca de nuestro origen que tomaron forma a partir del estudio y diseño del microscopio óptico diseñado por primera vez por Anton Van Leeuwenhoek quien construyo el microscopio en virtud de las leyes de formación ópticas aumentadas a través de lentes convergentes ,que permitieron obtener imágenes detalladas de los microorganismos. Esto gran avance en materia de instrumentos de observación influyo grandemente en el avances de las ciencias biológicas a nivel mundial. MATERIALES Y PROCEDIMIENTO En el microscopio microscopi o y técnicas para hacer preparaciones microscópicas microscópi cas se emplearon Microscopio óptico compuesto, Frascos con goteros con agua destilada, Porta objetos y cubre objetos, papel impreso periódico con letra pequeña. Corcho, lana. El polen de la flor, hoja de afeitar y polvillo de ala de mariposa; el procedimiento descrito fue realizado de la siguiente manera. 1. PREPARACION DEL CORCHO Para todos los grupos, hicimos varios cortes delgados de corcho utilizando un bisturí, en el porta objeto colocamos una gota de agua destilada y en él colocamos el pedazo de corcho y se le coloco el cubre objeto teniendo en cuenta
que no se le formaran burbujas de aire ni se levantara y observamos en 4x, 10x y 40x. 2. LETRA IMPRESA Buscamos en el periódico la letra “e” recortamos la más pequeña que encontramos y la colocamos en el porta objeto, procedimos a agregarle una gota de agua destilada la cubrimos con el cubre objeto y observamos en 4x, 10x. 3. FIBRA DE LANA Colocamos varias fibras de la lana en el porta objeto y le adicionamos la gota de agua destilada y observamos. 4. GRANOS DE POLEN Pusimos unos granos de polen de una flor en el porta objeto le agregamos agua y observamos. 5. POLVILLO DE ALA DE MARIPOSA Agitamos una mariposa suavemente contra el porta objeto, con golpes suaves para que no se maltratara y saliera el polvillo de sus alas después le agregamos una gota de aguas destilada y observamos en 4x, 10x y 40x. DISCUSION DE RESULTADOS 1. CORCHO IMAGEN AUMENTADA 4 VECES (40) Se puede apreciar una figura punteada ocasionada por el corte que se hizo sobre el corcho, además se logra observar un esparcimiento de líneas cortas o puntos y podemos observas toda la muestra desplazando hacia delante y hacia atrás.
IMAGEN AUMENTADA 10 VECES (100) La esparcimiento de líneas y puntos se sigue presentando pero mucho más fibrosa y en 10 pudimos observar mucho más claro y más cerca el corcho. IMAGEN AUMENTADA 40 VECES (400) Se puede apreciar una especie de malla muy fibrosa formada aleatoriamente, lo cual revela la estructura del corcho.
2. LETRA La imagen fue colocada en el portaobjetos de tal forma que podía leerse a simple vista; pero en la imagen mostrada por el microscopio la letra E no podía leerse, es decir estaba invertida horizontalmente y verticalmente. Esto es motivado principalmente por los espejos o lentes convergentes que permiten la amplificación de la imagen a través de reflexión y refracción de luz , es decir las líneas de la luz emitida por la fuente van todas hacia el foco del lente ubicado en el centro de este, y van en línea recta; entonces cuando pasan al otro lado del lente quedan en el eje contrario produciendo así la inversión de la imagen, como estos rayos comienzan desde todos los puntos de la línea del círculo, esta se invierte vertical y horizontalmente. Como la imagen está completamente invertida, lo están también los movimientos como ocurrió al realizar los desplazamientos del objeto.
3. FIBRA DE LANA IMAGEN AUMENTADA 4 VECES (40) se apreciaban las líneas curvadas de estas fibras.
IMAGEN AUMENTADA 10 VECES (100) También se aprecian las líneas curvas pero un poco más grandes.
AUMENTADO 40 VACES (400) Se apreció la estructura de la fibra de lana una columna bien marcada como un tubo curvado.
4. GRANOS DE POLES
IMAGEN AUMENTADA 4 VECES (40) se apreciaban muchos puntos muy difíciles de apreciar a simple vista.
IMAGEN AUMENTADA 10 VECES (100) Se apreciaban menor cantidad de puntos en este caso figuras circulares con fibras.
IMAGEN AUMENTADA 40 VECES (400) Se observa más detallado los puntos de polen.
5. POLVILLO DE ALAS DE MARIPOSA IMAGEN AUMENTADA 4 VECES (40) Se observaron puntos muy difíciles de apreciar a simple vista, conforme se fue amplificando la imagen había menos puntos.
IMAGEN AUMENTADA 10 VECES (100) Y LUEGO 40 VECES (400) Más amplificada la imagen se observó una sola figura elipsoidal saturada con líneas rectas. Igualmente que en los granos de polen se especifica un objetivo a observar y lo demás se deja de apreciar disminuyen así la cantidad de alas de mariposa.
ANALISIS DE RESULTADO Mediante la anterior procedimiento logramos comprender el estudio de las muestras x a partir del uso del microscopio, para cada uno de los objetivos (enfoques: 4x, 10x y 40x) observamos en cada nivel distintas imágenes reflejadas a partir del lente convergente, localizadas en varias dirección al caso del objetivo 4x, se logra percibir la posición de la muestra, mas no todos y cada uno de los componentes gráficos, que nos dan una idea de las características físicas y químicas de la muestra y por ende del microorganismo, cuando se coloca en el objetivo 4x se ve la muestra completa y podemos observar cada parte de la muestra. En cuanto al uso del objetivo 10x la imagen era mucho más precisa, es decir ya se alcanzan a determinar algunos componentes físicos particulares de la muestra (x); para el caso del objetivo de 40 (x) las muestras ya mostraban en totalidad cada uno de los características estéticas de la muestra, de manera que proporciona analogías y diferencias para cada una de las muestras: corcho, letra, polen, polvillo de mariposa, fibra de lana. Para el caso de la escogencia de los objetivos de las muestras era necesario identificar el tamaño y forma de la muestra, para este caso las muestras eran diminutas pero no “invisibles” al ojo humano, por tal razón no fue necesario pasar del objetivo (40x), ya que
en este nivel era posible ver con claridad todas las muestras. La integración de los lentes convergentes reflejados a partir de la reflexión lumínica que se produce mediante la regulación de objetivos 4x, 10x, 40x la imagen que el ojo humano logre ver por medio de la interacción de la luz ultravioleta (natural) las figuras plasmadas en lente (ocular).
PREGUNTAS DE ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA 1. ¿Cuáles son los poderes del microscopio y como pudo comprobarlos en su trabajo? Poder separador . También llamado a veces poder de resolución, es una cualidad del microscopio, y se define como la distancia mínima entre dos puntos próximos que pueden verse separados. El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una décima de milímetro. En el microscopio viene limitado por la longitud de onda de la radiación empleada; en el microscopio óptico, el poder separador máximo conseguido es de 0,2 décimas de micrómetro (la mitad de la longitud de onda de la luz azul), y en el microscopio electrónico, el poder separador llega hasta 10 Å y este es comprobado al cambiar los objetivos viéndose cada vez más separadas las partículas de polen o de polvillo de mariposa.
Poder de definición. Se refiere a la nitidez de las imágenes obtenidas, sobre todo respecto a sus contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la corrección de las aberraciones de las lentes utilizadas y se comprobó al enfocar la superficie del corcho observándose una red producida por la celulosa que alguna perteneció a células vivas. Ampliación del microscopio. En términos generales se define como la relación entre el diámetro aparente de la imagen y el diámetro o longitud del objeto. Esto quiere decir que si el microscopio aumenta 100 diámetros un objeto, la imagen que estamos viendo es 100 veces mayor linealmente que el tamaño real del objeto (la superficie de la imagen será 1002, es decir 10.000 veces mayor). Para calcular el aumento que está proporcionando un microscopio, basta multiplicar los aumentos respectivos debidos al objetivo y el ocular empleados. Por ejemplo, si estamos utilizando un objetivo de 45X y un ocular de 10X, la ampliación con que estamos viendo la muestra será: 45X x 10X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto está ampliada 450 veces, también expresado como 450 diámetros.
2. ¿Por qué es importante utilizar el microscopio en el estudio de la biología? Es importante el uso del microscopio en el estudio de la biología debido a que los microrganismo tienen intervención en todos los procesos biológicos que demandan una interacción de estos así como células y tejidos a nivel microscópico que para su estudio se hace necesario superar estas limitaciones, gracias al desarrollo tecnológico que ha permitido la construcción de instrumentos de laboratorio, tales como el microscopio, el cual permite la observación y obtención de imágenes aumentadas de esos especímenes diminutos, que a simple vista resultan invisibles. El microscopio ha sido y será el instrumento de mayor utilidad en el estudio de las células y tejidos. 3. ¿Qué relación existe entre el poder de aumento de los objetivos y el área del campo visual?
El campo del microscopio es el círculo visible que se observa a través del microscopio, por lo que podemos definirlo como la porción del plano visible observado a través del microscopio. Si el aumento es mayor, el campo disminuye, lo cual quiere decir que el campo es inversamente proporcional al aumento del microscopio. 4. Explique ¿Por qué en la medida que aumenta los objetivos disminuye el número de alas de mariposa y granos de polen? En la medida en que se aumentan los objetivos el número de alas disminuye debido al poder separador del microscopio lo que permite una mayor definición pero de un área de campo más pequeña puesto que la lente del objetivo es más convexa y registra un campo menor de visión.
5. ¿Cuáles pueden ser las causas de daños de los lentes del microscopio? Los lentes del microscopio se marquen con el uso normal aunque los limpies inadecuadamente. La mayoría de las veces es un hongo que se implanta por humedad y otras causas. Tantos los objetivos como los oculares son lentes compuestos y en el acople se utilizan adhesivos transparentes y si quedaron vacíos inter lentes pueden ser ocupados por dicha infección y dar la impresión visual que son daños. 6. Consulte los tipos de microscopios y sus características principales El microscopio compuesto u óptico utiliza lentes para ampliar las imágenes de los objetos observados. El aumento obtenido con estos microscopios es reducido, debido a la longitud de onda de la luz visible que impone limitaciones. El microscopio óptico puede ser monocular, y consta de un solo tubo. La observación en estos casos se hace con un solo ojo. Es binocular cuando posee dos tubos. La observación se hace con los dos ojos. Esto presenta ventajas tales como mejor percepción de la imagen, más cómoda la observación y se perciben con mayor nitidez los detalles. Microscopio estereoscópico: el microscopio estereoscópico hace posible la visión tridimensional de los objetos. Consta de dos tubos oculares y dos objetivos pares para cada aumento. Este microscopio ofrece ventajas para observaciones que requieren pequeños aumentos. El óptimo de visión estereoscópica se encuentra entre 2 y 40X o aumento total del microscopio. Microscopio de campo oscuro. Este microscopio está provisto de un condensador paraboloide, que hace que los rayos luminosos no penetren directamente en el objetivo, sino que iluminan oblicuamente la preparación. Los objetos aparecen como puntos luminosos sobre un fondo oscuro. Microscopio de fluorescencia. La fluorescencia es la propiedad que tienen algunas sustancias de emitir luz propia cuando inciden sobre ellas radiaciones energéticas. El tratamiento del material biológico con flurocromos facilita la observación al microscopio.
Microscopio de contraste de fases. Se basa en las modificaciones de la trayectoria de los rayos de luz, los cuales producen contrastes notables en la preparación.
7. ¿Por qué la imagen aparece invertida en el microscopio compuesto? Dado que dos lentes convexas bastan para construir un microscopio, donde cada lente hace converger los rayos luminosos que la atraviesan. Una de ellas, llamada objetivo, se sitúa cerca del objeto que se quiere estudiar. El objetivo forma una imagen real aumentada e invertida. Se dice que la imagen es real porque los rayos luminosos pasan realmente por el lugar de la imagen. La imagen es observada por la segunda lente, llamada ocular, que actúa sencillamente como una lupa. El ocular está situado de modo que no forma una segunda imagen real, sino que hace divergir los rayos luminosos, que al entrar en el ojo del observador parecen proceder de una gran imagen invertida situada más allá del objetivo. Como los rayos luminosos no pasan realmente por ese lugar, se dice que la imagen es virtual.
CONCLUSION
Desde hace siglos desde que Antonie van Leeuwenhoek realizó las primeras observaciones de microorganismos en un microscopio ideado por él, las siguientes generaciones no se detuvieron y realizaron importantes avances en el desarrollo de ella como ciencia. Hoy en día existen potentes microscopios y al ser tan costos y delicados, por ello y para así tener éxito al momento de realizar observaciones es necesario identificar y recocer cada una de sus partes y la forma en cómo se deben manejar los enfoques presentes en el revólver (4x, 10x, 40x, 100x) haciendo observaciones con cada uno de ellos, con polen se observó a de dalle una especie de escama de que cubre el ala de la mariposa, seguidamente se realizó con éxito observaciones en los tres enfoque de diferente aumento el polen de la flor de boche, microfibras de lana, la estructura del corcho y la letra e de un periódico.
BIBLIOGRAFIA REID, Chan. Microbiología Cuarta Edición. Editorial Mc Graw Hill.,México, 1993. BROCK, Thomas. MADIGAN, Michael. Microbiología. Editorial Prentice Hall, México, 1993.
