INVERTASA

INVERTASA DE LEVADURA

INTRODUCCIÓN En esta práctica vamos a ver la acción de la invertasa y calcularemos entre otras cosas la velocidad de la reacción que cataliza. La actividad enzimática se pone de manifiesto incubando el sustrato juntamente con la enzima y posteriormente paramos la reacción y medimos coloriméticamente la reducción del ácido 3,5 dinitrosalic!lico que es lo que nos va a determinar la velocidad de la reacción. "e basa en que la sacarosa no contiene átomo de carbono anomérico libre y por lo tanto no es un az#car reductor. La enzima invertasa cataliza la $idrólisis de la sacarosa a %lucosa y fructosa, frecuentemente a esta reacción se denomina &inversión'. La invertasa se puede conse%uir de células de levadura que se rompen por auto lisis, centrifu%ando y tomando el sobrenadante.

Objetivo del practico. En el presente trabajo práctico se realizará la e(tracción de la invertasa de levadura y, posteriormente, se verificará su acción sobre una solución de sacarosa. La misma se comprobará mediante el test de )e$lin%, el cual permite detectar la presencia de los productos de la $idrólisis de este disacárido *%lucosa y fructosa+

Materiales

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- tubos de ensayo Levadura eactivo / y 0 de )e$ilin% 1radilla 2icropipetas  /lmidon idró(ido de sodio "ulfato de cobre

METODO E!ERIMENTAL  O"TENCION DE EN#IMA$ •

•

4olocar ,5 % de levadura en un mortero y $omo%eneizar en 5 ml de bicarbonato de sodio e incubarlo durante -6 minutos. )iltrar el contenido de la enzima conocida como e(tracto enzimático *EE+, tomar una al!cuota de - ml del e(tracto y $ervir.

 !ROCESO EN#IMATICO$ •

 TUBO 1 2 3 4 5 6 7 8

 /%re%ar a cada tubo de ensayo lo si%uiente y dejar reaccionar durante 5 minutos a temperatura ambiente.

SACAROSA 0,02 M 2 2 2 2 2 2 2 2

NaOH 0,5% 0 0 0 0 0.25 1 0 0

CuSO4 0.25% 0 0 0 0 0 0 0.25 1

EXTRACTO CRUDO 0 0.5 1 0 1 1 1 1

EXTRACTO HERVIDO 0 0 0 1 0 0 0 0

 TUBO ! 10

SUCRAOSA 0.5% 2 2

EXTRACTO CRUDO 0 1

 TUBO 11 12

AMIDON 1% 2 2

EXTRACTO CRUDO 0 1

DETECCION DE LOS !RODUCTOS DE LA CATALISIS$  /%re%ar  ml de reactivo / de )e$in% y  ml de reactivo 0 de )e$in% a cada tubo y calentar durante  minuto y dejarlos enfriar en la %radilla.

RESULTADOS

 TUBO 1" Sa#a$&a ' R(a#)*+ A  B -( (/*  TUBO 2" Sa#a$&a ' EE ' R(a#)*+ A  B -( (/*  TUBO 3" Sa#a$&a ' EE ' R(a#)*+ A  B -( (/*  TUBO 4" Sa#a$&a ' EEH ' R(a#)*+ A  B -( (/*  TUBO 5" Sa#a$&a ' NaOH ' EE ' R(a#)*+ A  B -( (/*  TUBO 6" Sa#a$&a ' NaOH ' EE ' R(a#)*+ A  B -( (/*  TUBO 7" Sa#a$&a ' CuSO4 ' EE ' R(a#)*+ A  B -( (/*  TUBO 8" Sa#a$&a ' CuSO4 ' EE ' R(a#)*+ A  B -( (/*  TUBO !" Su#$a&a ' R(a#)*+ A  B -( (/*  TUBO 10" Su#$a&a ' EE ' R(a#)*+ A  B -( (/*  TUBO 11" A*- ' R(a#)*+ A  B -( (/*  TUBO 12" A*- ' EE ' R(a#)*+ A  B -( (/*

CONCLUSION

CUESTIONARIO

%.& '()* es el reactivo de +e,ili- / 0)e es lo 0)e reco-oce1 El reactivo de )e$lin% es una disolución que se utiliza como reactivo para la determinación de az#cares reductores. "irve para reconocer la presencia de %lucosa o fructosa.

2.&'!or 0)* la reacci3- de +e,ili- es -eativa co- sacarosa / positiva colos prod)ctos de la ,idr3lisis por i-vertasa1 7orque el reactivo de )e$lin% no reconoce a la sacarosa como tal, sino que la reconoce $idrolizada por la invertasa, es decir reconoce a los subproductos de esta por separados, Estos son la %lucosa y la fructosa.

4.&E- el protocolo e5peri6e-tal reali7ado c)al es e lrol NaO8 areado a al)-os de los t)bos1 a. es e sustrato sobr el que actua la enzima b. acelera la reacción entre la enzima y el sustrato

c.& des-at)rali7a la e-7i6a por alterar s) sitio activo d. bloquea el sitio activo de la enzima

9.&'C):l es el objeto de reali7ar el pri6er t)bo de la serie el c)al co-tie-e solo sacarosa1 El fin de preparar el 8 tubo, que contiene solo sacarosa, se utiliza como muestra blanca ya que permite identificar la actividad enzimática, en los otros tubos, debido a que el reactivo de )e$lin% solo reconoce a los subproductos de esta molécula, entonces la reacción dará ne%ativo por no contener enzimas.

;.& 'C):l es la estr)ct)ra de la s)cralosa / 0)e esperabas 0)e oc)rra co- la i-vertasa1 La sucralosa en su estructura posee9 - átomos de carbono :  átomos de o(i%eno 3 átomos de cloro :  átomos de $idro%eno. Lo que esperábamos que ocurra con la invertasa es que se $idrolizara.