PERCOBAAN 9 PENGARUH INHIBITOR TERHADAP TERHAD AP AKTIFIT AKTIFITAS AS ENZIM Oleh: Kelompok 7 Sulimah Vika Noer Baety Yuneta Y uneta dwi Yunisari Yunisari Zulfa Anifatul C
Latar Belakang
Latar Belakang Dewaa !n! "a#a!wa "engenal !n#!$!! en%!" &! &ala" el "er'(akan 'at' "ekan!"e (engen&al!an reak!)reak! en%!"at!k &engan (elak' !n#!$!! &!e$'t !n#!$!t*r+ In#!$!t*r &a(at $er'(a "*lek'l ata' !*n ,ang &a(at "eng#a"$at reak! (e"$ent'kan ata' (eng'ra!an k*"(lek ES (a&a reak! en%!"+ In#!$!t*r &!$e&akan "en-a&! !n#!$!t*r t!&ak &a(at $al!k .!rre/er!$le0 &an !n#!$!t*r &a(at $al!k .re/er!$le0+In#!$!t*r &a(at $al!k ter&!r! &ar! t!ga -en! !n#!$!t*r1 ,a!t'2 !n#!$!t*r $era!ng .k*"(et!t!301 !n#!$!t*r t!&ak $era!ng .n*nk*"(et!t!301 &an !n#!$!t*r $'kan $era!ng .'nk*"(et!t!30+ Dar! ek!an (engert!an &an -en! !n#!$!t*r1 "a#a!wa #an,a "e"a#a"! eke&ar k*ne( &an te*r!+ Pa&a#al 'nt'k "e"a#a"! le$!# &ala" tentang (engar'# !n#!$!t*r ter#a&a( akt!4ta en%!" &an (er!t!wa ,ang ter-a&! (a&a !n#!$!! k*"(et!t!3 ter#a&a( akt!4ta en%!"1 &!$'t'#kan 'at' ker-a n,ata &ar! "a#a!wa 'nt'k "e"$'kt!kan #al tere$'t &ar! te*r! ,ang a&a &engan &!a&akann,a (er5*$aan tentang (engar'# !n#!$!t*r ter#a&a( akt!4ta en%!"+
T'-'an Per5*$aaan Setela# "eng!k't! (er5*$aan !n!1 "a#a!wa &!#ara(kan2 6+
7+
Ma"(' "e"a#a"! (engar'# !n#!$!t*r natr!'" "al*nat ter#a&a( akt!4ta en%!" 'k!nat &e#!&r*genae Ma"(' "enga"at! ter-a&!n,a (er!t!wa !n#!$!! k*"(et!t!3 ter#a&a( akt!4ta en%!" 'k!nat &e#!&r*genae+
Pr!n!( Per5*$aan Pa&a (er5*$aan !n! akan &!lak'kan '-! (engar'# !n#!$!t*r ter#a&a( akt!4ta en%!"1 &engan '$trat natr!'" 'k!nat &an !n#!$!t*r natr!'" "al*nat ,ang akan $erk*"(et!! 'nt'k "eng!kat !! akt!3 en%!" 'k!nat &e#!&r*genae ,ang &!&a(atkan &ar! #*"*genat #at! a(!+
Ket!ka '$trat 'k!nat "eng!kat !! akt!3 en%!" 'k!nat &e#!&r*genae "aka akan ter*k!&a! &an ter$ent'k 3'"arat ,ang &!tan&a! &engan tere&'k!n,a "et!len $!r' &ar! $erwarna $!r' "en-a&! t!&ak $erwarna &engan reak! e$aga! $er!k't2
R'"'an Maala# 6+
7+
Baga!"ana (engar'# !n#!$!t*r natr!'" "al*nat ter#a&a( akt!4ta en%!" 'k!nat &e#!&r*genae8 Baga!"anaka# (er!t!wa !n#!$!! k*"(et!t!3 ter#a&a( akt!4ta en%!" 'k!nat &e#!&r*genae8
Met*&e Alat
6+
Ta$'ng reak!
7+
Batang Penga&'k
+
P!(et tete
:+
Gela 'k'r
Bahan
!
"etilen #lue
%$&!
Bu'er fosfat ()" *p+ 7),-
.!
Natrium suksinat () "
,!
Natrium malonat () "
$!
+omo/enat hati
0!
"inyak para1n
7!
Akuades
Pr*e&'r
2a#un / ke
Akuad es *m3-
Bu'er fosfat *m3-
6 7 : < >
1; 71= 71> ;1> ;1> >
7 7 7 7 7 7
Natriu m suksin at *m37 7 7 : > )
Natriu m malon at *m3) ;17 ;1: ;1: ;1: )
"etile +omo/ 4ara1n n #iru enat *tetes*m3hati *m3;1< ;1< ;1< ;1< ;1< ;1<
71< 71< 71< 71< 71< 71<
6; 6; 6; 6; 6; 6;
Anal!! (r*e&'r 6+ Perta"a &!"a'kkan "et!len $!r' ,ang $ert'-'an e$aga! !n&!kat*r tela# ter-a&!n,a (eng*k!&a!an 'k!nat "en-a&! 3'"arat *le# en%!" ,ang &!g'nakan ,akn! en%!" 'k!nat &e#!&r*genae ,ang ter&a(at (a&a #*"*genat #at!+ Mekan!"en,a "elal'! reak! re&*k e&er#ana "et!len $!r' akan tere&'k! "en-a&! $erwarna ('t!# &an 'k!nat akan ter*k!&a!+
Str'kt'r "et!len $!r'
7+ D!ta"$a#kan a!r 'nt'k "elar'tkan en,awa)en,awa ,ang akan &!5a"('rkan+ ?arna "et!len $!r' agak "e"'&ar+ + D!ta"$a#kan $'@er 3*3at ;16 M (a&a (H 1: ,a!t' $ert'-'an 'nt'k "e"(erta#ankan (H+ (H *(t!"'" (a&a en%!" 'k!nat &e#!&r*genae karena en%!" tere$'t ta$!l (a&a (H 1:
:+ Pena"$a#an natr!'" 'k!nat ;16 M $ert'-'an e$aga! '$trat ,ang nant!n,a "eng!kat !! akt!3 &ar! en%!" 'k!nat &e#!&r*genae+
<+ Pena"$a#an natr!'" "al*nat &!g'nakan e$aga! !n#!$!t*r ata' &a(at "eng#a"$at ker-a &ar! en%!" 'k!nat &e#!&r*genae+
>+ Pena"$a#an #*"*genat #at! e$aga! en%!" 'k!nat &e#!&r*genae+ Hat! a(! &!(!l!# karena &! &ala" #at! ter&a(at $an,ak en%!" ,ang &!g'nakan *le# 'at' "ak#l'k #!&'( 'nt'k "elak'kan "eta$*l!"en,a &engan $enar1 "aka &engan "engg'nakan #*"*genat #at! a(!1 en%!" ,ang &!g'nakan le$!# $an,ak+
+ H*"*genat #at! #ar' #*"*gen agar e"'a en%!" ,ang &!ektrak &ar! #at! a(! &a(at kel'ar &an "erata+ =+ D!a&'k #!ngga #*"*gen $ert'-'an agar e"'a 5a"('ran #*"*gen &an k*nentra! 5a"('ran a"a+
9+ Selan-'tn,a (ena"$a#an (ara4n $er3'ng! 'nt'k "eng#!n&ar! k*ntak '&ara $e$a &egan lar'tan karena (ara4n "e"!l!k! "aa -en! ,ang le$!# r!ngan &ar!(a&a a!r e#!ngga akan ter$ent'k la(!an (ara4n &! ata la(!an lar'tan 1e#!ngga &engan a&an,a (ara4n 1 *k!gen &ar! '&ara $e$a t!&ak akan "a'k ke &ala" lar'tan karena "et!len $!r' tere&'k! e5ara 5e(at &a(at ter*k!&a! ke"$al! &engan ke#a&!ran *k!gen '&ara+
6;+ Setela# !t' &!lak'kan !nk'$a! (a&a '#' = ;C+ S'#' !n! &!g'nakan karena "er'(akan '#' *(t!"'" &ar! ker-a en%!" 'k!nat &e#!&r*genae+ 66+ D!5atat wakt'n,a &an &!a"at! warnan,a $ert'-'an 'nt'k "engeta#'! "ana ,ang (al!ng 5e(at &an (al!ng la"$at 'nt'k "er'$a# warna $!r' "en-a&! warna e(ert! lar'tan tan&ar+
Ha!l Per5*$aan 5ata Data 7
2a#u n/
6 7 : < >
*5ata kelompok 7+ilan/nya warna menit ke6 7; : = 7= : )
*5ata kelompok $+ilan/nya warna menit ke6 <> >> < 9 )
Pe"$a#aan 6+
Ak'ra! Data Dar! #a!l (er$an&!ngan &ata &'(l*1 ,akn! &ata &ar! kel*"(*k ka"! .kel*"(*k 0 &engan kel*"(*k <1 &!&a(atkan anal!a &ata e$aga! $er!k't+
a+ 2a#un/ 6 7
Volume su#strat * natrium suksinat7 "L 7 "L 7 "L
Volume inhi#itor *natrium malonat; "L ;17 "L ;1: "L
aktu *kelompok 7-
aktu *kelompok $-
7; "en!t : "en!t = "en!t
"en!t <> "en!t >> "en!t
Da(at &!!"('lkan $a#wa semakin sedikit inhibitor yang ditambahkan maka laju reaksinya semakin cepat dengan konsentrasi substrat yang dibuat tetap.
$+
2a#u n/ :
Volume su#strat * natrium suksinat7 "L : "L
Volume inhi#itor *natrium malonat;1: "L ;1: "L
aktu *kelompok 7-
aktu *kelompok $-
= "en!t 7= "en!t
>< "en!t < "en!t
Pengar'# '$trat ter#a&a( akt!4ta en%!" ,a!t' e"ak!n $ear -'"la# '$trat ,ang &!ta"$a#kan "aka e"ak!n 5e(at la-' reak! (a&a akt!4ta en%!" 'k!nat &e#!&r*genae e#!ngga (er'$a#an warna e"ak!n 5e(at+
5+ Unt'k ta$'ng < t!&ak &!$an&!ngkan karena -'"la# keel'r'#an t!&ak a"a &engan ta$'ng 6):+ Unt'k ta$'ng 6): -'"la# t*tal /*l'"e ,a!t' 1< "L e&angkan ta$'ng < e$an,ak 91< "L+ &+ Unt'k ta$'ng > &!g'nakan e$aga! tan&ar warna e$aga! (e"$an&!ng &engan ta$'ng 6)<+ Dar! anal!a &ata tere$'t &a(at &!katakan $a#wa &ata &ar! kel*"(*k ka"! "e"!l!k! ak'ra! ,ang 5'k'( t!ngg!+
7+ Pengar'# !n#!$!t*r natr!'" "al*nat ter#a&a( akt!4ta en%!"+ Dar! (er5*$aan ,ang tela# &!lak'kan &a(at &!!"('lkan $a#wa natr!'" "al*nat e$aga! !n#!$!t*r $er(engar'# ter#a&a( akt!4ta en%!" 'k!nat &e#!&r*genae ,ang ter&a(at &! &ala" #*"*genat #at! ,akn! !n#!$!t*r &a(at "eng#a"$at ker-a en%!" 'k!nat &e#!&r*genae &engan "eng!kat !! akt!3 en%!" karena nat!r'" "al*nat "e"!l!k! tr'kt'r t!ga &!"en! ,ang a"a &engan natr!'" 'k!nat+
+ en! !n#!$!! &ala" (er5*$aan+ en! !n#!$!! (a&a (er5*$aan !n! a&ala# !n#!$!! k*"(et!t!3 karena "*lek'l !n#!$!t*r ,ang &!g'nakan !ala# natr!'" "al*nat ,ang "en,er'(a! "*lek'l '$trat natr!'" 'k!nat e#!ngga &a(at $erk*"(et!! &engan '$trat natr!'" 'k!nat &ala" "eng!kat !! akt!3 en%!" 'k!nat &e#!&r*genae1 teta(! t!&ak &a(at "eng#a!lkan (r*&'k+
Se5ara "ate"at!k !n#!$!! !n! &a(at &!n,atakan e$aga!2
Sumber: Principles of Biochemistry 5Ed, Lehninger
Natr!'" "al*nat "e"!l!k! tr'kt'r &an "'atan ,ang a"a &engan '$trat n*r"al natr!'" 'k!nat1 teta(! natr!'" "al*nat t!&ak &a(at &!&e#!&r*gena! *le# en%!"+ NaOOCCH7COONa NaOOCCH7CH7COONa
.natr!'" "al*nat0 .natr!'" 'k!nat0
Bearn,a (engar'# !n#!$!t*r k*"(et!t!3 &!tent'kan *le# k*nentra! !n#!$!t*r1 k*nentra! '$trat &an a4n!ta relat!3 '$trat &an !n#!$!t*r ter#a&a( en%!"+ Pengar'# !n#!$!t*r k*"(et!t!3 &a(at &!ata! &engan '$trat $erle$!#+ .S'ant!1 7;60
Ke!"('lan Dar! (er5*$aan ,ang tela# &!lak'kan &a(at &!!"('lkan $a#wa2 6+
7+
Natr!'" "al*nat e$aga! !n#!$!t*r $er(engar'# ter#a&a( akt!4ta en%!" 'k!nat &e#!&r*genae ,ang ter&a(at &! &ala" #*"*genat #at! ,akn! !n#!$!t*r &a(at "eng#a"$at ker-a en%!" 'k!nat &e#!&r*genae &engan "eng!kat !! akt!3 en%!"+ Per!t!wa ,ang ter-a&! (a&a !n#!$!! k*"(et!t!3 ter#a&a( akt!4ta en%!" !ala# en%!" ,ang tela# "eng!kat !n#!$!t*r t!&ak &a(at $ereka! &engan '$trat 'nt'k "eng#a!lkan (r*&'k1 e&angkan en%!" ,ang tela# $er!katan &engan '$trat t!&ak &a(at $er!katan &engan !n#!$!t*r1 akan teta(! "eng#a!lkan #a!l "eng!k't! reak! k!"!a $er!k't !n!2
F*t* Per5*$aan
am#ar ! Lar'tan "et!len $!r'
8am#ar !. Lar'tan 6)< e$el'" 'k!nat "en-a&! 3'"arat &engan 6 ta$'ng
8am#ar !& Lar'tan "et!len $!r' &an ak'a&e &ala" ta$'ng 6)< .&ar! k!r!0
8am#ar !, Lar'tan 6)< (erla#an $er'$a# &ar! 'k!nat "en-a&! 3'"arat &!tan&a! &engan (er'$a#an
Da3tar P'taka S'ant!1 E/!+ +asar!dasar Biokimia "mum+ Malang 2 ICA T!" D*en B!*k!"!a UM+7;6<+ Petunjuk Praktikum Biokimia "mum+ Malang2 Un!/er!ta Neger! Malang Nel*n1C*+ 7;;=+ Le#n!nger Pr!n5!(le *3 B!*5#e"!tr,
