Practica de La Glucosa

SEP SEMS Centro de Bachillerato Tecnológico Industrial y de servicios no. 168

VALORACIÓN DEL METABOLISMO Practica No.3

A L U M N A : Isabel Luna Murillo. N/L: 25 G/G: 6°”A” MESA: 2 SECCIÓN: 2

Profesor: Benjamín Hernández Mejia.

Fecha

d e e n t r e g a : 03 de Junio del 2011

OBJETIVO: Al término de esta práctica el alumno será capaz de llevar a cabo la prueba de la tolerancia de la glucosa e identificara cuál es su utilidad. FUNDAMENTO: La glucosa es la principal fuente de energía en el organismo. La insulina, producida en las células de los islotes pancreáticos, facilita la entrada de la glucosa en las células de los tejidos. Una deficiencia de la insulina o una disminución de su actividad ocasionan un aumento de la glucosa en la sangre. Se encuentra en concentraciones elevadas de glucosa en suero o plasma en un paciente con diabetes mellitus y con otras condiciones o síndromes. La hipoglucemia puede darse como respuesta al ayuno, o bien puede ser bebida a fármacos, venenos, errores congénitos del metabolismo o gastrectomía previa. El diagnostico clínico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un único ensayo, sino que debe integrar los datos clínicos y de laboratorio. La glucosa presente en la muestra origina, según las reacciones acopladas descritas a continuación, un complejo coloreado que se cuantifica en espectrofotometría. Glucosa +1/2 O2+ H2O

GOD

Glucónico + H2O2 POD

2 H2O2 + 4- Aminoantipirina + fenol Quinonaimina + 4 H2O MATERIAL: → Reactivos → Termoblock → Espectrofotómetro → Pipetas serológicas de 500 y 10 µ l → 6 tubos de ensayo TECNICA: 1.- colocar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.

2.- rotular 6 tubos de ensayo a uno se rotulara como blanco, a otro como patrón, muestra basal ,1 hora, 2 horas, 3 horas respectivamente. 3.- colocar a tubo de muestra basal 10 µ l del suero. 4.- colocar a tubo de 1 hora 10 µ l del suero problema; y colocar 1 ml. de reactivo. 5.- colocar a tubo de 2 horas 10 µ l del suero problema; y colocar 1 ml. de reactivo. 6.- colocar a tubo de 3 horas 10 µ l del suero problema; y colocar 1 ml. de reactivo. 7.- colocar a tubo de patrón 10 µ l del reactivo patrón; y colocar 1 ml. de reactivo. 9.- dejar incubar 5 minutos a 37°c. 10.- transcurrido ese tiempo llevar al espectrofotómetro para leer su absorbancia. 11.- colocar el blanco en una celdilla y llevarlo al espectrofotómetro para calibrarlo. Se debe de colocar clear, 500, go to, second funcion, absorbancia, y de esta forma el espectrofotómetro se calibrara a cero. 12.- vaciar el blanco a un tubo de ensayo secar y vaciar la muestra basal, limpiar los lados de las celdillas, y colocarlo en el espectrofotómetro. (Nota: la flecha de la celdilla debe de ir hacia los lados). 13.-repetir los pasos para cada una de las muestras, cada vez que se cambie de muestra se debe de secar la celdilla para no afectar los resultados. 14.- Anotar las absorbancia y hacer los cálculos correspondientes. RESULTADO: Estándar: .333 Factor= 300.3 Glucosa basal= 127.3 mg/dl Glucosa 60 minutos=221.6 mg/dl Glucosa 120 minutos=176 mg/dl Glucosa 180 minutos=146.5 mg/dl CONCLUCIÓN: En esta practica mi equipo y yo aprendimos a realizar de manera correcta esta practica y de tener mucho cuidado

con el manejo de la muestra ya que a veces por no tener el cuidado necesario con las muestras y con los reactivos los resultados salen alterados y esto es malo ya que daríamos un diagnostico incorrecto y la única persona perjudicada seria el paciente, fue uma práctica fácil de realizar ya que anteriormente habíamos hecho la de la glucosa lo único que cambia es la cantidad de muestra que tenemos que procesar pero de hay en más es igual.



A L U M N A : Isabel Luna Murillo. N/L: 25 G/G: 6°”A” MESA: 2

SECCIÓN: 2


Fecha


OBJETIVO: Al término de esta práctica el alumno será capas de realizar esta práctica correctamente e identificara en que caso se utiliza y como interpretarla. FUNDAMENTO: La glucosa es la principal fuente de energía en el organismo. La insulina, producida en las células de los islotes pancreáticos, facilita la entrada de la glucosa en las células de los tejidos. Una deficiencia de la insulina o una disminución de su actividad ocasionan un aumento de la glucosa en la sangre. Se encuentra en concentraciones elevadas de glucosa en suero o plasma en un paciente con diabetes mellitus y con otras condiciones o síndromes. La hipoglucemia puede darse como respuesta al ayuno, o bien puede ser bebida a fármacos, venenos, errores congénitos del metabolismo o gastrectomía previa. El diagnostico clínico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un único ensayo, sino que debe integrar los datos clínicos y de laboratorio. La glucosa presente en la muestra origina, según las reacciones acopladas descritas a continuación, un complejo coloreado que se cuantifica en espectrofotometría. D-Glucosa

GOD

Ac. Glucónico + H2O2

H2O2 + p-Hidroxibezoico + 4-aminoantipirina complejo coloreado MATERIAL: → Reactivos

H2O+

→ Termoblock → Espectrofotómetro → Pipetas serológicas de 500 y 10 µ l → 4 tubos de ensayo TECNICA: 1.-llevar los reactivos a temperatura ambiente. 2.- sacar sangre al paciente en ayunas, la sangre se deberá de colocar en un tuvo rojo sin anticoagulante. 3.- centrifugar 5 minutos a 2500 r.p.m. 4.- separar el suero y colocarlo en un tuvo de ensayo. 5.- pedirle al paciente que como algo y que vuelva dentro de 2 horas aproximadamente. 6.- volverá a sacar sangre por punción venosa en un tuvo con tapón rojo, centrifugar, separar el suero y colocarlo en un tuvo de ensayo. 7.- 4 tubos de ensayo rotularlos se le colocara blanco, estándar, muestra basal, muestra postprandial. 8.- colocar al tubo rotulado con blanco 1 ml. de reactivo. 9.- colocar al tubo rotulado con estándar 10 µ l de reactivo estándar y 1ml. de reactivo. 10.- colocar al tubo muestra basal 10 µ l de suero problema y 1 ml. de reactivo. 11.- colocar al tubo muestra postprandial 10 µ l de suero problema y 1 ml. de reactivo. 12.- dejar incubar 5 minutos a 37°C 13.- colocar el blanco en una celdilla y llevarlo al espectrofotómetro para calibrarlo. Se debe de colocar clear, 500, go to, second funcion, absorbancia, y de esta forma el espectrofotómetro se calibrara a cero. 14.- vaciar el blanco a un tubo de ensayo secar y vaciar la muestra basal, limpiar los lados de las celdillas, y colocarlo en el espectrofotómetro. (Nota: la flecha de la celdilla debe de ir hacia los lados). 15.-repetir los pasos para cada una de las muestras, cada vez que se cambie de muestra se debe de secar la celdilla para no afectar los resultados. 16.- Anotar las absorbancia y hacer los cálculos correspondientes. RESULTADO: Estándar=.313

Factor= 319.4888817 Glucosa= 319.488817 x .292= 93.29 mg/dl Postprandial= 319.4888817 x .322= 102.87 mg/dl CONCLUSIÓN: En esta practica mi equipo y yo aprendimos a realizar de manera correcta esta práctica no fue tan complicada porque era exactamente igual a la de la glucosa solamente que aquí manejamos dos muestras la glucosa basal y la muestra postprandial. Se estuvo dialogando sobre la utilidad de esta práctica y concluimos que es para la detección de la diabetes, es por eso que se espera a sacar la sangre durante dos horas pues esto es lo que tarda en regresar la glucosa a sus niveles normales en cambio si no regresa a sus niveles normales durante esas dos horas es probable de que el paciente tenga una anomalía y para confirmar esta sospecha se deben de hacer otras pruebas.



A L U M N A : Isabel Luna Murillo.

N/L: 25 G/G: 6°”A” MESA: 2 SECCIÓN: 2


Fecha


OBJETIVO: Al término de esta práctica el alumno será capaz de realizar la prueba para la determinación de glucosa en sangre e identificara su utilidad, así como los cuidados que debe de tener. FUNDAMENTO: La glucosa es la principal fuente de energía en el organismo. La insulina, producida en las células de los islotes pancreáticos, facilita la entrada de la glucosa en las células de los tejidos. Una deficiencia de la insulina o una disminución de su actividad ocasionan un aumento de la glucosa en la sangre. Se encuentra en concentraciones elevadas de glucosa en suero o plasma en un paciente con diabetes mellitus y con otras condiciones o síndromes. La hipoglucemia puede darse como respuesta al ayuno, o bien puede ser bebida a fármacos, venenos, errores congénitos del metabolismo o gastrectomía previa. El diagnostico clínico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un único ensayo, sino que debe integrar los datos clínicos y de laboratorio. La glucosa presente en la muestra origina, según las reacciones acopladas descritas a continuación, un complejo coloreado que se cuantifica en espectrofotometría. GOD

D-Glucosa

Ac. Glucónico + H2O2

H2O2 + p-Hidroxibezoico + 4-aminoantipirina complejo coloreado

H2O+

MATERIAL: → Reactivos → Termoblock → Espectrofotómetro → Pipetas serológicas de 500 y 10 µ l → 3 tubos de ensayo TECNICA: 1.-llevar los reactivos a temperatura ambiente. 2.- sacar sangre al paciente en ayunas, la sangre se deberá de colocar en un tuvo rojo sin anticoagulante. 3.- centrifugar 5 minutos a 2500 r.p.m. 4.- separar el suero y colocarlo en un tuvo de ensayo. 5.- 3 tubos de ensayo rotularlos se le colocara blanco, estándar, muestra basal. 6.- colocar al tubo rotulado con blanco 1 ml. de reactivo. 7.- colocar al tubo rotulado con estándar 10 µ l de reactivo estándar y 1ml. de reactivo. 9.- colocar al tubo rotulado con estándar 10 µ l de reactivo estándar y 1ml. de reactivo. 10.- dejar incubar 5 minutos a 37°C. 11.- colocar el blanco en una celdilla y llevarlo al espectrofotómetro para calibrarlo. Se debe de colocar clear, 500, go to, second funcion, absorbancia, y de esta forma el espectrofotómetro se calibrara a cero. 12.- vaciar el blanco a un tubo de ensayo secar y vaciar la muestra basal, limpiar los lados de las celdillas, y colocarlo en el espectrofotómetro. (Nota: la flecha de la celdilla debe de ir hacia los lados). 13.-repetir los pasos para el estándar y la muestra basal, cada vez que se cambie de muestra se debe de secar la celdilla para no afectar los resultados. 14.- Anotar las absorbancia y hacer los cálculos correspondientes.

RESULTADO: Estándar=.313 Factor= 319.4888817 Glucosa= 319.4888817 x .291= 92.97 mg/dl CONCLUSIÓN: En esta práctica mi equipo y yo aprendimos a realizar esta práctica aunque al principio fue difícil familiarizarse con el espectrofotómetro ya que teníamos mucho tiempo que no lo usábamos, además de que nosotros no teníamos conocimiento sobre como calibrarlo pero al final lo supimos dominar muy bien, y ahora ya lo sabemos usar y calibrarlo, además de que en esta practica se debe de tener cuidado sobre los reactivos y la muestra ya que cada vez que se tome reactivo se debe de limpiar la punta para no alterar los resultados.


VALORACIÓN DEL METABOLISMO Practica No. 4



Fecha


OBJETIVO: Al término de esta práctica el alumno será capaz de realizar de manera correcta la práctica de la glicohemoglobina e identificara su principal utilidad así como en los diversos casos en que se usa esta prueba.

FUNDAMENTO: A través de la circulación de los glóbulos rojos, la glicohemoglobina se forma continuamente por la dicción de la glucosa a la terminal “N” de las cadenas beta de la hemoglobina. Este proceso no enzimático refleja el promedio de exposición de la glucosa a la hemoglobina, sobre un periodo extenso de tiempo. En un estudio clásico, Trivelli demostró que el nivel de la glicohemoglobina en sujetos diabéticos se eleva de 2 a 3 veces el nivel comparado con los individuos de niveles normales. Algunos investigadores han recomendado que el nivel de la glicohemoglobina se ubica como indicador del control de la diabetes, puesto que niveles normales indicarían que el paciente esta respondiendo al tratamiento. La glicohemoglobina ha sido definida como la “fracción rápida de la hemoglobina (Hb-A1a, A1b, A1c) la cual fluye primero durante la cromatografía en columnas con resina de intercambió iónico. La hemoglobina no glicosilada el cual constituye el resto de la hemoglobina ha sido designada

(Hb-Ao). El procedimiento para la determinación de la glicohemoglobina emple4a una resina de intercambio cationico de dedil unión para la separación de la glicohemoglobina (fracción rápida) de la hemoglobina no glicosilada. La prueba se basa en la preparación bemolizada de sangre completa se mezcla continuamente con una resina de intercambio iónico de débil afinidad. Durante este tiempo, la HbAo se une a la resina, después de llevarse a cabo la mezcla con la resina, se utiliza el filtro separador para separar la resina del líquido sobrenadante el cual contiene la glicohemoglobina. El porcentaje de la glicohemoglobina es determinado por la medida de absorbancia 415 nm, de la fracción de la glicohemoglobina y la hemoglobina total, calculando el cociente de las absorbancias, comparando este cociente con el calibrador empleado.

MATERIAL. → tuvo con resina → filtro separador → tuvo de ensayo con tapón → Micro pipetas de 0.02 y 0.10 → Pipetas de 0.5, 3 y 5 ml. → Mezclador. TÉCNICA: PARA EL HEMOLISADO 1.-Colocar .5 ml de reactivo lisador en los tubos etiquetados como: calibrador, control y muestra. 2.-coloque .1 ml de muestra de sangre dentro de los tubos etiquetados, mezclar hasta que la lisis sea completa. 3.- dejar reposar durante 3 minutos. PREPARACION DE LA GLICOHEMOGLOBINA 1.-Antes de usarse se debe de mezclar bien la resina por inversión por lo menos 6 veces. 2.-Coloque 0.1 ml de bemolizado a la resina 3.- Colocar el filtro separador a 2 cm. Sobre el nivel del líquido. 4.- Colocar el tuvo en un mezclador automático por 5 minutos. 5.- transcurrido ese tiempo retirar el líquido del mezclador. 6.-Presione el liquido separador dentro del tubo hasta que la resina este compacta.

7.- El liquido sobrenadante vaciarlo a un tubo o directamente a la celdilla. 8.- Calibrar el espectrofotómetro a 415 nm usando agua desionizada. 9.- Leer y regristar los valores. PARA LA FRACCION DE HEMOGLOBINA TOTAL 1.- Colocar 5.0 ml de agua no ionizada en los tubos etiquetados como calibrador, control, muestra. 2.- Coloque 0.02 ml. de bemolizado preparado en el paso A dentro de los tubos etiquetados. 3.-calibrar el espectrofotómetro a 415 nm usando agua desionizada. 4.-leer y registrar los valores. CALCULO DE LOS RESULTADOS: 1) Absorbancia calibrador glico calibrador Absorbancia calibrador Hb Total

= cociente del

2) Absorbancia problema glico problema Absorbancia problema Hb Total

= cociente del

3) cociente del problema x 10 = % de glicohemoglobina total Cociente del calibrador RESULTADO: 1). 610 = 0.96 ..635 2) .524 = .77 .676 3) .77 x 10 = 8% .96 CONCLUSIÓN:

En esta práctica mi equipo y yo aprendimos a realizar de manera correcta esta técnica aunque también descubrimos su principal utilidad ya que esta técnica se utiliza principalmente en pacientes con diabetes ya que esta nos demuestra si el paciente esta respondiendo bien al tratamiento o no. No tuvimos ningún problema al realizar esta práctica ya que tenemos experiencia utilizando el espectrofotómetro.


VALORACIÓN DEL METABOLISMO

Practica No. 5



Fecha


OBJETIVO: Al termino de la practica el aluno será capas de realizar correctamente la detección de la creatinina en suero e identificara su importancia clínica de este. FUNDAMENTO: La creatinina presente en la muestra reacciona con el picrato en medio alcalino originando un complejo coloreado. Se mide la velocidad de la formación de dicho complejo en periodos iniciales cortos, evitándose así la interferencia de otros compuestos. MATERIAL: → Reactivo para la determinación de creatinina → agua desionizada o destilada → 5 tubos de ensayo →1 celdilla →1 cronometro → Termoblock

→ Espectrofotómetro → Gradilla → Pipeta serologica de 100 µ l → Pipeta de 5 ml TECNICA: 1.- Sacar sangre por punción venosa en un tubo sin anticoagulante (tapón rojo). 2.- Centrifugar la sangre 2500 r.p.m 3.- Separar el suero y colocarlo en un tubo de ensayo. 4.- Colocar en dos tubos de ensayo 1 ml de reactivo a uno se le rotulara como estándar y a otro como problema. 5.- Primero se colocara en el tubo problema a incubar y el tubo que contiene el suero esto por un lapso de tiempo de 1 minuto a 37°C. 6.- Después se procede a calibrar el espectrofotómetro con 492nm con agua desionizada o destilada. 7.- Pasado el tiempo de incubación colocar 100ml de suero al tubo problema y accionar cronometro. 8.- Colocarlo en una celdilla e introducirlo dentro del espectrofotómetro. 9.- Hacer las lecturas a los 30 y a los 90 segundos sin sacar celdilla. 10.- Repetir lo mismo con el estándar. RESULTADO: Ab (90) --- Ab (30) [muestra] =creatinina en suero Ab (90) --- Ab (30) [estándar] 0.771 --- 0.750 .04

x concentración

x 2 mg/dl = 1.05 mg/dl

CONCLUCIONES: En esta practica mi equipo y yo aprendimos a realizar de manera correcta esta practica aunque para nosotros no se nos hizo tan complicado ya que es lo mismo que hacemos en las pruebas anteriores lo único que cambia son los reactivos y que el suero se tubo que incubar antes nada mas los resultados fueron normales ya que este estudio se

le practico a un compañero de nuestro equipo que esta en perfecto estado de salud.



A L U M N A : Isabel Luna Murillo.

N/L: 25 G/G: 6°”A” MESA: 2 SECCIÓN: 2


Fecha

d e e n t r e g a : 03 de Junio el 2011

OBJETIVO: Al término de esta práctica el alumno será capas de realizar esta técnica correctamente y la importancia clínica que se le da a este estudio.

FUNDAMENTO: La creatinina presente en la muestra reacciona con el picrato en medio alcalino originando un complejo coloreado. Se mide la velocidad de la formación de dicho complejo en periodos iniciales cortos, evitándose así la interferencia de otros compuestos. MATERIAL: → Reactivo para la determinación de creatinina → agua desionizada o destilada → 5 tubos de ensayo →1 celdilla →1 cronometro → Termoblock → Espectrofotómetro → Gradilla → Pipeta serologica de 100 µ l → Pipeta de 5 ml → Pipeta de 100 ml TECNICA: 1.- Medir el volumen de la orina con la pipeta de 100 ml.

2.-colocar en un tubo de ensayo 4 ml de agua destilada con 1ml de orina. 3.- Colocar en dos tubos de ensayo 1 ml de reactivo a uno

se le rotularlo como problema. 4.- Primero se colocara en el tubo problema a incubar y el tubo que contiene la orina esto por un lapso de tiempo de 1 minuto a 37°C. 5.- Después se procede a calibrar el espectrofotómetro con 492nm con agua desionizada o destilada. 6.- Pasado el tiempo de incubación colocar 100ml de orina al tubo problema y accionar cronometro. 7.- Colocarlo en una celdilla e introducirlo dentro del espectrofotómetro. 8.- Hacer las lecturas a los 30 y a los 90 segundos sin sacar celdilla. RESULTADOS Ab (90) --- Ab (30) [muestra] =creatinina en orina Ab (90) --- Ab (30) [estándar] 1.396 --- 0.980 0.04

x concentración

x 2 mg/dl = 20.8 mg/dl

Depuración= Volumen/min. x creatinina en orina x 10 =? Mg/min. Creatinina en suero Depuración= 1200/1440 x 20.8 x 10 =165.07 mg/min. 1.05 CONCLUCIONES:

Con esta practica mi equipo y yo aprendimos a realizar esta técnica correctamente no hubo problema alguno el único problema fue la formula ya que nos dificultaba un poco y el resultado no nos daba pero con calma y paciencia pudimos llegar al resultado requerido fue un resultado normal ya que esta prueba se le hizo a un compañero de nuestra mesa que esta muy bien de salud.



A L U M N A : Isabel Luna Murillo. N/L: 25 G/G: 6°”A”

MESA: 2 SECCIÓN: 2


Fecha


OBJETIVO: FUNDAMENTO: MATERIAL: TECNICA: RESULTADO: Ab (muestra) x 6 = mg/dl Ab (patrón) 0.159 x 6 = 5.54 mg/dl 0.172 CONCLUCIONES: Al termino de esta practica mi equipo y yo aprendimos a realizar esta técnica de manera correcta fue una técnica rápida y fácil de realizar ya que solo nos llevamos 50 minutos en la realización de la misma no hubo problema aunque se nos hizo un poco alto el resultado aunque esta en los valores normales pero el profesor Benjamín nos comentó que es debido a la ingesta de abundante carne roja y hortalizas pero no era de preocuparse.

Practica de La Glucosa

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