Analisa Pati Pada Nira

3.1 Prosedur Analisa Komponen Gula dengan HPLC (Suhardi, 1993) Cara Kerja

Kolom

: AMINEX�HPX-87H, 300 mm x 7,8 mm resin ion eksklusi

Flow rae #eekor Mo)ile P*ase Merk

: 0,! ml"meni : $I# % Reflective  Reflective Index Detector & '!( : A+uaes #min e)as Ion. aau A+ua)ies/ Konsenrasi Asam ul1a %H24& 0,0' N : e5kman

u*u

: Max !0°6 enan ekanan oma saa oerasi 344 si

isem Elusi : Isokraik   9aku : '! meni Preparasi Sampel '/ amel amel iim)a iim)an n se)an se)anak ak ! ram ram an iina* iina*kan kan ke alam alam a)un senri senri1us 1us oliei olieilen len se)anak !0 ml 2/ am amel el )e)a )e)ass lem lemak ia iam) m)a* a*ka kan n 20 ml 5am 5amur uran an ean eanol ol a)so a)solu lu: :ai airr %80: %80:20 20&, &, an an imasukkan ke alam a)un senri1us, kemuian ianaskan alam enanas air aa su*u 80° 80°6 selama 30 meni/ elain iu isenri1us enan ke5eaan minimum 2000 rm selama '0 meni 3/ uer uerna naa an n an an ia iaa a ia iam) m)a* a*kan kan laru larua an n P)-as P)-ase ea a '0; se)an se)ana ak k 2 ml/ ml/ Kemu Kemui ian an isenri1us lai an iisa*kan suernaanna 4/ Enaan Enaan an iaa iaa iam)a* iam)a* 20 ml 5amura 5amuran n eanol eanol a)solu: a)solu:air air %80:20& %80:20& iko5ok iko5ok an isenri1us, suernaanna ia)un enan suernaan an iaa se)elumna !/
P)-asea i*ilankan enan menam)a*kan Na-oksala !; samai iak er>ai enaan ?arua ?aruan n imasu imasukkan kkan kealam kealam la)u la)u akar akar 2! ml lalu iam)a*k iam)a*kan an eanol eanol a)solu: a)solu:air air %80:20& %80:20& samai ana eela* eela* iko5ok iko5ok samai samai *omoen, *omoen, kemuia kemuian n isarin isarin enan enan millex millex elan>una elan>una 5ono* sia iin>eksika iin>eksikan n ke alam HP?6 #i)ua #i)ua kur=a sanar sanar ula: ula: sukros sukrosa, a, lukosa, lukosa, 1rukosa 1rukosa masin-m masin-masi asin n '000. '000. 7!0 an !00  m, =olume in>eksi '0 µl

'0/ Per*iunan Per*iunan kaar ula iasarkan iasarkan aa inerolasi inerolasi ari kur=a sanar enan menunakan reresi linier  Cara Kerja Ala! '/ Pasan kolom sesuai sesuai enan enan komonen komonen an an akan ianalisa ianalisa 2/ ia iakan kan elu eluen en %mo)i %mo)ile le *as *ase& e& H24 0,0' N, an akan iunakan iunakan alam )ool %eluen ela* isarin enan keras sarin 0,4! µm& 3/ Masukkan Masukkan selan selan inle inle ari ari uni uni HP?6 ke alam alam )ool )ool eluen eluen 4/ Hiukan Hiukan so so konak konak ke sum)er sum)er arus )ereanan )ereanan 220  !/ Hiukan Hiukan uni ala ala %oma, %oma, eekor, eekor, an an rekorer& rekorer& enan enan menekan menekan om)ol N N

(/ Aur roram %1low rae& sesuai an iininkan an *ilankan elem)un uara an eriku alam selan 7/ Hiukan lamu eekor an aur an>an elom)an an iininkan 8/ erikan waku unuk konisionin samai ierole* aris asar %bare line& an raa @/ unikkan samel %sua* isarin enan 1iler 0,4! µm& kealam in>ekor or/ Paa saa an )ersamaan ekan om)ol sar aa rekorer  '0/ #iamkan )e)eraa saa samai semua komonen an iininkan keluar ke alam kromaoram i alam rekorer  ''/ aninkan enan sanar an iin>eksikan enan =olume an sama enan =olume samel Cara "ema!i#an Ala! '/ 6u5i kolom enan 5ara menalirkan eluen enan 1low rae 0,2 ml"meni selama '0 meni/ Kemuian kolom i5u5i enan eanol selama '0 meni enan 1low rae an sama/ Kolom ileas kemuian isiman 2/ Maikan lamu eekor  3/ Maikan oma 4/ Maikan uni HP?6 enan menekan om)ol FF !/ 6a)u semua so konak enan sum)er arus MEB#E ANA?IA PABI"AMI?CM PA#A AMPE? 6AI$: EPE$BI: NI$A BEC, NI$A KE?APA, NI$A I9A?AN, DCI6E CAH s) na/ ?akukan meoe analisa se)aai )eriku: Prearasi samel: '/ amel iim)an se)anak ! ram an iina*kan ke alam a)un senri1us olieilen se)anak !0 ml 2/ amel )e)as lemak iam)a*kan 20 ml 5amuran eanol a)solu:air %80:20&, an imasukkan ke alam a)un senri1us, kemuian ianaskan alam enanas air aa su*u 80°6 selama 30 meni/ elain iu isenri1us enan ke5eaan minimum 2000 rm 3/ 4/ !/ (/

7/

selama '0 meni uernaan an iaa iam)a*kan laruan P)-asea '0; se)anak 2 ml/ Kemuian isenri1us lai an iisa*kan suernaanna Enaan an iaa iam)a* 20 ml 5amuran eanol a)solu:air %80:20& iko5ok an isenri1us, suernaanna ia)un enan suernaan an iaa se)elumna uernaan iakai unuk eneaan aau analisa ro1il ula %monosakaria ll&, enaan iakai unuk analisa ai"amilum/ $esiu"enaan i5u5i )e)eraa kali enan aseon, enaan"resiu iuakan n =a5uum o=en su*u 70 o6/ $esiu i*aluskan im)an 300  400 m an ilarukan enan a+ua)ies '0 ml/ 6amuran iii*kan enan waer)a* 4 >am/ eela* inin am)a*kan laruan )u11er  asea 0,3 ml an am)a*kan 0,4 ml ensim amilolukosiase %('00 uni"ml/ ima

6*emi5al, / ?ouis& an )e)eraa ees oluene/ 6amuran i inku)asi aa 37 o6 selama 24 >am/ 8/ 6amuran i i a*kan ke !0 ml la)u ukur se5ara kuaniai1 an iam)a*kan eanol 8!; samai aris )aas/ @/ 6amuran isarin enan w*aman !4'/ Filra se)anak 2! ml iuakan enan =a5uum e=aoraor su*u 40 o6 samai ierole* 1ilrae 3  ! ml/ '0/ e)aikna 1ilrae isarin enan seeranka ala ulra1ilrasi/ Danan unakan keras w*aman, aar umur kolom HP?6 )isa lama an kromaoram an ierole* le)i*  )aus/ ''/ amel i in>eksikan aa mesin HP?6 unuk analisa ula an kaar ai alam samel i *iun '2/ Kaar ai i *iun %"'00  )a*an& ?uas area eak P? X =ol B# X kons/ B# %"'00 & X Boal resiu %m& X '/000 ?uas area eak B# X =ol B? X P?/ resiu %m& X P? awal %& X !! 6aaan: P?  samel. B#  sanar. eak  area luas ermukaan un5ak/

A$AL%SA L&"AK '&$GA$ GC Penukuran inka kerusakan lemak ilakukan menunakan ala sekro1oomeri C-=isi)le enan laruan BA se)aai reaen em)enuk warna %meoe kolorimeri&/ Masin-masin samel lemak se)elumna ianaskan alam ruan er)uka aa su*u ''0o6 selama 30 meni/ eela* inin, ke alam samel lemak iam)a*kan elaru n-*eksan an a+uaes enan =olume an sama/ enawa raikal )e)as an i*asilkan ieksraksi enan 5oron isa* an iisa*kan ari laisan lemak/ ?aruan Maloniale*i an i*asilkan akan )ereaksi enan BA mem)enuk senawa komleks BA-M#A )erwarna mera* mua/ Inensias warna an i*asilkan iukur aa an>an elom)an !32 nm an nilai a)sor)ansina se)anin enan kaar raikal )e)as an i*asilkan %Moore K, e/al/, '@@8&/ Analisa komosisi asam lemak  enan <6M e)elum samel lemak ianalisa enan <6M, erle)i* a*ulu ilakukan eseri1ikasi enan 5ara memasukkan 2 ram samel lemak"minak an ela* ieksrak ke alam a)un reaksi an ireaksikan enan F3 alam meanol/ 6amuran iko5ok an ianaskan selama G '! meni/ elan>una iiamkan samai er)enuk 2 laisan/ ?aisan aas iisa*kan enan senri1uasi an iuri1ikasi le)i* lan>u enan menam)a*kan Na24 unuk men*ilankan kaar airna/ Hasil eseri1ikasi imasukkan ke alam =ial unuk ianalisis le)i* lan>u enan ala <6M '  ? samel lemak an ela* ieseri1ikasi iin>eksikan ke alam kolom <6 enan menunakan meoe auosamler/ Pemisa*an ilakukan alam kolom $Bx '-M $ese5*, 30 m x 0/2! mm I#, 0/2! m, enan 1ase iam Pol ime*l xiloxane, su*u in>ekor 280o6, su*u kolom 70o6 inaikan samai 300o6 enan kenaikan '0o6"meni, la>u alir ','! m?"meni %#a=i F, anra P/, 200!&/ #eekor M an iunakan aala* Ele5ron Muli1ier #ee5or %EM#& 70 Me/ Hasil analisis )erua sekrum massa i)aninkan enan li)rar 9I??E'47 J NIB47 an eraa aa so1ware <6M osrun analsis/ %Danus 6arnie5ki, '@@8&/

A$AL%SA ASA" A"%$ '&$GA$ HPLC Prearasi amel (0 miliram samel iam)a* 4 ml H6l ( M, kemuian ianaskan selama 24 >am enan su*u ''00 6/ elan>una *asil *irolisis ineralkan enan NaH ( M *ina '0 ml an isarin enan keras sarin 9*aman 0,2 5/ 2! mikrolier samel iam)a* laruan PA % ro*alale*i & se)anak 300 ? an iauk selama ! meni/ elan>una, 20 ? samel imasukkan ke alam in>ekor K6KB/ Analisis amel amel ianalisis enan menunakan kromaora1i 5air kiner>a ini %*imau ?6 '0& aa 1ase iam kolom ?i5ros*er L '00 $P '8 %'2! x 4 mm,! m &/ e)aai 1ase erak aala* Eluent  A : meanol : !0 mM narium asea : Beera*iro1uran %BHF& an Eluent  :(! ; meanol/ Analisa ini ilakukan aa su*u 27 06 enan ke5eaan alir ' ml"meni sera ieeksi enan eekor 1luorosen aa an>an elom)an 3(0 an 4(0 nm/ anar asam amino an iunakan se)aai em)anin aala* asam asara, luama, serin, *isiin, lisin, arinin, alanin, irosin, meionin, =alin, isoleusin, leusin, lisin, an 1enilalanin/ Analisis 'a!a #aa kromaoram asam amino *asil analisis K6KB ianalisa se5ara eskrii1/