UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA CELULAR Y DE LOS TEJIDOS I
Informe:
“SEPARACIÓN “SEPARACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS PLASMÁTICAS”
27 de Abr!" 2#
%$ OBJETIVOS: • •
Separar albúmina y globulina a partir de una muestra de sangre. Determinar cuantitativamente por medio de una curva estándar la concentración de proteínas totales, albúmina y globulinas presentes en el plasma por el método de Biuret.
INTRODUCCIÓN: Las proteínas plasmáticas son un conjunto de moléculas ormadas por la unión de diversos aminoácidos !ue se encuentran en el plasma sanguíneo. "onstituyen un grupo de apro#imadamente cincuenta proteínas contenidas en el lujo sanguíneo y la concentración presente de cada una de las proteínas es muy variable oscilando desde los $.$%g&%$$mL 'asta los (g&%$$mL, siendo el contenido total de proteínas en el plasma de )*+g&%$$mL Las principales proteínas plasmáticas, !ue son a- lbúmina /constituye el ((0 del total de las proteínas plasmáticas con una cantidad apro#imada de 1g&%$$mL- %. b- 2%*globulinas 2%*glicoproteína ácida, 2 %*antitripsina, 2%*etoglobulina, 2 %* anti!uimiotripsina, transcortina, in'ibidor inter* 2 %* de la tripsina, proteína transportadora de retinol, 2 %*lipoproteínas, 2 %*B y 2%*3 glicoproteínas /(0 del total, de $.4*$.)g&%$$mL- %. c- 25*globulinas 'aptoglobina, 2 5*macroglobulina, ceruloplasmina, % 'emope#ina y transerrina /60 del total, de $.1*$.6g&%$$mL- . d- 7*globulinas 7*globulina ligadora de esteroides, 7 5*microglobulina, ibrinógeno, 7%*glicoproteína especíica del embara8o, 7*lipoproteínas y proteína " reactiva /%40 del total, de $.)*%.%g&%$$mL- %. e- 9*globulinas :g;, :g<, :g, :gD, :g= /%%0 del total, de $.>*%.(g&%$$mL- %. ?or ello es de vital importancia conocer los componentes de la sangre /proteínas plasmáticas-, así como la determinación cuantitativa de dic'os componentes para ello se tomó una muestra por medio de una venopunción@ a la muestra obtenida se separó en globulinas, proteínas totales y en albúminas por medio de una centriugación de 5$$$ rpm por %$ minutos para inalmente cuantiicarlos en el espectrootómetro a (1$ nm.
RESULTADOS Y ANÁLISIS =n la gráica % se muestra la absorbancia en unción de la concentración de la solución estándar de proteínas obtenida de la tabla %. =sta gráica se ajusta a un y =mx + b modelo lineal de la orma !uedando así la siguiente ecuación y =0.0831 x + 0.001
con una A5 de $.666+
Tabla 1. Valores de absorbancia y concentración en mg de la solución estándar.
Absorbancia
Concentración !"#
$ $.$(+ $.%5$ $.%>> $.544 $.56%
$ $.> %.1 5.% 5.+ 4.(
Grafica 1. Curva estándar de Proteínas
Curva Estandar 0.# 0.# 0."
f%&' ( 0.0)& * 0 R+ ( ! A,-or,n/
0."
Lner %A,-or,n/'
Absorbancia 0.!
Lner %A,-or,n/'
0.! 0.0 0 0 0. ! !. " ". # #. $
Concentración (mg)
Tabla 2. Se muestran los valores de concentración en función de la absorbancia en dos muestras de la solución roblema de roteínas totales y alb!minas en la muestra de sangre.
Solución ?roblema de ?roteínas 3otales
Solución ?roblema de lbúminas
bsorbancia "oncentración /mg-
$.($5 ).$5(
$.4$6 4.>$1
"omo los valores de concentración en mg ueron muy altos, se diluyeron las muestras de proteínas totales y albúmina ($($ con agua destilada. Los valores de concentración a estas nuevas absorbancias se muestran a continuación. Tabla ". Se muestran los valores de concentración en función de la absorbancia en dos muestras de la solución roblema de roteínas totales y alb!minas en la muestra de sangre diluidas #$%#$
Solución ?roblema de ?roteínas 3otales $.5%1 5.()%
bsorbancia "oncentración /mg-
Solución ?roblema de lbúminas $.%51 %.1>64
CÁLCULOS ?ara reali8ar la curva estándar se reali8aron los siguientes cálculos de disoluciones 1
actor de dilución
0.5
=2
/puesto !ue al reali8ar la lectura de las proteínas
totales y de la albumina las absorbancias correspondientes no entraban dentro del 5
rango de la curva estándar-. actor de dilución 5
0.25
=20
/ se tomaron $.5( mL
de plasma y se disolvieron en 1.>( mL de una disolución al 540 ?&C de sulato de sodio
"álculo para obtener la concentración de proteínas totales De acuerdo a la tabla 4, el valor de concentración para la absorbancia es de 5.()% mg
2.561 x 20 x 2=102.44 mg
1 mL−102.44 mg 100 mL −10247.2 mg
10247.2 mg =10.2472 g
Proteínastotales =10.247 g / 100 mL
"álculo para obtener la concentración de albúmina De acuerdo a la tabla 4, la concentración para la absorbancia es de %.1>6 mg
1.479 x 20 x 2=59.16 mg
1 mL−59.26 mg 100 mL −5916 mg
10247.2 mg =5.916 g
Albúmina =5.916 g / 100 mL
"álculos para la concentración de globulinas Proteínas Totales− Albúmina= Globulinas 10.247−5.916 = 4.331
globulinas =4.331 g / 100 mL
Según los resultados obtenidos comparados con los niveles de proteínas tanto totales cómo albuminas reportados en la literatura % están por encima de estos. =n el siguiente cuadro se aprecia la comparación de los resultados arrojados en la práctica.
Tabla &. Se observan los niveles normales de roteínas en la sangre en orcenta'e ara un adulto romedio y los niveles de roteínas lasmáticas obtenidos en la ráctica mediante su cuantificación con una curva estándar or el m(todo de )iuret.
?roteína
3otales lbumina ;lobulina
iveles ormales de proteínas plasmáticas /g&%$$mL)*+ 1 5 * 1.5
iveles de proteínas obtenidos en la práctica /g&%$$mL%$.51> (.6%) 1.44%
=sto se pudo deber en primer lugar a !ue la venopunsión ue 'ec'a en un sujeto !ue no guardó ayuno entonces, se pudo 'aber incrementado los niveles en sangre de una proteína , la insulina, cómo se muestra en la imagen %. *magen 1. +etabolismo en el te'ido adioso donde se ve imlicada la insulina2
CONCLUSIONES La determinación de proteínas plasmáticas se ve aectada por no guardar ayuno en el sujeto en el !ue se reali8a la venopunsion. Se deben diluir las muestras problema de albumina y proteínas totales con el in de !ue las absorbancias de estas entren dentro del rango de las absorbancias de la curva estándar pues no se sabe si el sujeto, al !ue se le reali8a la venopunsion, tiene patologías !ue aecten los parámetros normales de proteínas plasmáticas como lo son el C:E, la Eepatitis B ó " y el embara8o 4.
BIBLIO$RA%&A %. Devlin, 3'omas <. Bio!uímica. 1 a ed. =spaFa, =d. Aeverté. 5$$1. pp %$(* %$+. 5. Casudevan, D.<, SreeGumari, S. H3e#to de Bio!uímica para =studiantes de
