DESARROLLO DE Saccharomyces cerevisiae cerevisiae ATCC 4126 POR CULTIVO POR LOTES I.
MARCO TEÓRICO
Para un cultivo de biomasa ya sea levadura o bacterias se necesita un reactor o fermentador la cual será la herramienta principal para la producción de esta. Éste provee todas las condiciones necesarias para el cultivo, tales como agitación, regulación de temperatura, suministro de oxígeno, entradas para adición de nutrientes, control del pH, etc. stas diversas condiciones de crecimiento fueron reali!adas por distintos grupos en el laboratorio, laboratorio, condicione condicioness las cuales se pueden pueden encontrar encontrar los efectos efectos de la temperatura temperatura,, sub óptima óptima "o ambien ambiente# te#,, temper temperatu atura ra crític críticaa "shoc$ "shoc$ t%rmic t%rmico#, o#, con concen centrac tracion iones es de a!&car a!&cares, es, medios medios enri'uecidos, limitación de oxígeno, entre otros. (a evolución del cultivo en el tiempo, sigue una curva típica la cual recibe el nombre de )curva de crecimiento en batch*. (os sucesos 'ue tienen lugar durante la misma pueden separarse en cuatro fases perfectamente diferenciables. n primer lugar existe una fase donde donde prácticamente no hay división celular pero sí aumento de la masa individual de los microorganismos "fase )lag* o fase de retardo#. (e sigue una etapa donde el crecimiento ocurre a velocidad específica " µ# máxima y constante + µm "fase exponencial#. l final de esta fase se alcan!a la máxima concentración microbiana. Posteriormente hay un rápido período de desaceleración donde
µ → -
y se entra en la fase estacionaria la cual es causada por
agotamiento de alg&n nutriente "el sustrato limitante# o bien por acumulación de inhibidores. urante esta fase la concentración microbiana "o de biomasa# permanece constante. /inalmente se llega a una <ima etapa donde la concentración de biomasa disminuye por autolisis o como consecuencia del metabolismo endógeno "fase de decaimiento#. (a duración duración de cada cada una de estas estas fases fases es función función del microorg microorgani anismo smo en estudio estudio y de la composición del medio de cultivo. n particular la fase lag depende además de la fase de crecimiento en 'ue se encuentran las c%lulas en el momento de ser sembradas y de la composición del medio de cultivo en 'ue fueron crecidas. 0i %ste es igual a la composición del medio en 'ue se van a sembrar y las c%lulas están en fase exponencial, la duración de la fase lag, en general se acorta y puede llegar a desaparecer, lo cual es deseable ya 'ue constituye tiempo perdido.
II. -
OBJETIVOS ise1ar ise1ar y reali!ar una experienci experienciaa de cultivo celular celular por lotes empleando empleando una cepa cepa de 0. cerevisiae 233 4567.
III.
PROCEDIMIENTO
5. 6.
Actividade ise1o del medio de cultivo ctivación celular y desarrollo del inóculo eterminación de la cin%tica de crecimiento de la biomasa eterminación de la cin%tica de consumo de la fuente de carbono eterminación del )umax* y de : x;s en c%lulas. valuar el valor del pH durante toda la cin%tica de cultivo. CONSIDERACIONES Pa!a e" die#$%
5. 6. 8. 4.
de carbono CONSIDERACIONES &ENERALES Preparación del medio de mantención "gar, nutriente y esterili!ación# l resembrado de c%lulas en medio de mantención Preparación y esterili!ación de medio para inoculación con asa bacteriológica. ise1o y preparación de medio de activación y fermentación para cin%tica de crecimiento
5. 6. 8. 4. 9. 7. -
microbiano. 9. sterili!ación de materiales de vidrio necesarios. 7. eterminación de curvas de calibración por t%cnicas analíticas. >. Inoculación de medios y seguimiento de cin%tica de crecimiento microbiano. -
2omando en cuenta las consideraciones ya mencionadas anteriormente se procedió a utili!ar un matra! de 5 ( en dónde se reali!ará nuestra cin%tica de crecimiento, siendo un volumen aceptable de 59- ml. de medio.
Die#$ de 'edi$ de 'a(te(ci)( N*t!ie(te E/t!act$ de "evad*!a Pe0t$(a &"*c$a A,a!
C$(ce(t!aci)( +,-" 5666-
Die#$ de 'edi$ de Activaci)( N*t!ie(te Saca!$a E/t!act$ de "evad*!a E/t!act$ de 'a"ta S$"*ci)( de a"e
C$(ce(t!aci)( 5- g;l 8 g;l 8 g;l 9 ml;l
C$'0$ici)( de "a $"*ci)( de a"e 1 vece c$(ce(t!ad$ Sa"e CaC"2. 22 3(SO4. 2
C$(ce(t!aci)( +,-" 5.6 -.55
-.-7 -.-9 -.-5 -.--9 6> mg;l -.-6?
5eSO4. 2 C*SO4. 2 C$C"2. 62 M$O7 M,C"2. 62 NaC"
-
C$(ide!aci$(e 8i(a"e Para una @f+5.? g;l hAB5 2emperatura + 89C3 gitaciónD 6-- rpm Die#$ de" 'edi$ de 8e!'e(taci)(
5*e(te C N M, ; P
N*t!ie(te 0acarosa "EH4#60F4 g0F4. >H6H6PF4 HH6PF4
9 MO 49 G -.4 -.9 6
9 E"e'e(t$ 46.5 65.6-5 G.?7 6?.G6 66.67
: /- -.975 6.899 64.79 9>.?4 55.58
S$ +, 8.6 -.GG4 -.-G9 -.-4-4 -.65
