Laporan Imunoserologi
Pemeriksaan HBaAg Metode ELISA
Oleh
:
Kelompok 3 Luh Put Putu u Suc Suciiana Ca Candra Dewi
P07 P073!0 !03037
"ust#ari $adurani "iri
P073!0303%
&i 'ade (uni (uni )risna )risna Dewi
P073!030!
&i Putu 'eri Kusumawati
P073!030!3
I Putu *andem +rista Putra
P073!030!,
"st "st +# +#u )a )ari Di-a Di-a Prad Pradn# n#aa Dewi Dewi
P07 P073! 3!0 030 30!7 !7
'arissah )hamrin
P073!030!%
K.'.&)./I+& K.S.+)+& /1I POLI).K&IK K.S.+)+& D.&P+S+/ $2/2S+& +&+LIS K.S.+) K .S.+)+& +& 0,
Pemeriksaan HBsAg metode ELISA
ari ari4t 4tang anggal gal
: Sa5t Sa5tu6 u6 , Des Desem em5e 5err 0, 0,
I. Tujuan
2ntuk menentukan secara kuantitati adan#a epatitis * Surace +ntigen 8*S+g9 di dalam serum atau plasma pasien II. Metode ode
'etode #ang digunakan #aitu .LIS+ 8 en#me;linked immunosor5ent assa#9 III.Prinsip
+nti5o +nti5od# d# ganda ganda
idase 8/P9 se5agai larutan kon?ugat1 Selama pemeriksaan6 adan#a *s+g dalam spesimen akan 5ereaksi dengan anti5o anti5odi;a di;anti nti5od 5odii terse5 terse5ut ut untuk untuk mem5en mem5entuk tuk komple kompleks ks imun imun
anti5odi; /P=1 Setelah materi #ang tidak terikat tercuci selama pemeriksaan6 su5strat ditam5ahkan ditam5ahkan untuk menun?ukkan menun?ukkan hasil tes1 'unculn#a 'unculn#a warna 5iru di sumur sumur mikrotite mikrotiter r mengindikasikan *s+g reakti1 )idak adan#a warna menun?ukkan hasil non reakti di spesimen1 IV. IV. Dasa Dasarr teo teori ri
Pen#akit hepatitis * dise5a5kan oleh ineksi -irus hepatitis * 8@*91 @irus ini men#erang sel hati dengan melekat pada reseptor spesiik di mem5ran hepatosit dan melakukan penetrasi ke dalam sitoplasma hepar1 Per?alanan klinis dan diagnosis ineksi @* @* dita ditand ndai ai denga dengan n peme pemeri riks ksaa aan n sero serolo logi gi terh terhad adap ap anti antige gen n dan dan anti anti5od 5odii #ang #ang ter5entuk ter5entuk dan 5eredar 5eredar di sirkulasi sirkulasi11 Penanda serologi #ang pertama pertama kali dapat dideteksi dideteksi #aitu *s+g #ang muncul minggu se5elum tim5ul ge?ala1 8/ina6 dkk16 00A9 Deteksi *s+g dapat dilakukan dengan 5e5erapa metode pemeriksaan6 #aitu serologi dan Pol#merase Chain /eaction8PC/91 2?i serologi antara lain menggunakan
metode .n#me Immunoassa# 8.I+96 .n#me Linked Immunoassa# 8.LIS+96 .n#me Linked Blouroscent +ssa# 8.LB+96 Immunochromatograph# )est 8IC)9 atau rapid test6 /adio /adio Immunoa Immunoassa ssa# # 8/I+96 8/I+96 dan Chemilu Chemilumi mines nescent cent 'icrop 'icropart articl iclee Immunoa Immunoassa ssa# # 8C'I+91 Sedangkan untuk mendeteksi D&+ -irus dapat digunakan PC/1 8/ina6 dkk16 00A9 .LIS+ adalah suatu singkatan 5ahasa Inggris #ang dise5ut dengan : 8.n#me; linked linked immunosor immunosor5ent 5ent assa#9 assa#9 atau penetapan kadar immunosor5en immunosor5en taut;enim taut;enim #ang merupakan suatu u?i serologis1 )eknik .LIS+ pertama kali diperkenalkan pada tahun %7 oleh Peter Perlmann dan .-a .ng-all1 'enggunakan teknik .LIS+ dalam 5idang imunologi imunologi untuk menganalis menganalisis is interaksi interaksi antara antigen dan anti5odi di dalam suatu sampel6 sampel6 dimana dimana intera interaksi ksi terse5 terse5ut ut ditand ditandai ai dengan dengan menggu menggunaka nakan n suatu suatu enim enim #ang #ang 5erungsi se5agai pelapor4signal1 Selan?utn#a digunakan se5agai u?i kualitati untuk mengetahui ke5eradaan suatu anti5odi4antigen dengan menggunakan anti5odi4antigen spesiik1 )eknik .LIS+ ?uga dapat diaplikasikan dalam u?i kuantitati untuk mengukur kada kadarr
ant anti5odi 5odi4a 4ant ntiigen gen
spekt pektro rootom otomet eter er
dan dan
#ang ang deng dengan an
diu? diu?ii car cara
deng dengan an
mengg enggun unak akan an
menen enenttukan ukan
?um ?umlah
alat alat
5ant 5antu u
pena penam m5aha 5ahan n
5eru 5erupa pa kada kadar r
anti5odi4antigen6 sehingga dapat di5uat suatu kur-a standard antara kadar anti5od# atau antigen #ang dapat dihitung 5erdasarkan a5sor5ansin#a18 Ichwan6 0!9 .LIS+ dianggap dianggap pemeriksaan pemeriksaan #ang memiliki memiliki spesiit spesiitas as dan sensitii sensitiitas tas #ang tinggi tinggi #ang #ang mampu mampu menun? menun?ang ang diagnos diagnosaa klinis klinis hepati hepatitis tis *1 .LIS+ .LIS+ 8 .I+ 9 di5agi di5agi men?adi dua macam #aitu homogenous .I+ dan heterogenous .I+1 omogenous .I+ 5erguna untuk pemeriksaan 5ahan o5at;o5atan6 hormon dan lain;lain1 Sedangkan heterogenous .I+ 5erguna untuk pemeriksaan 5ahan #ang memiliki 5erat molekul 5esar misaln#a misaln#a antigen dan anti5odi1 anti5odi1 Pemeriksaan Pemeriksaan parameter parameter petanda serologis serologis hepatitis * termasuk dalam kelompok kedua #aitu heterogenous .I+1 +da tiga tahapan penting dalam u?i .LIS+ #aitu : 1 Pela Pelapi pisa san n 8 coat coatin ing g 9 denga dengan n anti antige gen n atau atau anti5od anti5odii pada pada plate plate 8 Phas Phasee padat padat 91 Pelapisan dengan dengan antigen untuk penentuan anti5odi untuk penentuan antigen1 1 Penam5 Penam5aha ahan n 5ahan 5ahan #ang #ang ditent ditentuka ukan n 8 diperiks diperiksaa 96 misaln# misaln#aa serum6 serum6 plasma6 plasma6 sali-a sali-a dan cairan tu5uh #ang lain1
31 Penam5ahan Penam5ahan detektor detektor #ang 5erungsi 5erungsi untuk untuk mendeteks mendeteksii ikatan +g +g +5 #ang #ang ter?adi1 ter?adi1 +da dua detektor #ang digunakan #aitu : a1 Penam5ahan
kon?ugat
#aitu
antigen
atau
anti5odi
5erla5el enim6 misaln#a orse /adish Pero>idase
#ang
8 /PO91 +lkaline
Phosphatase62rease6"lukose;O>idase8"OP9 dan lain;lain1 51 Penam5ahan Penam5ah an warna warna
pada
su5strat reaksi1 reaksi1
#ang 'isaln# 'isaln#aa
5erungsi )'*
mem5eri
8)et 8)etra ra
peru5ahan
'eth#l 'eth#l *enidi *enidine6 ne6 O;
)oluidine6 )oluidine6 OPD6 +*)S dan lain;lain1 .LIS .LIS+ + send sendir irii terd terdir irii dari dari 5e5e 5e5era rapa pa macam macam meto metode de dian dianta tara ran# n#aa .LIS .LIS+ + kompetiti kompetiti66 .LIS+ dou5le dou5le sandwich sandwich antigen antigen atau anti5odi dan indirect indirect .LIS+ #ang ketigan#a memiliki prinsip dasar reaksi #ang sama #aitu reaksi +g ; +51 8Baial6 09 V.
Alat dan baan an
a1 +lat 1 Sumu Sumurr mik mikro roti tite ter r 1 'ikro kropipet 31 )ip !1 Inku5at 5ator ,1 .lis .lisaa reade eader r A1 .lis .lisaa wash washer er 51 Sampel 1 Sampel Sampel seru serum m pasie pasien n
c1 /eagen 1 .n# .n#m m Con? Con?ug ugat atee 1 Posi Positi ti Cont Contro roll 31 &ega &egati ti Cont Contro roll !1 Samp Sampel el dill dillue uent nt ,1 Color + dan * A1 Stop Stop Solu Soluttion 71 ash *u *uer
VI. !ara "erja a1 Pem5 Pem5uat uatan an a ash *u *uer er 1 a ash sh 5uer 5uer pekat pekat dicampurkan dicampurkan dengan dengan aEuadest aEuadest per5andi per5andingan ngan 8:%9 8:%9 1 Campuran Campuran #ang #ang sudah ?adi disimpan disimpan pada suhu ruang selam selamaa seminggu seminggu 51 Prosedur Pemeriksaan 1 Semua reagen dan specim specimen en dikondis dikondisikan ikan pada suhu ruang 1 Siapkan Siapkan nomor #ang #ang di5utuhkan di5utuhkan untuk untuk sumur6 sumur6 #ang #ang terdiri terdiri dari sumur 5lanko6 5lanko6
sumur control positi6 sumur untuk control negati dan sumur untuk setiap specimen1 )ulis nomor seri untuk control dan specimen pada kolom1 31 Spesimen Spesimen diluents diluents ditam5ahka ditam5ahkan n se5an#ak se5an#ak 0Fl pada pada masing;ma masing;masing sing sumur sumur !1 Spesimen6 Spesimen6 control control negati-e6 negati-e6 control control positi positi ditam5ahka ditam5ahkan n se5an#ak se5an#ak 00Fl sesuai sesuai ,1 A1 71 H1
dengan kolom data1 8sediakan sumur untuk 5lanko9 Kemu Kemudia dian n dihom dihomoge ogenka nkan n Plate Plate diink diinku5as u5asii pada pada incu5at incu5ator or suhu suhu 37o C G ?am .n#m con?ugate con?ugate ditam ditam5ahkan 5ahkan pada setiap setiap sumur sumur G ,0Fl ,0Fl o Plate Plate diink diinku5as u5asii pada pada incu5at incu5ator or suhu suhu 37 C G 30 menit
%1 Setiap Setiap sumur sumur dicuci dicuci dengan wash 5uer 5uer dengan dengan prosedur prosedur : Penc Pencuci ucian an #ang #ang dila dilaku kuka kan n haru haruss sesu sesuai ai denga dengan n petu petun? n?uk uk apa5i apa5ila la ada • •
pencucian #ang tidak sempurna maka akan mempengaruhi hasil1 Semua isi sumur dimasukkan pada la5u cuci1 Kemudian ditam5hakan wash
5uer 3,04le5ih1 Pastikan tidak ada cairan di dalam da lam tip dan setelah pemipetan terakhir1 • 01 Color + * dimasukkan pada setiap sumur sumur se5an#ak ,0Fl 1 Plate diinku5asi diinku5asi pada water5ath4inc water5ath4incu5ator u5ator 37o G 30 menit 1 entikan reaksi dengan penam5ahan penam5ahan ,0Fl stopping solotion solotion disetiap sumur 31 +5sor5ansi setiap sumur sumur di5aca pada J !,0nm J A30nm !1 Perhit Perhitung ungan an Single wa-e length 8J!,0nm9 • OD OD!,0 OD*C!,0 sampel control •
Dual wa-e length 8JA30nm9 OD OD!,04A30
VII. VII. Interpr Interpreta etasi si asil asil Hasil pemeriksaan #alid jika $ 1 &ila &ilaii OD 5lan 5lanko ko kura kurang ng dari dari 010 0100 0 8 sumu sumurr dari dari kont kontro roll 5lan 5lanko ko han# han#aa 5eri 5erisi si
kromogen dan stop solution9 1 &ilai &ilai OD kontro kontro negat negati i harus harus sama sama atau atau kurang kurang dari dari 8≤9 01001 Dieliminasi kontrol negati dengan nilai OD le5ih 5esar dari 8>9 01001 $ika nilai keluar dari 5atas6 pemeriksaan in-alid dan harus di ulangi1 31 &ilai &ilai OD kontro kontroll posit positi i sama sama atau atau le5ih le5ih 5esar 5esar 8≥9 01,001 $ika nilai OD kurang dari 01,006 pemeriksaan in-alid dan harus di ulangi1 Peritungan kontrol $ &ilai cut;o : CO &C> 1 6 &C> : nilai a5sor5ansi rata;rata kontrol negati-e 8?ika &C> ≤ 010, 6 &C> harus dihitung 010,9 Interpretasi asil $ 1 Spesimen Spesimen dengan dengan a5sor5ansi a5sor5ansi kurang kurang dari 89 89 nilai nilai cut;o cut;o din#ata din#atakan kan negati1 negati1 1 Spes Spesim imen en deng dengan an nila nilaii a5so a5sor5 r5ans ansii le5i le5ih h 5esa 5esarr atau atau sama sama deng dengan an 8≥9 nilai cut;o din#atakan positi1 VIII.Hasil VIII. Hasil pengamatan pengamatan
Identitas sampel : $enis sampel •
: serum
"am5ar sumur mikrotiter
+
*
C
D
.
B
"
asil pemeriksaan *s+g .lisa Sumur
+ * C D . B " " B .
&ama sampel
*lanko Kontrol positi Kontrol positi Kontrol negati Kontrol negati &i &#oman Lasia
Suhaili
Indra Pradani Sulaiman
Kode sampel4$enis kelamin ; ; ; ; ; 4P
asil pemeriksaan
334L
31A3
013! 317 1%%A 01A0 0 1! 7 31A%7
1A
Pem5acaan a5sor5ansi dilakukan pada single wa-elength #aitu !,0nm sehingga : • &ilai OD kontrol positi
•
a1 OD OD!,0 OD*C!,0 317 013! 310%3
51 OD OD!,0 OD*C!,0 1%%A 013! 1HA
&ilai OD kontrol negati a1 OD OD!,0 OD*C!,0 317 013! 310%3
51 OD OD!,0 OD*C!,0 1%%A 013! 1HA
Pada perhitungan di atas6 nilai OD kontrol positi le5is 5esar dari 01,00 #ang 5erarti pemeriksaan -alid1 &amun nilai OD kontrol negati dan 5lanko le5ih 5esar dari 0100 010066 hasi hasill ters terse5u e5utt 5elu 5elum m 5isa 5isa dikat dikatak akan an in-a in-ali lid d kare karena na kemu kemungk ngkin inan an ter? ter?ad adii
kontami kontaminas nasii pada saat saat pencuc pencucian ian dengan dengan .lisa .lisa washer washer sehing sehingga ga pemeri pemeriksa ksaan an tidak tidak diulang dan dianggap -alid1 *erikut merupakan perhitungan kontrol : Cut;o • &C> CO &C> 1 6 01,3,, 1 6 1!,, *erdasarkan *erdasarkan nilai cut;o cut;o 6 nilai sampel #ang diperiksa diperiksa dari B sampai . mele5ihi mele5ihi nilai cut;o sehingga sampel terse5ut din#atakan positi atau reakti terdapat *s+g1 I%. Pembaasan Pembaasan %. "e "esi simp mpul ulan an *erdasarkan *erdasarkan pemeriksaan pemeriksaan *s+g metode .lisa .lisa terhadap terhadap sampel sampel MM1 Didapatkan
hasil positi terdapat *s+g1 %I. Da&tar pustaka
Ichwan Ichwan11 0!1 0!1 Teknik Teknik Elisa Pemeriksaan Pemeriksaan Kuantitat Kuantitatif if Mannan Binding Binding Lectin (MBL) Pada
Plasma
Darah1 Darah1
Online1
http:44openwetware1org4images4archi-e4a4aa40!0,3H3N )eknik.lisa8Ichwan+lams#ahLu5is91pd /ina6 dkk16 00A1 Faktor 00A1 Faktor Risiko Heatitis B ada Tenaga Tenaga Kesehatan Kota Pekan!aru" Online1 http:44?ournal1k1unpad1ac1id4inde>1php4mk54article4-iewBile4!,4pd07 Baial1
01 Per!andingan
Pre#alensi H!sag Positif Pada Penderita
$ang $ang
Memeriksakan Diri Di Rumah %akit &slam 'ondang Legi Malang Dengan Metode Elisa" 'alang +kademi +kademi +nalis Kesehatan 'alang
