Hari / tanggal : Senin / 6 September 2014 Pertemuan : 1 PEMERIKSAAN GLUKOSA URINE CARA FEHLING
I.
TUJUAN 1. Tujuan Instruksional Umum
Untuk dapat memahami cara pemeriksaan glukosa dalam urine.
2. Tujuan Instruksional Khusus
Untuk dapat melakukan pemeriksaan glukosa dalam urine dengan cara fehling
Untuk dapat mengetahui kadar glukosa dalam urine probandus dengan cara fehling
II.
METODE Metode yang digunakan dalam pemeriksaan glukosa uinr adalah cara fehling.
III.
PRINSIP Glukosa dalam urine dapat mereduksi garam-garam kompleks dalam reagen fehling yaitu ion kupro dan membentuk endapan Cu 2O berwarna hijau, kekuningan, sampai merah.
IV.
DASAR TEORI Urin atau air seni adalah cairan yang diekskresikan oleh ginjal yang kemudian akan dikeluarkan dari dalam tubuh melalui proses urinasi. Fungsi utama urine adalah untuk membuang zat sisa seperti racun atau obat-obatan dari dalam tubuh. Eksreksi urin diperlukan untuk membuang molekul-molekul sisa dalam darah yang disaring oleh ginjal dan untuk menjaga homeostasis cairan tubuh. Urin disaring di dalam ginjal, dibawa melalui ureter menuju kandung kemih, dan akhirnya dibuang keluar tubuh melalui uretra. Urin terdiri dari air dengan bahan terlarut berupa sisa metabolisme (seperti urea), garam terlarut, dan materi organik. Cairan dan materi pembentuk urin berasal dari darah atau cairan interstisial (Chernecky and Berger, 2008).
Komposisi urin berubah sepanjang proses reabsorpsi ketika molekul yang penting bagi tubuh, misal glukosa, diserap kembali ke dalam tubuh melalui molekul pembawa. Cairan yang tersisa mengandung urea dalam kadar yang tinggi dan berbagai senyawa yang berlebih atau berpotensi racun yang akan dibuang keluar tubuh. Materi yang terkandung di dalam urin dapat diketahui melalui urinalisis. Urea yang dikandung oleh urin dapat menjadi sumber nitrogen yang baik untuk tumbuhan dan dapat digunakan untuk mempercepat pembentukan kompos Dari urin kita bisa memantau penyakit melalui perubahan warnanya. (Chernecky and Berger, 2008) Glukosa, suatu gula monosakarida adalah salah satu karbohidrat terpenting yang digunakan sebagai sumber tenaga bagi hewa dan tumbuhan. Glukosa merupakan salah satu hasil utama fotosintesis dan awal bagi respirasi. Glukosa merupakan sumber tenaga yang terdapat dimana-mana dalam biologi. Kita dapat menduga alasan mengapa glukosa, dan bukan monosakarida lain seperti fruktosa, begitu banyak digunakan. Glukosa dapat dibentuk dari formaldehida dalam keadaan abiotik sehingga mudah tersedia bagi sistem biokimia primitif. Rendahnya glikosilasi ini dikarenakan glukosa yang kebanyakan berada dalam isomer siklik yang kurang relatif. Meski begitu komplikasi akut seperti diabetes, kebutaan, gagal ginjal, dan kerusakan saraf periferal, kemungkinan disebabkan oleh glikosilasi protein. Glukosa dapat diperiksa dengan melakukan tes glukosa pada urin si penderita. Tes glukosa urin dapat dilakukan dengan menggunakan reaksi reduksi, dikerjakan dengan menggunakan fehling, benedict, dan clinitest. Ketiga jenis tes ini dapat digolongkan dalam jenis pemeriksaan semi-kuantitatif. Sedangkan tes glukosa dengan reaksi enzimatik dilakukan dengan metode carik celup yang tergolong dalam pemeriksaan semi-kuantitatif dan kuantitatif. (Subawa.2010) Pereaksi fehling terdiri dari dua bagian, yaitu fehling A dan fehling B. Fehling A adalah larutan CuSO4, sedangkan fehling B merupakan campuran larutan NaOH dan kalium natrium tartrat. Pereaksi fehling dibuat dengan mencampurkan kedua larutan tersebut, sehingga diperoleh suatu larutan yang berwarna biru tua. Dalam pereaksi fehling, ion Cu2+ terdapat sebagai ion kompleks. Pereaksi fehling dapat dianggap sebagai larutan CuO. (Anonim.2010)
V.
ALAT DAN BAHAN a. Alat-alat
VI.
b. Bahan
1. Tabung Reaksi
(2 buah)
1. Larutan Fehling A
2. Rak tabung reaksi
( 1 buah)
2. Larutan Fehling B
3. Penjepit Tabung
(1 buah)
3. Sampel urin A dan B
4. Pipet Ukur 1 mL
(1 buah)
4. Label
5. Api Bunsen
(1 buah)
5. Tissue
6. Ball Pipet
(1 buah)
6. aquadest
7. Beaker glass
(2 buah)
8. Botol semprot
(1 buah)
CARA KERJA 1. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan. 2. Dipipet 1 mL Fehling A dan 1 mL fehling B, kemudian dicampur sampai homogen (1:1) 3. Dihomogenkan dan dimasukkn 0,5 mL sampel urine ke dalam tabung, sehingga perbandungan reagen fehling dengan sampel urine adalah 4:1 4. Dipegang bagian atas tabung dan dipanaskan bagian leher tabung hingga terbentuk warna konstan 5. Diperhatikan perubahan warna dan kekeruhan yang terjadi. 6. Dibaca dan dicatat hasil yang didapat.
VII.
INTERPRETASI HASIL Negatif (-)
: tetap biru atau hijau keruh
Positif 1 (+1) : Keruh, warna hijau agak kuning (0,5 – 1 %) Positif 2 (+2) : Kuning kehijauan dengan endapan kunig (1 – 1,5%) Positif 3 (+3) : Kuning kemerahan dengan endapan kuning merah (2-3,5 %) Positif 4 (+4) : merah jingga sampai merah bata (> 3,5 %)
VIII.
HASIL PENGAMATAN No. 1
Gambar
Keterangan Dipersiapkan alat-alat yang akan digunakan : 1. Tabung reaksi beserta rak 2. Api Bunsen 3. Penjepit tabung
2
4. Beaker glass Disiapkan sampel urine A dan sampel urine B
3
Dipipet reagen Fehling A dan Fehling B sebanyak 1 mL
4
Hasil campuran reagen Fehling
5
Dipipet sampel Urine masingmasing 0,5 mL
6
Dimasukkan
masing-masing
sampel urine ke dalam tabung berisi reagen Fehling
7
Masing-masing
sampel
dipanaskan pada api Bunsen.
8
Dipanaskan sampai berubah warna menjadi konstan. Kanan : Sampel A Kiri : Sampel B
9
Hasil dari perubahan warna sampel.
Data hasil praktikum Perlakuan N
Komposisi bahan
Sebelum
dipanaskan
o 1.
Sesudah
1ml Fehling A + 1ml
Kuning keruh
Fehling B + 0,5 ml
(endapan
sampel urine A
Biru tua
kuning)
Interpretasi hasil
++
2.
1ml Fehling A + 1ml
Larutan keruh
Fehling B + 0,5 ml
berwarna kuning
sampel urine B
IX.
Biru tua
kehijauan
+
PEMBAHASAN Diabetes adalah suatu penyakit yang dapat dideteksi melalui urin. Urin seorang penderita diabetes akan mengandung gula yang tidak akan ditemukan dalam urin orang yang sehat. Pemeriksaan terhadap adanya glukosa dalam urine termasuk pemeriksaan penyaring. Untuk menyatakan keberadaan suatu glukosa, dapat dilakukan dengan cara yang berbeda- beda. Cara yang tidak spesifik dapat dilakukan dengan menggunakan suatu zat dalam reagen yang berubah sifat dan warnanya jika direduksi oleh glukosa. Diantaranya adalah penggunaan reagen fehling yang dapat dipakai untuk menyatakan adanya reduksi yang mengandung garam cupri. Sedangkan pembuktian glukosuria secara spesifik dapat dilakukan dengan menggunakan enzim glukosa oxidase (Prasetya, 2011). Pada praktikum ini Metode pemeriksaan yang digunakan yaitu metode uji fehling. Pereaksi ini dapat direduksi selain oleh karbohidrat yang mempunyai sifat mereduksi, juga dapat direduksi oleh reduktor lain. Pereaksi Fehling terdiri atas dua larutan, yaitu larutan Fehling A dan 1arutan Fehling B. Larutan Fehling A adalah larutan CuS0 4 dalam air, sedangkan larutan Fehling B adalah larutan garam K-Na-tartrat dan NaOH dalam air. Kedua macam larutan ini disimpan terpisah baru dicampur menjelang digunakan untuk memeriksa suatu karbohidrat. Dalam pereaksi ini ion Cu ++ direduksi menjadi ion Cu+ dalam suasana basa akan diendapkan sebagai Cu 20. Dengan larutan glukosa 1%, pereaksi Fehling menghasilkan endapan berwarna merah bata, sedangkan apabila digunakan yang lebih encer misalnya larutan glukosa 0,1%, endapan yang terjadi berwarna hijau kekuningan. Pemeriksaan glukosa termasuk pemeriksaan semi kuantitaf. Salah satu tujuan dari pemeriksaan glukosa ini adalah untuk pemeriksaan diabetes. Pada pratikum kali ini,
langkah pertama yang dilakukan adalah proses pra- analitik. Alat yang akan digunakan harus disiapkan terlebih dahulu. Selain itu, siapkan juga reagen fehling A dan reagen fehling B serta sampel. Sampel yang digunakan disini adalah dua jenis sampel urin yang berbeda, dimana sampel ditampung di dalam botol yang terbuat dari plastik. Wadah untuk menampung spesimen urine sebaiknya terbuat dari bahan plastik, tidak mudah pecah, bermulut lebar, dapat menampung 10-15 ml urine dan dapat ditutup dengan rapat.Selain itu juga harus bersih, kering, tidak mengandung bahan yang dapat mengubah komposisi zat-zat yang terdapat dalam urine. Penyimpanan dan Pengawetan Urin sama-sama memiliki tujuan penting untuk menjaga integritasurin dan mencegah pertumbuhan mikroba pada urin tersebut . Pencegahan tersebut dilakukandengan menyimpan langsung spesimen urin yang baru dikumpulkan kedalam refrigrator , dan jika dibutuhkan tambahkan bahan –bahan kimia untuk pengawetannya . Dalam penyimpanan urin, sebaiknya urin disimpan pada suhu 4°C dalam refrigrator dan urin tersebut dimasukkan terlebih dahulu kedalam botol tertutup untuk memperkecil perubahan susunan urin oleh kuman – kuman .Idealnya spesimen tersebut harus dikirim ke laboratorium dan dianalisis dalam waktu 1 jam setelah pengumpulan. Kedua sampel urin ini memiliki warna yang hampir sama, yaitu kuning agak pekat. Tabung reaksi yang digunakan disini sebanyak dua buah, pada masing masing tabung diperlakukan hal yang sama yaitu ditambahkan 1ml Fehling A dan 1ml Fehling B, yang kemudian ditambahkan sampel urine A sebanyak 0,5 mL ke tabung pertama dan sampel urin B sebanyak 0,5ml ke tabung yang kedua. Penilaian makroskopis yang dapat diamati yaitu pada warna larutan kedua tabung A dan B yaitu biru tua. Kemudian dilanjutkan pemanasan diatas api bunsen, pada proses ini tabung reaksi sedikit dimiringkan dan digoyangkan secara perlahan dengan kecepatan konstan agar campuran reagen dan sampel tersebut dapat bereaksi dengan baik, lalu diamati sampai terjadi perubahan warna, selain itu kekeruhan yang terjadi juga diamati. Perubahan yang terjadi pada tabung A dan tabung B setelah pemanasan yaitu : - Pada tabung A menunjukkan hasil positif 2 (larutan berwarna kuning kehijauan dan terdapat endapan kuning). Hasil positif ini menunjukkan adanya kandungnya glukosa dalam sampel urine.
- Pada tabung B menunjukkan hasil positif 1 (larutan keruh berwarna hijau kekuningan). Hasil positif menunjukan adannya kandungnya glukosa dalam sampel urine. Maka dari hasil pengamatan tersebut, dapat dikatakan bahwa sampel A mengandung glukosa dengan kadar lebih tinggi daripada sampel B. Pada orang normal tidak ditemukan adanya glukosa dalam urin. Glukosuria dapat terjadi karena peningkatan kadar glukosa dalam darah yang melebihi kapasitas maksimum tubulus untuk mereabsorbsi glukosa. Hal ini dapat ditemukan pada kondisi diabetes mellitus, tirotoksikosis, sindroma cushing, phaeochromocytoma, peningkatan tekanan intracranial atau karena ambang rangsang ginjal yang menurun seperti pada renal glukosuria, kehamilan dan sindroma Fanconi. Namun reaksi positif tidak selalu berarti pasien menderita Diabetes Mellitus. Hal ini dikarenakan pada penggunaan cara reduksi dapat terjadi hasil positif palsu pada urin yang disebabkan karena adanya kandungan bahan reduktor selain glukosa. Bahan pereduktor yang dapat menimbulkan reaksi positif palsu tersebut antara lain : galaktosa, fruktosa, laktosa, pentosa, formalin, glukuronat, dan obat-obatan seperti streptomycin, salisilat, dan vitamin C. Oleh karena itu, perlu dilakukan uji lebih lanjut untuk memastikan jenis gula pereduksi yang terkandung dalam sampel urin. Hal ini dikarenakan hanya kandungan glukosa yang mengindentifikasi keberadaan penyakit diabetes. Pemeriksaan glukosa pada sampel urin dengan menggunakan cara fehling memiliki keuntungan dan juga kerugian. Keuntungan metode ini adalah pemeriksaan menggunakan metode fehling sangat sensitive. Sedangkan kerugian metode ini adalah hasil yang diperoleh kurang spesifik. Hal ini dikarenakan reagen fehling mengandung basa kuat (KOH) yang akan mengakibatkan semua reduktor terdeteksi sebagai glukosa.
X.
KESIMPULAN
Dari pratikum yang sudah dilakukan, dapat disimpulkan sebagai berikut: 1. Reagen fehling A yang ditambah dengan Reagen fehling B masing-masing 1 mL dan dicampur dengan sampel akan menghasilkan warna biru tua. Lalu ditambah sampel urine 0,5 mL lalu dipanaskan hingga perubahan warna konstan. 2. Pada sampel A, setelah dipanaskan diperoleh hasil positif 2 dimana terjadi perubahan warna dari biru tua menjadi kuning kehijauan dan terdapat endapan berwarna kuning. Pada sampel B, setelah dipanaskan diperoleh hasil positif 1 dimana terjadi perubahan warna dari biru tua menjadi keruh dan berwarna hijau kekuningan. Jadi, Sampel A mengandung glukosa dengan kadar lebih tinggi daripada sampel B. XI.
DAFTAR PUSTAKA Aprilani. 2013. Pemeriksaan kimia urin. Online. http://aprilaniayu.blogspot.com / 2013/06/pemeriksaan-kimia-urine.html. Diakses pada 9 September 2014 Gandasoebrata. 1984. Penuntun Laboratorium Klinik. Yogyakarta : Dian rakyat Melda.
2012.
Laporan
pratikum
biologi
uji
urine.
Online.
http://tugasdanmakalah.blogspot.com. Diakses pada 9 September 2014 Ida. 2012. Tes glukosa urine dengan metode fehling dan benedict. Online. http:// smart-fresh.blogspot.com/2012/06/tes-glukosa-urine-fehling-benedict.html. Diakses pada 9 September 2014 Rohyami. 2012. Uji kualitatif.online. http:// rohyami.staff.uii.ac.id/2012/04/10/ujikualitatif-urine/. Diakses pada 9 September 2014
