LAPORAN PRAKTIKUM GENETIKA DAN PEMULIAAN IKAN
Disusun oleh :
Kelompok 10 Faradila Rebrima Z. (L1B015010) Hemi Trifani (L1B015040) Zulaifah Zuhdiyah (L1B015044) Tika Maulida (L1B015045) Fatah Khoerudin (L1B015046)
FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN UNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMAN PURWOKERTO 2018
LEMBAR PENGESAHAN LAPORAN PRAKTIKUM GENETIKA DAN PEMULIAAN IKAN
Oleh : Kelompok 10
Faradila Rebrima Z. (L1B015010) Hemi Trifani (L1B015040) Zulaifah Zuhdiyah (L1B015044) Tika Maulida (L1B015045) Fatah Khoerudin (L1B015046)
Disetujui pada tanggal Juni 2018
Mengetahui, Dosen Pengampu
Asisten
Dr. rer. nat. Hamdan Syakuri, S.Pi., M.Si
Kikok Abidin
NIP. 19771216 200112 1 001
NIM. H1H014022
i
KATA PENGANTAR Puji syukur kami panjatkan kehadirat Allah SWT atas limpahan berkah dan rahmat Nya, sehingga laporan praktikum mata kuliah Genetika dan Pemuliaan Ikan ini dapat terselesaikan tanpa suatu halangan yang berarti. Tak lupa saya sampaikan terima kasih kepada segenap jajaran tim dosen pengampu atas pembelajaran yang telah diberikan, serta tidak lupa kepada segenap tim asisten Genetika dan Pemuliaan Ikan terutama kak Kikok Abidin sebagai asisten pendamping kelompok sepuluh atas bimbingan serta arahannya selama praktikum berlangsung hingga laporan ini dapat terselesaikan. Kami berharap, penyusunan laporan ini kedepannya akan dapat memberikan manfaat bagi kami maupun pembaca pada umumnya. Kami pun mengharapkan masukan dan saran agar kedepannya saya dapat melakukan perbaikan dalam penyusunan laporanlaporan lain. Terima kasih, semoga ilmu yang yang kami dapatkan ini dapat bermanfaat.
Purwokerto, 7 Juni 2018
Penyusun
ii
DAFTAR ISI
LEMBAR PENGESAHAN ........................................................................................................... i KATA PENGANTAR ............................................................................................................ ........................................................ ........................................................... ....... ii DAFTAR ISI ................................................................................................................................ iii
................................................. .................................................... ................................................................... ............... iv DAFTAR GAMBAR ................................................. DAFTAR TABEL ......................................................................................................................... v
.......................................................................................................... .......................................................... ...... vi DAFTAR LAMPIRAN ...................................................... I.
PENDAHULUAN .................................................................................................................. 1
1.1.
Latar Belakang ...................................................... .......................................................................................................... ........................................................... ....... 1
1.2.
Tujuan ................................................ ..................................................... .............................................................................. ......................... 2
II.
MATERI DAN METODE ................................................................................................. 3
2.1.
Materi ................................................. ..................................................... .............................................................................. ......................... 3
2.2.
Metode................................................ ..................................................... .............................................................................. ......................... 3
III.
HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................ .......................................... 9
3.1. Pewarisan Sifat ........................................................................................................................ 9 3.2. Analisis Truss Morfometrik .................................................. ................................................. 14 3.3. Molekuler ............................................................................................................................... 18 IV.
KESIMPULAN DAN SARAN ................................................ ........................................ 2 7
4.1.
Kesimpulan .................................................. .................................................... .................................................................. .............. 27
4.2.
Saran ................................................... ..................................................... ............................................................................ ....................... 28
DAFTAR PUSTAKA ................................................ .................................................... .................................................................. .............. 29 LAMPIRAN ................................................................................................................................ 31
iii
DAFTAR GAMBAR Gambar
halaman
1. Hasil elektroforesis .......................................................................................................... 18
iv
DAFTAR TABEL Tabel halaman 1. Peristiwa Dominan 1 ........................................................................................................... 9 2. Peristiwa Dominan 2 ........................................................................................................... 9 3. Peristiwa dominan 3................................................ ............................................................ 9 4. Peristiwa Dominan 4 ........................................................................................................... 9 5. Peristiwa Dominan 5 ......................................................................................................... 10 6. Peristiwa Kodominan 1 ..................................................................................................... 10 7. Peristiwa Kodominan 2 ..................................................................................................... 10 8. Peristiwa Kodominan 3 ..................................................................................................... 10 9. Peristiwa Kodominan 4 ..................................................................................................... 11 10. Peristiwa Kodominan 5 ................................................. .................................................. 11 11. Signifikasi Manual ................................................ .......................................................... 14 12. Signifikasi Digital .............................................................................................. ............. 15 13. Abnormalitas............................................... .................................................................... 16 14. Hasil elektroforesis DNA.............................................. .................................................. 18 15. Resep Primer PCR ......................................................... ................................................. 23 16. Tahapan PCR ........................................................................................... ....................... 23
v
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran halaman 1. Tabulasi Hasil Pewarisan Sifat ................................................ ......................................... 31 2. Hasil Analisis Truss Morfometrik ............................................................. ....................... 42 3. Ikan Nila untuk Analisis Truss Morfometri............................................... ....................... 46 4. Dokumentasi Kegiatan Praktikum .............................................................................. ...... 49 5. Alat dan Bahan Praktikum Acara Molekuler .................................................................... 50
vi
I.
1.1.
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Genetika adalah ilmu yang mempelajari segala sesuatu yang berhubungan dengan pemindahan informasi dari satu sel ke sel lain dan pewarisan sifat ( Hereditas) dari induk ke anaknya (fahri, 2011). Di dunia perikanan, genetika masih terus dikembangkan agar terwujudnya produksi perikanan yang maju dan berkelanjutan. Banyak sekali rekayasarekayasa genetika yang dilakukan di dalam perikanan. Seperti hibridisasi, croos breeding, sex reversal dan lain sebagainya. Dalam pewarisan sifat banyak hal yang diharapkan bahwa sifat yang akan diturunkan dapat berlanjut pada keturunan berikutnya. Salah satu bentuk pewarisan sifat yaitu analisis variasi fenotip pada strain ikan yang berbeda. Analisis variasi merupakan suatu metode untuk menganalisis berbagai macam variasi dari beberapa strain ikan yang berbeda agar diketahui bagaimana kekerabatan ikan tersebut. Analisis variasi yang digunakan yaitu menggunakan metode analisis truss morfometrik. Variasi genetik yaitu variasi yang dihasilkan oleh faktor keturunan (gen) yang bersifat kekal dan diwariskan secar turun-temurun dari satu sel ke sel lainnya. Variasi non genetik atau variasi lingkungan yaitu yang ditentukan oleh faktor lingkungan seperti; intensitas cahaya, kelembaban, pH, kesuburan tanah dan kelembaban (Mentari, 2012). Selain itu, untuk mengetahui variasi genetik pada ikan dapat diliat melalui sampel DNA pada beberapa strain. DNA membawa materi genetik yang dapat kita lihat bagaimana variasi genetiknya. Untuk melihatnya dapat menggunakan PCR ( Polymerase Chain Reaction) yang sebelumnya telah dilakukan isolasi DNA, ampifikasi hingga akhirnya kita dapat melihat hasil PCR ini melalui elektroforesis. Oleh karena itu, pada praktikum 1
genetika dan pemuliaan ikan untuk mengetahui metode analisis variasi genetik yang dapat diterapkan pada bidang perikanan. 1.2.
Tujuan
Tujuan dari praktikum Genetika dan Pemuliaan Ikan yaitu: 1. Mengetahui rasio genotipa keturunan ikan yang dihasilkan dari persilangan individu jantan dan betina yang mempunyai satu sifat beda yaitu warna. 2. Menguji rasio fenotip warna pada ikan dalam pewarisan sifat monohybrid dengan menggunakan Chi Square Test . 3. Memahami dan dapat melakukan analisis variasi fenotip untuk membedakan antar strain ikan. 4. Mengetahui berbagai ukuran mikropipet. 5. Mampu menggunakan mikropipiet dengan benar. 6. Memahami metode isolasi DNA dari jaringan/organ tubuh ikan dengan menggunakan metode berdasar membrane silika. 7. Mengetahui cara amplifikasi DNA menggunakan teknik PCR (Polymerase Chain Reaction). 8. Memahami proses dan cara kerja elektroforesis DNA. 9. Memahami cara pembuatan gel agarose. 10. Memahami cara intepretasi hasil elektroforesis.
2
II.
2.1.
MATERI DAN METODE
Materi
2.1.1. Alat Alat yang digunakan dalam praktikum pewarisan sifat dan analisis truss morfometrik yaitu tabel angka random, tabel distribusi, laptop, penggaris, baki, jarum pentul, milimeter blok laminating, alat tulis, kamera, sterofoam, software ImaJ dan SPSS. Alat yang digunakan dalam praktikum molekuler mikropipet, tip, cawan petri, tabung mikro 1,5 ml, pellet pastel, waterbath, alat sentrifugasi, alat vortex, spin column, suntikan, inkubator, tabung PCR, mesin PCR, chamber elektoforesis, timbangan digital, tabung erlenmeyer, mesin UV transiluminator, kompor listrik dan spatula. 2.1.2. Bahan Bahan yang digunakan dalam praktikum pewarisan sifat dan analisis truss morfometrik yaitu ikan nila merah dan ikan nila hitam. Bahan yang digunakan dalam praktikum molekuler yaitu ikan nila (beda strain), larutan bius, aquades, sampel kulit ikan, 180 µl genomic digestion buffer, 20 µl proteinase K, 20 µl RNAase A, 200 µl binding buffer, 200 µl ethanol 96-100%, 500 µl Wash buffer 1, 500 µl Wash Buffer 2, 50 µl Elusion Buffer, sampel DNA 0,4 µl, resep primer untuk PCR, gel agarose 1,5%, 1x buffer TBE, 5 µl sampel DNA, dan 5 µl DNA ladder. 2.2.
Metode
2.2.1. Pewarisan sifat Tabel angka random digunakan untuk melakukan pengacakan jenis gamet jantan dan gamet betina yang akan bertemu menjadi zygote atau individu anak (keturunan). Satu
3
angka terakhir dari angka random digunakan dengan ketentuan untuk angka random ganjil mewakilli gamet yang mengandung alel A dengan efek terhadap fenotipa warna Emas dan angka random genap mewakili gamet yang mengandung alel a dengan efek terhadao fenotipa warna normal. Setiap individu anak atau keturunan diberi identitas berupa nomor individu diperoleh dengan cara satu angka random dipilih secara acak, kemudian tulis alel tersebut pad akolom lalu dilanjutkan membaca angka random kebawah atau kearah kanan, setelah itu ditulis alelnya pada kolom 3 gabungkan alel yang telah diperoleh untuk mendapatkan kombinasi gen Zygote dan dituliskan hasilnya semisal Aa pada kolom 4. Laukan prosedur tersebut diatas sampai 60 keturunan. Kemudian fenotipa anak dituliskan pada kolom 5 dan dilakukan dengan cara: a.
Bagi kelompok dengan nomor ganjil maka berlaku ketentuan alel A bersifat
DOMINAN terhadap alel a, sehingga fenotipa untuk masing-masing jenis kombinasi gen sebagai berikut :
b.
Kombinasi gen
Fenotipa
AA
Emas
Aa
Emas
Aa
Normal
Bagi kelompok dengan nomor genap maka berlaku ketentuan alel A bersifat
KODOMINAN terhadap alel a, sehingga fenotipa untuk masing-masing jenis kombinasi gen sebagai berikut : Kombinasi gen
Fenotipa
AA
Emas
Aa
Coklat
4
Normal
Aa
Jenis kelamin anak ditentukan berdasarkan nomer individu, yaitu anak dengan nomor ganjil berjenis kelamin jantan dan anak dengan nomor genap berjenis kelamin betin. Hasil praktikum diuji apakah sesuai dengan fenotipik dalam pewarisan sifat monohibrid menurut hukum mendel 1 yaitu : a.
Pada peristiwa dominan maka rasio fenotipa warna Emas : Normal adalah 3 : 1
b.
Pada peristiwa kodominan maka rasio fenotipa warna Emas : Coklat : Normal
adalah 1:2:1 Maka dilakukan uji dengan menggunakan UJI CHI SQUARE. Hasil uji chi square dibandingkan dengan nilai Chi tabel yang diperoleh berdasarkan pedoman Derajat Bebas kelas fenotipa yaitu k, dimana k adalah jumlah kelas fenotipa dan nilai peluang (alpha) 0,05 dan 0,01. Bila hasil chi square lebih kecil dari nilai chi tabel, maka hasil pengamatan masih mengikuti atau tidak menyimpang dari hukum mendel 1 dan apalabila hasil chi square lebih besar dari nilai chi tabel maka hasil pengamatan tidak mengikuti atau menyimpang dari hukum mendel 1. Lalu ditulis kesimpulan hasil praktikum berdasarkan hasil uji tersebut. 2.2.2. Analisis Truss morfometrik Ikan nila dimasukkan kedalam wadah yang berbeda untuk setiap stainnya. Larutan bius disiapkan, satu persatu ikan nila dimasukkan kedalam larutan bius dan tunggu sampai terbius sempurna. Bentuk morfologi ikan dari beberapa strain berbeda yang tidak normal diamati dan diambil gambar lalu dihitung jumlah individu yang memiliki bentuk morfologi tidak normal dan dituliskan pada tabel hasil pengamatan. Lalu, dilakukan pengukuran panjang total, panjang standart dan parameter Truss morfometrikserta dituliskan pada tabel
5
pengamatan. Data hasil pengukuran jarak Truss morfometrik dikonversikan. Lalu dilakukan analisisi statistik menggunakan analisis varian (anava) dan post hoc test untuk mengetahui tingkat perbedaan truss morfometrik antar strain. 2.2.3. Molekuler a.
Penggunaan mikropipet Kisaran volume masing-masing mikropipet diperhatikan, diatur dan digunakan
miropipet pada tiap volume yang ditentukan, lalu kemampuan ditunjukkan pada asisten untuk penilaian. b.
Isolasi DNA (ekstraksi DNA menggunakan Membran Silika : PureLink Genomic
DNA Mini Kit ) 1.
Persiapan lysate Tabung mikro 1,5 ml kosong ditimbang, kemudian dimasukkan sempel kedalam
tabung mikro 1,5 ml tersebut (sampel sekitar 10 mg) kemudian dihancurkan menggunakan pellet pastel. Kemudian 180 µl genomic digestion buffer ditambahkan dan 20 µl proteinase K, lalu dihomogenkan. Sampel diinkubasi pada waterbath dengan suhu 55°C sampai lisis sempurna (2 jam). Sampel diambil dan disentrifugasi pada kecepatan maksimal dan pada temperature ruangan selama 3 menit. Setelah sampel terpisah, supernatant dipindahkan kedalam tabung mikro 1,5 ml yang baru. 20 µl RNAase A ditambahkan lalu dihomogenkan dan diinkubasi pada termperature ruang selama 2 menit. 200 µl binding buffer ditambahkan, dihomogenkan, dan 200 µl ethanol 96-100% ditambahkan kemudian dihomogenkan selama 5 detik. 2.
Binding dan wahing DNA
6
Sampel dimasukkan kedalam spin column dan disentrifugasi dengan keceptaan maksimal pada temperature ruangan selama 5 menit. Lalu spin column
dilepas dan
ditempatkan pad atabung yang baru. 500 µl Wash Buffer 1 yang telah ditambah ethanol dimasukkan
kedalam spin column dan kemudian disentrifugasi dengan kecepatan
maksimal pada temperature ruang selama 5 menit. Larutan dibuang pada tabung penampung dan spin column dikembalikan ke posisi semula. 500 µl Wash Buffer 2 yang telah ditambahkan ethnol ditambahkan dan disentrifugasi dengan kecepatan maksimal pada temperature ruang selama 5 menit. 3.
Eluting DNA Spin column diletakkan pada tabung mikro 1,5 ml yang baru , elusi DNA dengan
ditambahkan 50 µl Elusion buffer kemudian diinkubasi pada temperature ruang selama 1 menit, lalu disentrifugasi dengan kecepatan maksimal pada temperature ruangan selama 5 menit dan sampel DNA akan tertampung didalam tabung mikro dan siap untuk disimpan atau diproses selanjutnya. c.
Amplifikasi SNA menggunakan teknik PCR Resep PCR dibuat, lalu resep yang sudah tercampur dibagi kedalam tabung PCR
(setiap tabung sebanyak 19 µl). lalu isolasi DNA 1 µl dimasukkan kedalam masing-masing campuran resep primer yang ada pada tabung PCR kemudian divortex dan spindown. Mesin PCRdinyalakan, selanjutnya tabung PCR yang berisi larutan sampel disusun sesuai dengan urutan mesin PCR. Selanjutnya, mesin PCR disetting dengan 35 siklus, Tm 52°C. setelah selesai, sampel diambil lalu mesin PCR dimatikan dan sampel hasil PCR divortex dan di spindown lalu disimpan untuk dilakukan uji selanjutnya. d.
Elektroporesis DNA 7
`
Gel agarose 1,5% disiapkan : Agarose 1,2 gram ditimbang lalu dimasukkan ke
dalam 72 ml aquades dan 8 ml 10x buffer TBE. Dipanaskan sambil diaduk secara rutin sampai mendidih atau larutan berwarna jernih. Kemudian didiamkan dalam suhu ruang sampai temperature siap dituang dan ditambahkan 5 µl Sybr safe gel staining, larutan gel dituang pada cetakan yang telah disiapkan dan dipasangi sisir pada tempatnya, ditunggu hingga mencapai termperature ruang dan gel terbentuk sempurna. Sisir dilepaskan dari gel ahgarose, lalu sisir tersebut akan meninggalkan sumuran di gel agarose. Setelah itu chamber elektroforesis disiapkan lallu gel agarose diletakkan pada chamber. 1 x buffer Tbe dimasukkan hingga mengurangi permukaan gel agarose dan tidak melampaui batas maksimal. 1 µl loading buffer dicampurkan dengan 5 µl sampel DNA lalu campuran tersebut dimasukkan tepat kedasar sumuran yang ada di gel agarose. Satu sumuran hanya digunakan untuk satu sampel. 5 µl DNA ladder dimasukkan pada sumuran yang masih kosong lalu chamber elektroforesisi ditutup dan dijalankan elektroforesis sampai pewarna DNA ladder mencapai 2/3 panjang gel agarose (45 menit). Power supply dimatikan dan gel agarose diambil. Gel diamati dengan UV transiluminator.
8
III.
HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1. Pewarisan Sifat Tabel 1. Peristiwa Dominan 1
Kelas Fenotipa
Frekuensi Pengamatan (O)
Frekuensi Harapan (E)
(O-E) ±0,5
Emas
26
31,5
-5
0,96
Normal
16
10,5
5
2,88
Jumlah
42
42
0
= 3,84
Tabel 2. Peristiwa Dominan 2 Frekuensi Kelas Fenotipe Pengamatan (O)
Frekuensi Harapan (E)
(O-E)± 0,5
Emas
32
37.5
-5
0.80
Normal
18
12.5
5
Jumlah
50
50
0
3.22
Frekuensi harapan (E)
(O-E) ± 0,5
(O-E) /E
Tabel 3. Peristiwa dominan 3 Frekuensi Kelas fenotip pengamatan (O)
2
Emas
25
30,75
-5,25
1,07
Normal
16
10,25
5,25
3,22
Jumlah
41
41
0
Xn = 4,29
Frekuensi Harapan/ Teoritis (E)
(O-E) ±0,5
Fenotipa
Frekuensi Pengamatan (O)
Emas
35
34,5
0,45
0.007
Tabel 4. Peristiwa Dominan 4
Kelas
9
Normal
11
11,5
0,45
0,021
JUMLAH
46
46
0
0,028
Frekuensi Harapan (E)
(O-E)± 0.5
Tabel 5. Peristiwa Dominan 5 Frekuensi Kelas Fenotipe Pengamatan (O)
Emas
26
31,5
-5
0.96
Normal
16
10,5
5
Jumlah
42
42
0
3.84
Frekuensi Harapan (E)
(O-E)
Tabel 6. Peristiwa Kodominan 1 Frekuensi Kelas Fenotipa Pengamatan (O)
Emas
26
15
11
8,06
Coklat
18
30
-12
4,8
Normal
16
15
1
0,06
Jumlah
60
60
0
= 12,92
Frekuensi Harapan (E)
(O-E)
Tabel 7. Peristiwa Kodominan 2 Frekuensi Kelas Fenotipe Pengamatan (O)
Emas
32
15
17
19.27
Coklat
10
30
-20
Normal
18
15
3
Jumlah
60
60
0
33.2
Frekuensi harapan (E)
(O-E)
(O-E) /E
Tabel 8. Peristiwa Kodominan 3 Frekuensi Kelas fenotip pengamatan (O)
10
2
Emas
25
15
10
6,67
Coklat
19
30
-11
4,04
Normal
16
15
1
0,067
Jumlah
60
60
0
Xn = 10,78
(O-E)
Tabel 9. Peristiwa Kodominan 4 Kelas Frekuensi
Fenotipa
Pengamatan (O)
Frekuensi Harapan (E)
Emas
35
15
20
26,67
Coklat
14
30
-16
8,53
Normal
11
15
-4
1,07
JUMLAH
60
60
0
36,27
Frekuensi Harapan (E)
(O-E)
Tabel 10. Peristiwa Kodominan 5 Frekuensi Kelas Fenotipe Pengamatan (O)
Emas
26
15
11
8,06
Coklat
18
30
-12
Normal
16
15
1
Jumlah
60
60
0
12,92
11
Persilangan monohybrid merupakan persilangan antara dua individu dari spesies yang sama dengan satu sifat beda. Persilangan monohybrid ini erat kaitannya dengan hukum I mendel yang biasa disebut dengan hukum segragasi (pemisahan) yang menyatakan bahwa pada saat pembentukan gamet terjadi segregasi alel-alel secara bebas, dari diplod menjadi haploid. Menurut Wijayanto (2013) bahwa Persilangan monohibrid merupakan persilangan dengan satu sifat beda Pada saat praktikum pewarisan monohibrid disilangkan 2 spesies yang sama dengan satu sifat yang berbeda sehingga hasil dari persilangan monohybrid ini memiliki sifat yang sama dengan salah satu induknya. Persilangan monohobrid dominan adalah persilangan dua individu sejenis yang memerhatikan satu sifat beda dengan gen-gen yang dominan. Sifat dominan dapat dilihat secara mudah yaitu sifat yang lebih banyak muncul pada keturunannya. Pada praktikum kali ini alel A dominan terhadap alel a sehingga fenotip keturunan yang terbentuk yaitu AA (Emas), Aa (Emas), aa (Normal), alel a akan tertutup oleh alel A karena alel A bersifat dominan yang mampu menutup alel a yang bersifat resesif . Hal ini sesuai dengan referensi bahwa pewarisan sifat dikendalikan oleh sepasang gen tunggal yang bersifat dominan dan mengendalikan gen yang bersifat resesif (Oktarisna, 2013). Sedangkan, hasil praktikum pada persilangan kodominan menghasilkan 3 fenotip yang berbeda yaitu AA (emas), Aa (Coklat), aa (Normal). Hal ini terjadi karena tidak ada karakteristik dari induk yang bersifat dominan ataupun resesif (Adni, 2018). Pada kelompok kodominan, rasio fenotipik keturunan ikan menunjukkan adanya penyimpangan atau tidak sesuai dengan Hukum Mendel 1, sedangkan kelompok dominan menunjukkan tidak adanya penyimpangan, sehingga dapat dikatakan sesuai dengan Hukum Mendel 1.
12
13
3.2. Analisis Truss Morfometrik Tabel 11. Signifikasi Manual Rerata Ukuran Morfometrik (mm) + Sd No Jarak Strain Nila Merah Strain Nila Hitam
Signifikansi
1
PT
141,500+9,277
152,4000+7,806
Signifikan
2
PS
111,800+8,052
120,500+7,764
Signifikan
3
1-2
0,089+0,006
0, 083+0,005
Signifikan
4
1-4
0,372+0,016
0,388+0,021
Tidak Signifikan
5
1-6
0,438+0,028
0,423+0,018
Tidak Signifikan
6
3-4
0,233+0,015
0,228+0,019
Tidak Signifikan
7
3-5
0,211+0,021
0,206+0,017
Tidak Signifikan
8
3-6
0,307+0,022
0,295+0,019
Tidak Signifikan
9
4-5
0,277+0,015
0,288+0,019
Tidak Signifikan
10
4-6
0,396+0,017
0,419+0,019
Signifikan
11
4-7
0,586+0,017
0,598+0,018
Tidak Signifikan
12
4-8
0,553+0,023
0,576+0.022
Signifikan
13
5-6
0,131+0,021
0,141+0,013
Tidak Signifikan
14
6-7
0.566+0,029
0,601+0,025
Signifikan
15
6-8
0,339+0,036
0,361+0,025
Tidak Signifikan
16
7-8
0,309+0,015
0,318+0,023
Tidak Signifikan
17
7-9
0,115+0,023
0,129+0,034
Tidak Signifikan
18
7-10
0,197+0,010
0,197+0,016
Tidak Signifikan
19
8-9
0,365+0,018
0,368+0,023
Tidak Signifikan
20
8-10
0,303+0,022
0,290+0,020
Tidak Signifikan
21
9-10
0,150+0,007
0,157+0,009
Tidak Signifikan
14
Tabel 12. Signifikasi Digital
Rerata Ukuran Morfometrik (mm) + Sd No
Jarak
Signifikansi Strain Nila Merah
Strain Nila Hitam
1
PT
14,069+0,869
16,381+1,191
Signifikan
2
PS
11,292+0,749
12,923+0,929
Signifikan
3
1-2
0,059+0,006
0,064+0,009
Tidak Signifikan
4
1-4
0,396+0,019
0,387+0,014
Tidak Signifikan
5
1-6
0,426+0,016
0,415+0,013
Tidak Signifikan
6
3-4
0,242+0,016
0,246+0,015
Tidak Signifikan
7
3-5
0,262+0,017
0,255+0,014
Tidak Signifikan
8
3-6
0,369+0,014
0,371+0,018
Tidak Signifikan
9
4-5
0,259+0,016
0,277+0,009
Signifikan
10
4-6
0,397+0,012
0,409+0,011
Signifikan
11
4-7
0,553+0,056
0,599+0,010
Signifikan
12
4-8
0,546+0,022
0,576+0,021
Signifikan
13
5-6
0,139+0,015
0,143+0,009
Tidak Signifikan
14
6-7
0,559+0,016
0,571+0,048
Tidak Signifikan
15
6-8
0,335+0,017
0,357+0,027
Signifikan
16
7-8
0,292+0,011
0,309+0,008
Signifikan
17
7-9
0,097+0,011
0,097+0,01
Tidak Signifikan
18
7-10
0,191+0,014
0,198+0,015
Tidak Signifikan
19
8-9
0,347+0,018
0,354+0,018
Tidak Signifikan
20
8-10
0,524+0,764
0,273+0,023
Tidak Signifikan
21
9-10
0,151+0,008
0,152+0,009
Tidak Signifikan
15
Tabel 13. Abnormalitas
Strain Nila Hitam
Strain Nila Merah
Bentuk Abnormal Sirip Anal tidak terdapat duri keras
N
N
%
1
10
10
N
N
%
0
10
0
Studi morfometrik merupakan kajian yang bersangkutan dengan variasi dan perubahan bentuk (ukuran dan bentuk) dari organisme atau objek, meliputi pengukuran panjang dan analisis kerangka secara kuantitatif (Taqwin, 2014). Karakter morfometrik dapat digunakan untuk mengetahui status allometrik positif, negative dan isometric . Status allometrik positif merupakan status hubungan yang menunjukkan bahwa pertambahan panjang
total lebih
lambat dibandingkan
dengan
panjang
karakter
morfometrik
pembandingnya. Status allometrik negatif merupakan status hubungan yang menunjukkan bahwa pertambahan panjang total lebih cepat dibandingkan pertambahan karakter morfometrik pembandingnya. Status isometrik merupakan status hubungan pertumbuhan yang menunjukkan bahwa pertambahan panjang total sebanding dengan pertambahan panjang karakter mrfometrik pembandingnya (Suryana, 2014). Menurut Brezky & Doyle (1988) dalam Wijayanti (2017) bahwa Truss morphometrics
merupakan
teknik
yang
dilakukan
untuk mengukur
jarak
Truss
morphometrics pada bagian tertentu di luar tubuh, atas dasar titik-titik patokan (titik-titik Truss morphometrics). Titik-titik Truss morphometrics saling dihubungkan oleh jarak Truss morphometrics secara horizontal, vertikal dan diagonal, sehingga bentuk tubuh ikan dapat dianalisis secara rinci dan spesifik. Oleh ka rena itu, teknik Truss morphometrics lebih dianjurkan dibandingkan dengan morfometrik biasa karena pada metode morfometrik biasa
16
jarak jumlah truss nya sangat terbatas sehingga kurang mampu memberikan gambaran bentuk tubuh. Praktikum kali ini yaitu menganalisis antara ikan nila merah dan ikan nila hitam. Parameter yang diamati yaitu jarak antar titik ujung mulut, ujung bibir atas, ujung posterior mata, titik awal sirip dorsal, titik awal sirip pectoral, titik awal sirip perut, titik posterior sirip dorsal, titik awal sirip anal, batas atas ekor dengan sirip ekor, batas bawah ekor dengan sirip ekor. Analisis dilakukan secara manual dan secara digital. Berdasarkan hasil secara manual dan secara digital terdapat perbedaan, pada pengukuran jarak antar titik ujung mulut dan ujung bibir pada analisis secara manual mendapatkan hasil yang signifikan sedangkan pada analisis menggunakan digital mendapatkan hasil tidak signifikan, hal ini kemungkinan terjadi karena kurangnya ketelitian pada saat melakukan analisis sehingga hasil antara analisis secara digital dan manual berbeda. Berdasarkan hasil praktikum baik menggunakan analisis manual maupun analisis digital kemungkinan strain ikan nila merah dan ikan nila hitam memiliki kekerabatan yang dekat hal ini terlihat adanya karakter yang signifikan. Dikatakan signifikan karena karakter yang diamati antara dua strain tersebut tidak jauh berbeda. Suparyanto et al (1999) dalam Suharyanto (2016) mengemukakan bahwa nilai kesamaan ukuran badan memberikan penjelasan adanya percampuran yang terukur antara strain satu dengan strain lainnya Abnormalitas bentuk morfologis tersebut dinyatakan dengan kelainan atau penyimpangan bentuk organorgan tubuh (deformitas) serta tidak seimbangnya (asimetris) karakterisik meristik (jumlah) di antara pasangan organ-organ bilateral. Tingginya tingkat deformitas dan fluktuasi asimetri karakteristik morfologis mengindikasikan rendahnya keragaman genetis populasi ikan tersebut (Iswanto, 2015). Pada praktikum ini abnormalitas 17
yang terjadi pada ikan nila yaitu sirip anal yang tidak mempunyai tulang keras dari 10 ikan hanya 1 ikan yang abnormalitas. Hal ini dapat terjadi karena adanya hubungan antara abnormalitas morfologis dengan keragaman genetis dan karakterkarakter yang terkait dengan daya tahan (fitness), seperti sintasan dan kerentanan terhadap serangan penyakit (Iswanto, 2015). 3.3. Molekuler
Gambar 1. Hasil elektroforesis identifikasi bakteri vibrio periode 1
Ket : M (DNA marker : CSL-MDNA-100BPH), K (control) Tabel 14. Hasil elektroforesis DNA 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
Inp
Inma
Inmc
NP1
NP2
NP3
NP4
NM a1
NM a2
NM a3
NM a4
NM c1
NM c2
NM c3
NM c4
K
+
+
+
-
-
-
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
NP1
NP2
NP3
NP4
NM a1
NM a2
NM a3
NM a4
NM c1
NM c2
NM c3
NM c4
K
+
-
-
+
+
+
+
+
+
+
+
-
-
18
17
18
35
36
3.3.1. Mikropipet Mikropipet merupakan alat yang biasa digunakan pada berbagai bidang, terutama pada aktivitas ilmiah di laboratorium. Mikropipet ini merupakan alat yang berfungsi untuk mentransfer larutan secara tepat dalam skala μL dimana pada ujungnya terdapat tip untuk tempat larutan (Wulandari dan Yuni, 2017). Terdapat beberapa jenis mikropipet didasarkan pada ukuran tipnya, yaitu P1000 (untuk menampung 200-1000 μL larutan), P200 (untuk menampung 20-200 μL larutan), P20 (untuk 2-20 μL larutan), serta P10 (untuk menampung 1-10 μL larutan) (Seeley dan Demark, 1972). Selama pelaksanaan praktikum, digunakan tiga jenis mikropipet yang berbeda yaitu White Tip (<10 µL), Yellow Tip (10-100 µL) dan Blue Tip (100-1000 µL). Mikropipet digunakan mengikuti prosedur yang benar, dimana tip yang digunakan untuk mengambil sampel atau larutan hanya boleh digunakan untuk sekali pemakaian. Selain itu, pengatur volume tidak boleh diatur melebihi batas maksimum volume tip. Adapun, prinsip atau cara penggunaan mikropipet secara baik dan benar seperti dijelaskan oleh Widodo (2013) adalah sebagai berikut : a)
Sebelum digunakan Thumb Knob sebaiknya ditekan berkali-kali untuk memastikan lancarnya mikropipet.
b)
Tip bersih dimasukkan ke dalam Nozzle/ujung mikropipet.
c)
Thumb Knob ditekan sampai hambatan pertama/ first stop, jangan ditekan lebih ke dalam lagi.
d)
Tip dimasukkan ke dalam cairan sedalam 3-4 mm.
e)
Tahan pipet dalam posisi vertikal kemudian tekanan dari Thumb Knob dilepaskan maka cairan akan masuk ke tip.
19
f)
Ujung tip dipindahkan ke tempat penampung yang diinginkan.Thumb Knob ditekan sampai hambatan kedua/ second stop atau tekan semaksimal mungkin maka semua cairan akan keluar dari ujung tip. Jika ingin melepas tip putar Thumb Knob searah jarum jam dan ditekan maka tip akan terdorong keluar dengan sendirinya, atau menggunakan alat tambahan yang berfungsi mendorong tip keluar.
3.3.2. Isolasi DNA Identifikasi molekuler memerlukan tahapan awal yaitu isolasi DNA genom. Isolasi DNA pada dasarnya merupakan teknik yang dilakukan untuk mendapatkan DNA murni yang tidak tercampur dengan komponen sel lainnya seperti protein dan karbohidrat melalui serangkaian tahapan (Murtiyaningsih, 2017). Adapun pada praktikum ini, isolasi DNA yang dilakukan menggunakan metode membrane silica dengan menggunakan PureLink Genomic DNA mini Kits. PureLink Genomic DNA mini Kits adalah paket ekstraksi DNA yang terdiri atas Lysis Buffer, Digestion Buffer, Wash Buffer 1, Wash Buffer 2, Elution Buffer, RNAse, Proteinase K. Kit PureLink® Genomic DNA menggunakan kolom yang prinsip kerjanya didasarkan pada ikatan selektif DNA pada membran berbahan silika dan garam chaotropic sehingga dapat mengikat dan melepaskan DNA lebih efisien. Lysis buffer pada kit ini telah dioptimasi untuk meningkatkan aktivitas proteinase K sebagai enz im yang membantu dalam denaturasi protein (Mustafa et al ., 2016). Isolasi DNA itu sendiri bertujuan untuk memisahkan DNA dari bahan lain seperti protein, lemak, dan karbohidrat sehingga dapat dianalisis lebih lanjut (Priyambodo, 2017). Pelaksanaan praktikum genetika yang dilakukan menggunakan enam jenis sampel berbeda yang meliputi sampel dar ikan n nila hitam, ikan nila merah B dan ikan nila merah D untuk grup A serta ikan nila putih, ikan
20
nila merah A serta ikan nila merah C untuk grup B. Adapun menurut Zunaedi (2013), faktor-faktor yang dapat mempengaruhi keberhasilan isolasi DNA geno m, antara lain: a.
Karakter sampel dari sel atau jaringan organism. Setiap organisme memiliki tipe sel dan jaringan yang berfariasi, sehingga metode isolasi atau ekstraksi yang digunakan harus sesuai dengan jenis karakter sampel.
b.
Metode ekstraksi dan isolasi yang tepat. Metode yang ideal, akan beragam tergantung dari jenis sel atau jaringan sampel, bagaimana sampel diperoleh dari sumbernya, bagaimana sampel diperlakukan, dan bagaimana sampel disimpan sebelum diekstrak DNA. Hal-hal tersebut akan menetukan keberhasilan isolasi DNA.
c.
Metode isolasi harus meminimalisasi degradasi DNA.
d.
Upaya untuk meminimalisasikan degradasi DNA dapat dilakukan dengan cara menghindari ekspor terhadap panas, cahaya, freeze-thow yang berulang-ulang, dan vortex.
e.
Kondisi laboratorium. Laboratorium harus dikondisikan dan diatur sedemikian rupa untuk menghindarkan kemungkinan kontaminasi silang pada sampel.
f.
Reagen atau senyawa yang digunakan. Dalam 5 tahapan utama isolasi DNA, reagen memegang peranan penting yang akan menentukan keberhasilan isolasi DNA genom. Kesesuaian reagen dengan karakter sel DNA genom harus menjadi dasar pertimbangan dalam memilih metode ektraksi atau isolasi DNA genom.
3.3.3. Amplifikasi DNA Amplifikasi DNA dapat didefinisikan sebagai suatu proses biologis di tingkat molekuler dimana terjadi penggandaan atau perbanyakan sekuen DNA melalui serangkaian 21
tahapan (Mukherjee dan Storici, 2012). Penggandaan sekuen DNA itu sendiri merupakan tahapan untuk identifikasi secara molekuler untuk menganalisis perbedaan ekspresi gen antara organisme satu dengan yang lainnya. Teknik amplifikasi ini diketahui mampu melipatgandakan untai DNA sampel sehingga dapat dianalisis dengan lebih jelas. Sejak awal ditemukannya, teknik amplifikasi DNA yang banyak dan umum digunakan adalah Polymerase Chain Reaction (PCR) (Feranisa, 2016). Replikasi dan amplifikasi merupakan dua hal berbeda, dimana replikasi merupakan proses biologis yang secara alami terjadi dalam proses sintesis protein tubuh, yaitu proses melipatangandakan DNA baru dengan menggunakan sekuen DNA yang sudah ada melalui beberapa model penggandaan yang mencakup konservatif, semi konservatif dan dispersif. Selain itu, hal yang membedakan replikasi dari amplifikasi adalah komponen yang bekerja dalam prosesnya, yang mencakup DNA, enzim helikase, enzim topoisomerase, enzim DNA polimerase, dan enzim ligase (Zunaedi, 2013). Polymerase Chain Reaction (PCR) adalah suatu teknik sintesis dan amplifikasi DNA secara in vitro yang melibatkan beberapa tahap berulang (siklus) dan pada setiap siklus terjadi duplikasi jumlah target DNA untai ganda (Handoyo dan Rudiretna, 2000). Proses PCR melibatkan beberapa tahap yaitu: (1) pra-denaturasi DNA templat; (2) denaturasi DNA templat; (3) penempelan primer pada templat (annealing); (4) pemanjangan primer (extension) dan (5) pemantapan (postextension). Tahap (2) sampai dengan (4) merupakan tahapan berulang (siklus), di mana pada setiap siklus terjadi duplikasi jumlah DNA (Handoyo dan Rudiretna, 2000). Saat pelaksanaan praktikum, tahapan amplifikasi diawali dengan menyiapkan resep primer dan isolat DNA yang sebelumnya sudah diisolasi masing-masing sebanyak 19 μL dan 1 μL ke dalam tabung 22
PCR. Saat pelaksanaan praktikum, tahapan amplifikasi diawali dengan menyiapkan resep primer dan isolat DNA yang sebelumnya sudah diisolasi masing-masing sebanyak 19 μL dan 1 μL ke dalam tabung PCR. Komposisi resep primer untuk PCR berikut tahapannya dapat dilihat pada tabel berikut : Tabel 15. Resep Primer PCR
No.
Bahan
20 µL
1
Template
1 µL
2
Primer LCO2190
0,4 µL
2,8 µL
3
Primer HCO2198
0,4 µL
2,8 µL
4
My Taq HS Red Mix 2X
10 µL
70 µL
5
Water
8,2 µL
57,4 µL
20 µL
63/7= 19 µL
Total
7x
Tabel 16. Tahapan PCR
No.
Tahapan
Temperatur
Waktu
Siklus
1
Pre-denaturasi
95 C
o
3’
1x
2
Denaturasi
95 C
o
20”
3
Anneling
48 C
o
20”
4
Extention
72 C
o
30”
5
Post-Extention
72 C
o
5’
1x
6
End
30 C
o
1’
1x
35 x
Isolat dan primer lalu divortex dan dimasukkan ke dalam mesin spin down. Mesin PCR disiapkan dengan cara memastikan bahwa aliran listrik stabil, lalu mulai menyalakan mesin PCR. Tabung PCR disusun berdasarkan urutannya di dalam mesin, lalu mulai dilakukan setting mesin dengan program Vibrio sebanyak 35 siklus. Proses amplifikasi di 23
dalam mesin lalu ditunggu hingga selesai, kemudian sampel diambil untuk divortex, spindown dan siap untuk elektroforesis. Terdapat beberapa faktor yang dapat menentukan tingkat keberhasilan teknik amplifikasi DNA menggunakan PCR. Faktor-faktor itu antara lain deoksiribonukleotida triphosphat (dNTP); oligonukleotida primer; DNA cetakan (template); komposisis larutan buffer; jumlah siklus reaksi; enzim yang digunakan; dan faktor teknis dan non-teknis lainnya, seperti kontaminasi (Feranisa, 2016). Seperti telah dipaparkan oleh Handoyo dan Rudiretna (2000), keberhasilan suatu proses PCR sangat tergantung dari primer yang digunakan. Selama berlangsungnya proses PCR, primer berfungsi sebagai pembatas fragmen DNA target yang akan diamplifikasi dan sekaligus menyediakan gugus hidroksi (OH) pada ujung 3’ yang diperlukan untuk proses eksistensi DNA. Adapun, dalam proses PCR dNTPs bertindak sebagai building block DNA yang diperlukan dalam proses ekstensi DNA. dNTP akan menempel pada gugus –OH pada ujung 3’ dari primer membentuk untai baru yang komplementer dengan untai DNA template (Newton dan Graham, 1994). Selain itu, buffer berperan dalam menjaga pH medium agar proses amplifikasi dapat berlangsung, sedangkan enzim polimerase DNA berfungsi sebagai katalisis untuk reaksi polimerisasi DNA (Handoyo dan Rudiretna, 2000). 3.3.4. Elektroforesis Elektroforesis adalah suatu proses yang dapat memisahkan atau memigrasikan fragmen DNA pada matriks berpori di bawah pengaruh medan listrik. Elektroforesis dilakukan untuk menentukan keutuhan DNA total (Novitasari et al., 2014). Prinsip teknik elektroforesis adalah berdasarkan migrasi partikel bermuatan dibawah pengaruh medan elektronik dalam kondisi yang konstan. Elektroforesis DNA memisahkan sampel DNA 24
berdasarkan atas ukuran (berat molekul) dan struktur fisik molekulnya. Gel yang biasa digunakan antara lain agarosa. Elektroforesis gel agarosa dapat dilakukan untuk memisahkan sampel DNA dengan ukuran dari beberapa ratus hingga 20.000 pasang basa (Sihotang, 2014). Molekul DNA pada dasarnya bermuatan negatif sehingga di dalam medan listrik akan bermigrasi melalui matriks gel menuju kutub positif (anode). Makin besar ukuran molekulnya, makin rendah laju migrasinya. Berat molekul suatu fragmen DNA dapat diperkirakan dengan membandingkan laju migrasinya dengan laju migrasi fragmenfragmen molekul DNA standar (DNA marker) yang telah diketahui ukurannya. Visualisasi DNA selanjutnya dilakukan di bawah paparan sinar ultraviolet setelah terlebih dahulu gel dalam pembuatannya ditambahkan larutan etidium bromid. Cara lain untuk melihat visualisasi DNA adalah gel direndam di dalam larutan etidium bromid sebelum dipaparkan di atas sinar ultraviolet (media UV-transilluminator) (Theophilus, 2008). Hasil elektroforesis yang dilakukan selama praktikum menunjukkan adanya hasil positif berupa pita DNA yang tertera pada sumuran 1-3, sumuran 7-14, sumuran 22, serta sumuran 25-32. Adapun ukuran pita DNA yang terdeteksi jika dibandingkan dengan marker : CSL-MDNA-100BPH adalah sebesar >3000 BP pada sumuran 1-3 dan 700 BP pada sumuran 4, 7-14, 16-17, 18-21, 24-31. Hasil elektroforesis yang tidak menunjukkan adanya fragmen DNA terdapat pada sumuran 2, sumuran 5-6, sumuran 15-21, sumuran 2324 serta sumuran 33-35. Sambrook (1989) dalam
Amalia (2013) mengidentifikasi
beberapa faktor utama yang menyebabkan hasil elektroforesis tak sesuai dengan yang diharapkan. Hasil elektroforesis yang buruk seringkali disebabkan oleh banyaknya zat-zat pengotor dalam DNA atau dengan kata lain DNA yang didapat tidak murni. Beberapa 25
faktor yang memengaruhi kemurnian DNA yakni tingkat kontaminasi protein dalam larutan, faktor pengencer, serta daya absorbansi. Hasil elektroforesis akan didapatkan pita-pita DNA yang terpisahkan berdasarkan berat molekulnya. Tebal tipisnya pita yang terbentuk dari pita protein menunjukkan kandungan atau banyaknya protein yang mempunyai berat molekul yang sama yang berada pada posisi pita yang sama. Hal ini sejalan dengan prinsip pergerakan molekul bermuatan, yakni molekul bermuatan dapat bergerak bebas di bawah pengaruh medan listrik, molekul dengan muatan dan ukuran yang sama akan terakumulasi pada zona atau pita yang sama atau berdekatan (Sudarmadji, 1996).
26
IV.
4.1.
KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan
Berdasarkan hasil dan pembahasan di atas dapat disimpulkan bahwa : 1.
Untuk menentukan genotipa keturunan angka random ganjil mewakili gamet yang mengandung alel A sedangkan angka random genap mewakili gamet yang mengandung alel a
2.
Pada kelompok kodominan, rasio fenotipa keturunan ikan menunjukkan adanya penyimpangan atau tidak sesuai dengan hukum mendel I, sedangkan untuk kelompok dominan menunjukkan adanya tidak ada penyimpangan atau sesuai dengan hukum mendel I.
3.
Pengukuran analisis variasi fenotipik biasa menggunakan metode morfometrik, yakni membandingkan karakter-karakter morfologi luar individu yang dinyatakan dalam kelipatan atau persentase. Adapun analisis truss morfometrik menggunanakan cara manual hasilnya signifikasinya menunjukan non signifikan, sedangkan analisis ANOVA dengan SPSS dan hasil olahan data aplikasi ImaJ menghasilkan data signifikan dan non signifikan.
4.
Ada tiga jenis ukuran mikropipet berdasarkan jenis tip nya yaitu White Tip (<10 µL), Yellow Tip (10-100 µL) dan Blue Tip (100-1000 µL).
5.
Cara penggunaan mikropipet yaitu atur volume sampel yang dibutuhkan, pasang tip sesuai dengan mikropipet, tekan " Plungger button" atau penyedot sampai batas pertama, masukan tip kedalam sampel, ambil atau sedot sampel, pindahkan sampel
27
dengan cara menekan penyedot sampai batas kedua, lepaskan tekanan penyedot, dan lepaskan tip. 6.
Isolasi DNA memiliki beberapa tahapan, yaitu: (1) Isolasi sel; (2) Lisis dinding dan membran sel; (3) Ekstraksi dalam larutan; (4) Purifikasi; dan (5) Presipitasi.
7.
Amplifikasi DNA dilakukan dengan teknik PCR yang meliputi proses predenaturasi, denaturasi, anneling , extention, dan post extention.
8.
Elektroforesis sampel DNA menggunakan mesin elektroforesis dan diamati dengan UV transiluminator. Hasil menunjukkan bahwa sampel tidak dapat ditentukan ukurannya, karena marker tidak muncul atau tidak membentuk pita.
9.
Cara membuat gel agarose yaitu dengan cara gel agarose ditimbang sebanyak 1 gram dan dimasukkan 5 mL 10x Buffer TBE dan 45 mL aquades dengan mikropipet, gel agarose dipanaskan sambil diaduk di atas kompor listrik hingga mendidih, diamkan hingga hangat-hangat kuku, tambahkan 5 µL Sybr safe gel staining , larutan gel dituang pada cetakan yang telah dipasangi sisir, ditunggu 30 menit hingga gel mengeras.
10.
Cara interpretasi hasil elektroforesis yaitu dengan melihat pita-pita sampel dibandingkan dengan pita marka yang sudah diketahui panjang gelombangnya.
4.2.
Saran
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan praktikan diharapkan tertib dalam praktikum agar acara dapat dilaksanakan dengan optimal. Pengolahan data harus teliti agar pembahasan dan kesimpulan sesuai dengan data yang didapat.
28
DAFTAR PUSTAKA
Amalia, Annisa. 2013. Isolasi DNA dan Elektroforesis DNA Tanaman Bayam ( Amaranthus Sp.). https://www.scribd.com/doc/186803385/Laporan-Isolasi-DNA-DanElektroforesis. Diakses pada 24 Juni 2018. Arumingtyas, E.L. 2016. Genetika Mendel Prinsip Dasar Pemahaman Ilmu Genetika. UB Press. Malang. Handoyo, D., Rudiretna A., 2000. Prinsip Umum dan Pelaksanaan Polymerase Chain Reaction (PCR). Unitas 9 (1) : 18-29. Iswanto, B., R. Suprapto. 2015. Abnormalitas Morfologis Benih Ikan Lelel Afrika (Clarias gariepinus) Strain Mutiara. Media Akuakultur. 10(2):51-57. Mukherjee, K., Storici F., 2012. A Mechanism of Gene Amplification Driven by Small DNA Fragments. PLoS Genetics8(12):1-14. Murtiyaningsih, H., 2017. Isolasi DNA Genom dan Identifikasi Kekerabatan Genetik Nanas Menggunakan RAPD (Random Amplified Polimorfic DNA). Agritrop. 15(1) : 23-30. Mustafa, H., Indra R., dan Yusran U., 2016. Pengukuran Konsentrasi dan Kemurnian DNA Genom Nyamuk Anopheles barbirostris. Jurnal Vektor Penyakit 10 (1) : 7-10. Newton, C.R. dan A. Graham., 1994. Polymerase Chain Reaction. Bios Scientific Publisher : London. Novitasari, D. A., Roza E., Dewi I. R., 2014. Teknik Isolasi dan Elektroforesis DNA Total pada Kryptopterus Apogon (Bleeker 1851) dari Sungai Kampar Kiri dan Tapung Hilir Kabupaten Kampar Provinsi Riau. JOM FMIPA 1 (2) : 258-261. Oktarisna, F.A., A. Soegianti, A.N. Sugiharto. 2013. Pola Pewarisan Sifat Warna Polong Pada Hasil Persilangan Tanaman Buncis (Phaseolus vulgaris L.) Varietas Introduksi Dengan Varietas Lokal. Jurnal Produksi Tanaman. 1(2): 81-90. Priyambodo. 2017. Prinsip, Metode dan Teknik Isolasi http://staff.unila.ac.id/priyambodo/archives/646. Diakses pada 6 Juni 2018.
DNA.
Seeley, Jr., H.W., dan Demark, P.J.V., 1972. Selected Exercises from Microbes in Action, A Laboratory Manual of Microbiology. W.H. Freeman and Co : San Fransisco. Sihotang, Laurencius. 2014. Deteksi DNA Secara Visual Dengan Teknik Elektroforesis. https://laurentsihotang.files.wordpress.com/2014/06/deteksi-dna-seara-visualdengan-teknik-elektroforesis.pdf. Diakses pada 7 Juni 2018. Sudarmadji, S., 1996. Teknik Analisa Biokimiawi. Edisi Pertama. Liberty : Yogyakarta.
29
Suharyanto, R. Febrianti, Sularto. 2016. Karakterisasi Empat Populasi Ikan Gurami (Osphronemus goramy Lac.) dan Persilangannya Berdasarkan Metode Truss Morfometriks. Jurnal Riset Akuakultur. 11(2):125-135. Taqwin, N.A.A., Q.Munawaroh,D.M.Sari, E.M.Suryani, D.A.Rahayu, D.Listyorini. 2014. Studi Morfometrik dan Meristik Ikan Melem Biru (Osteochilus Sp.) Di Aliran Sungai Ketro, Ponorogo, Jawa Timur. Proceeding Seminar Nasional Biodiversitas V. Surabaya. 4 hal. Theophilus, B.D.M. 2008. Principles and Medical Applications of the Polymerase Chain Reaction. In: Molecular Biomethods Handbook Second Edition. Humana Press : USA. Widodo, L. U. 2013. Modul Dasar-Dasar Praktikum Mikrobiologi. http://repository.ut.ac.id/4486/1/BIOL4445-M1.pdf. Diakses pada 6 Juni 2018. Wijayanti, T., S.Suryaningsih, S. Sukmaningrum. 2017. Analisis Karakter Truss Morphometrics Pada Ikan Kemprit (Ilisha megaloptera Swainson,1839) Familia Pristigasteridae. Scripta Biologica. 4(2):109-112. Wijayanto, D.A., R. Hidayat, M. Hasan. 2013. Penerapan Model Persamaan Diferensi dalam Penentuan Probabilitas Genotip Keturunan dengan Dua Sifat Beda. Jurnal Ilmu Dasar. 14(2):79-84. Feranisa, Anggun. 2016. Komparasi Antara Polymerase Chain Reaction (PCR) Dan Loopmediated Isothermal Amplification (LAMP) dalam Diagnosis Molekuler. ODONTO Dental Journal 3 (2) : 145-151. Wulandari, M. I., 2017. Review: Studi Pustaka Peralatan yang Digunakan untuk Kultur Sel. Farmaka 4 (4) : 209-222. Zunaedi, P. 2013. Prinsip Manipulasi Gen. Erlangga : Jakarta.
30
LAMPIRAN
Lampiran 1. Tabulasi Hasil Pewarisan Sifat
Tabel Hasil Perkawinan 1 No. Gamet Gamet Jantan Individu Betina 1 A A 2 A A 3 A A 4 A A 5 A a 6 A a 7 A a 8 A a 9 A A 10 A a 11 A A 12 A a 13 A a 14 A a 15 A a 16 A a 17 A A 18 A a 19 a A 20 a a 21 A a 22 A a 23 a a 24 A A 25 a A 26 a a 27 a a 28 a a 29 a a 30 a A 31 A A 32 a A 33 A A 34 A a 35 A A 36 a A 37 a a
Genotipa Anak AA AA AA Aa Aa aa aa aa Aa Aa AA Aa aa Aa aa aa Aa Aa Aa aa Aa Aa aa AA Aa aa aa aa aa Aa AA Aa AA Aa AA Aa aa 31
Fenotipa Anak Emas Emas Emas Coklat Emas Normal Normal Normal Emas Coklat Emas Coklat Normal Coklat Normal Normal Emas Coklat Emas Normal Emas Coklat Normal Emas Emas Normal Normal Normal Normal Emas Emas Coklat Emas Coklat Emas Coklat Normal
Keterangan Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan
38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60
A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A
a a a A A a A a a a a A A a A A A a A a A a A
Tabel Hasil perkawinan 2 Gamet No. Individu Jantan Betina
Aa aa Aa Aa Aa Aa Aa Aa Aa aa Aa AA Aa Aa AA AA AA Aa AA aa Aa Aa AA
Coklat Normal Coklat Emas Coklat Emas Coklat Emas Coklat Normal Coklat Emas Coklat Emas Emas Emas Emas Emas Emas Normal Coklat Emas Emas
Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina
Genotipe Anak
Fenotipe Anak
Keterangan
1
a
a
aa
Normal
Jantan
2
a
a
aa
Normal
Betina
3
A
a
Aa
Emas
Jantan
4
A
a
Aa
Coklat
Betina
5
A
a
Aa
Emas
Jantan
6
A
A
AA
Emas
Betina
7
A
A
AA
Emas
Jantan
8
a
a
aa
Norma;
Betina
9
A
A
AA
Emas
Jantan
10
a
a
aa
Normal
Betina
32
11
a
A
Aa
Emas
Jantan
12
A
A
AA
Emas
Betina
13
a
A
Aa
Emas
Jantan
14
a
A
Aa
Coklat
Betina
15
a
A
Aa
Emas
Jantan
16
A
A
AA
Emas
Betina
17
A
a
Aa
Emas
Jantan
18
A
a
Aa
Coklat
Betina
19
A
a
Aa
Emas
Jantan
20
A
a
Aa
Coklat
Betina
21
a
a
Aa
Normal
Jantan
22
a
a
Aa
Normal
Betina
23
a
a
Aa
Normal
Jantan
24
A
a
Aa
Coklat
Betina
25
A
A
Aa
Emas
Jantan
26
A
A
AA
Emas
Betina
27
A
A
AA
Emas
Jantan
28
A
A
AA
Emas
Betina
29
A
a
Aa
Emas
Jantan
30
A
a
aa
Normal
Betina
31
A
A
Aa
Emas
Jantan
32
a
a
Aa
Normal
Betina
33
a
A
Aa
Emas
Jantan
34
a
a
aa
Normal
Betina
35
a
a
Aa
Normal
Jantan
36
a
A
Aa
Coklat
Betina
37
a
A
Aa
Emas
Jantan
33
38
A
A
AA
Emas
Betina
39
a
a
aa
Normal
Jantan
40
A
A
AA
Emas
Betina
41
A
A
AA
Emas
Jantan
42
a
a
aa
Normal
Betina
43
A
a
Aa
Emas
Jantan
44
A
a
Aa
Coklat
Betina
45
a
A
Aa
Emas
Jantan
46
a
A
Aa
Coklat
Betina
47
A
a
Aa
Emas
Jantan
48
a
a
aa
Normal
Betina
49
a
A
Aa
Emas
Jantan
50
a
a
aa
Normal
Betina
51
A
a
Aa
Emas
Jantan
52
a
A
Aa
Coklat
Betina
53
A
A
AA
Emas
Jantan
54
a
a
aa
Normal
Betina
55
a
a
aa
Normal
Jantan
56
A
A
AA
Emas
Betina
57
A
a
Aa
Emas
Jantan
58
a
a
aa
Normal
Betina
59
a
A
Aa
Emas
Jantan
60
A
a
Aa
Coklat
Betina
Tabel Hasil Perkawinan 3
No individu.
Gamet Jantan
Gamet Betina
Genotipe Anak
Fenotipe Anak
Keterangan
1
A
A
AA
Emas
Jantan
34
2
A
a
Aa
Coklat
Betina
3
a
a
aa
Normal
Jantan
4
a
A
Aa
Coklat
Betina
5
A
a
Aa
Emas
Jantan
6
a
a
aa
Normal
Betina
7
a
a
aa
Normal
Jantan
8
A
a
Aa
Coklat
Betina
9
A
a
Aa
Emas
Jantan
10
A
a
Aa
Coklat
Betina
11
a
a
aa
Normal
Jantan
12
A
a
Aa
Coklat
Betina
13
a
a
aa
Normal
Jantan
14
a
A
Aa
Coklat
Betina
15
A
A
AA
Emas
Jantan
16
A
A
AA
Emas
Betina
17
A
a
Aa
Emas
Jantan
18
a
A
Aa
Coklat
Betina
19
a
a
aa
Normal
Jantan
20
a
a
aa
Normal
Betina
21
a
A
Aa
Emas
Jantan
22
A
a
Aa
Coklat
Betina
23
A
a
Aa
Emas
Jantan
24
A
a
Aa
Coklat
Betina
25
A
A
AA
Emas
Jantan
26
A
A
AA
Emas
Betina
27
A
a
Aa
Emas
Jantan
28
A
a
Aa
Coklat
Betina
35
29
A
a
Aa
Emas
Jantan
30
A
a
Aa
Coklat
Betina
31
A
a
Aa
Emas
Jantan
32
A
a
Aa
Coklat
Betina
33
A
A
Aa
Emas
Jantan
34
A
A
Aa
Coklat
Betina
35
A
a
Aa
Emas
Jantan
36
A
A
Aa
Coklat
Betina
37
A
A
Aa
Emas
Jantan
38
A
A
Aa
Coklat
Betina
39
A
A
AA
Emas
Jantan
40
A
a
aa
Normal
Betina
41
A
a
Aa
Emas
Jantan
42
A
A
Aa
Coklat
Betina
43
A
A
AA
Emas
Jantan
44
A
a
aa
Normal
Betina
45
A
a
aa
Normal
Jantan
46
A
a
aa
Normal
Betina
47
A
a
aa
Normal
Jantan
48
A
A
Aa
Coklat
Betina
49
A
a
Aa
Emas
Jantan
50
A
A
AA
Emas
Betina
51
A
a
aa
Normal
Jantan
52
A
A
AA
Emas
Betina
53
A
A
AA
Emas
Jantan
54
A
a
aa
Normal
Betina
55
A
a
aa
Normal
Jantan
36
56
a
a
aa
Normal
Betina
57
A
A
AA
Emas
Jantan
58
a
A
Aa
Coklat
Betina
59
A
a
Aa
Emas
Jantan
60
A
a
Aa
Coklat
Betina
Tabel Hasil perkawinan 4 Gamet No. Genotipe Anak Individu Jantan Betina
Fenotipe Anak
Keterangan
1
A
a
Aa
Emas
Jantan
2
A
A
AA
Emas
Betina
3
a
a
aa
Normal
Jantan
4
A
a
Aa
Coklat
Betina
5
a
A
AA
Emas
Jantan
6
A
a
Aa
Coklat
Betina
7
a
A
Aa
Emas
Jantan
8
a
a
Aa
Normal
Betina
9
A
a
Aa
Emas
Jantan
10
A
a
Aa
Coklat
Betina
11
A
a
Aa
Emas
Jantan
12
A
A
AA
Emas
Betina
13
a
a
aa
Normal
Jantan
14
a
A
Aa
Coklat
Betina
15
a
A
Aa
Emas
Jantan
16
A
a
Aa
Coklat
Betina
17
A
A
AA
Emas
Jantan
18
A
a
Aa
Coklat
Betina
37
19
a
a
aa
Normal
Jantan
20
a
A
Aa
Coklat
Betina
21
A
a
Aa
Emas
Jantan
22
A
A
AA
Emas
Betina
23
a
A
Aa
Emas
Jantan
24
a
a
aa
Normal
Betina
25
a
A
Aa
Emas
Jantan
26
A
a
Aa
Coklat
Betina
27
a
a
aa
Normal
Jantan
28
a
a
aa
Normal
Betina
29
A
a
Aa
Emas
Jantan
30
A
a
Aa
Coklat
Betina
31
A
a
Aa
Emas
Jantan
32
A
a
Aa
Coklat
Betina
33
a
A
Aa
Emas
Jantan
34
a
a
aa
Normal
Betina
35
A
a
Aa
Emas
Jantan
36
a
a
aa
Normal
Betina
37
A
a
Aa
Emas
Jantan
38
a
a
aa
Normal
Betina
39
A
A
AA
Emas
Jantan
40
a
a
aa
Normal
Betina
41
a
a
aa
Normal
Jantan
42
A
a
Aa
Coklat
Betina
43
a
A
Aa
Emas
Jantan
44
a
A
Aa
Coklat
Betina
45
A
A
AA
Emas
Jantan
38
46
A
A
AA
Emas
Betina
47
a
A
Aa
Emas
Jantan
48
A
A
AA
Emas
Betina
49
A
A
AA
Emas
Jantan
50
A
A
AA
Emas
Betina
51
a
A
Aa
Emas
Jantan
52
A
a
Aa
Coklat
Betina
53
a
A
Aa
Emas
Jantan
54
A
A
AA
Emas
Betina
55
A
A
AA
Emas
Jantan
56
a
A
Aa
Coklat
Betina
57
A
A
AA
Emas
Jantan
58
A
A
AA
Emas
Betina
59
A
A
AA
Emas
Jantan
60
a
A
Aa
Coklat
Betina
Fenotipe Anak
Keterangan
Tabel Hasil Perkawinan 5 Gamet Genotipe Anak No. Individu Jantan Betina
1
A
A
AA
Emas
Jantan
2
A
A
AA
Emas
Betina
3
A
A
AA
Emas
Jantan
4
A
a
Aa
Coklat
Betina
5
a
A
Aa
Emas
Jantan
6
a
a
aa
Normal
Betina
7
a
a
aa
Normal
Jantan
8
a
a
aa
Norma;
Betina
39
9
A
a
Aa
Emas
Jantan
10
A
a
Aa
Coklat
Betina
11
A
A
AA
Emas
Jantan
12
A
a
Aa
Coklat
Betina
13
a
a
aa
Normal
Jantan
14
A
a
Aa
Coklat
Betina
15
a
a
aa
Normal
Jantan
16
a
a
aa
Normal
Betina
17
a
A
Aa
Emas
Jantan
18
A
a
Aa
Coklat
Betina
19
a
A
Aa
Emas
Jantan
20
a
a
aa
Normal
Betina
21
A
a
Aa
Emas
Jantan
22
A
a
Aa
Coklat
Betina
23
a
a
aa
Normal
Jantan
24
A
A
AA
Emas
Betina
25
a
A
Aa
Emas
Jantan
26
a
a
aa
Normal
Betina
27
a
a
aa
Normal
Jantan
28
a
a
aa
Normal
Betina
29
a
a
aa
Normal
Jantan
30
a
A
Aa
Coklat
Betina
31
A
A
AA
Emas
Jantan
32
a
A
Aa
Coklat
Betina
33
A
A
AA
Emas
Jantan
34
A
a
Aa
Coklat
Betina
35
A
A
AA
Emas
Jantan
40
36
a
A
Aa
Coklat
Betina
37
a
a
aa
Normal
Jantan
38
A
a
Aa
Coklat
Betina
39
a
a
aa
Normal
Jantan
40
A
a
Aa
Coklat
Betina
41
a
A
Aa
Emas
Jantan
42
a
A
Aa
Coklat
Betina
43
A
a
Aa
Emas
Jantan
44
a
A
Aa
Coklat
Betina
45
A
a
Aa
Emas
Jantan
46
A
a
Aa
Coklat
Betina
47
a
a
aa
Normal
Jantan
48
A
a
Aa
Coklat
Betina
49
A
A
AA
Emas
Jantan
50
a
A
Aa
Coklat
Betina
51
A
a
Aa
Emas
Jantan
52
A
A
AA
Emas
Betina
53
A
A
AA
Emas
Jantan
54
A
A
AA
Emas
Betina
55
A
a
Aa
Emas
Jantan
56
A
A
AA
Emas
Betina
57
a
a
aa
Normal
Jantan
58
a
A
Aa
Coklat
Betina
59
A
a
Aa
Emas
Jantan
60
A
A
AA
Emas
Betina
41
Lampiran 2. Hasil Analisis Truss Morfometrik
Manual ANOVA
Sum of Squares P_T
P_S
P1_2
P1_4
P1_6
P3_4
P3_5
P3_6
P4_5
Between Groups
df
Mean Square
594.050
1
594.050
Within Groups
1322.900
18
73.494
Total
1916.950
19
378.450
1
378.450
Within Groups
1126.100
18
62.561
Total
1504.550
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.001
18
.000
Total
.001
19
Between Groups
.001
1
.001
Within Groups
.006
18
.000
Total
.008
19
Between Groups
.001
1
.001
Within Groups
.010
18
.001
Total
.011
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.005
18
.000
Total
.005
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.007
18
.000
Total
.007
19
Between Groups
.001
1
.001
Within Groups
.008
18
.000
Total
.009
19
Between Groups
.001
1
.001
Within Groups
.006
18
.000
Total
.006
19
Between Groups
42
F
Sig. 8.083
.011
6.049
.024
7.079
.016
3.989
.061
2.033
.171
.338
.568
.304
.588
1.650
.215
1.880
.187
P4_6
P4_7
P4_8
P5_6
P6_7
P6_8
P7_8
P7_9
P7_10
P8_9
P8_10
Between Groups
.003
1
.003
Within Groups
.006
18
.000
Total
.009
19
Between Groups
.001
1
.001
Within Groups
.005
18
.000
Total
.006
19
Between Groups
.003
1
.003
Within Groups
.009
18
.000
Total
.011
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.006
18
.000
Total
.006
19
Between Groups
.006
1
.006
Within Groups
.013
18
.001
Total
.019
19
Between Groups
.002
1
.002
Within Groups
.018
18
.001
Total
.020
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.007
18
.000
Total
.008
19
Between Groups
.001
1
.001
Within Groups
.015
18
.001
Total
.016
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.003
18
.000
Total
.003
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.008
18
.000
Total
.008
19
Between Groups
.001
1
43
.001
8.043
.011
2.368
.141
5.416
.032
1.450
.244
8.318
.010
2.262
.150
1.028
.324
1.187
.290
.015
.905
.063
.805
1.955
.179
P9_10
Within Groups
.008
18
.000
Total
.009
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.001
18
.000
Total
.001
19
3.479
.079
Digital ANOVA
Sum of Squares P_T
P_S
P1_2
P1_4
P1_6
P3_4
P3_5
P3_6
df
Mean Square
Between Groups
26.734
1
26.734
Within Groups
19.578
18
1.088
Total
46.312
19
Between Groups
13.306
1
13.306
Within Groups
12.685
18
.705
Total
25.991
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.001
18
.000
Total
.001
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.005
18
.000
Total
.006
19
Between Groups
.001
1
.001
Within Groups
.004
18
.000
Total
.004
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.004
18
.000
Total
.004
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.004
18
.000
Total
.005
19
Between Groups
.000
1
44
.000
F
Sig.
24.579
.000
18.881
.000
1.476
.240
1.466
.242
2.746
.115
.369
.551
1.267
.275
.109
.745
P4_5
P4_6
P4_7
P4_8
P5_6
P6_7
P6_8
P7_8
P7_9
P7_10
Within Groups
.004
18
Total
.005
19
Between Groups
.001
1
.001
Within Groups
.003
18
.000
Total
.004
19
Between Groups
.001
1
.001
Within Groups
.002
18
.000
Total
.003
19
Between Groups
.011
1
.011
Within Groups
.030
18
.002
Total
.040
19
Between Groups
.005
1
.005
Within Groups
.009
18
.000
Total
.013
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.003
18
.000
Total
.003
19
Between Groups
.001
1
.001
Within Groups
.024
18
.001
Total
.024
19
Between Groups
.002
1
.002
Within Groups
.009
18
.001
Total
.011
19
Between Groups
.001
1
.001
Within Groups
.002
18
.000
Total
.002
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.002
18
.000
Total
.002
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.004
18
.000
45
.000
8.965
.008
5.351
.033
6.603
.019
9.492
.006
.529
.477
.508
.485
4.572
.046
6.960
.017
.021
.886
.927
.348
P8_9
P8_10
P9_10
Total
.004
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.006
18
.000
Total
.006
19
Between Groups
.316
1
.316
Within Groups
5.262
18
.292
Total
5.578
19
Between Groups
.000
1
.000
Within Groups
.001
18
.000
Total
.001
19
Lampiran 3. Ikan Nila untuk Analisis Truss Morfometri
Ikan Nila strain Merah
46
.762
.394
1.082
.312
.008
.932
Ikan Nila strain Hitam
47
48
Lampiran 4. Dokumentasi Kegiatan Praktikum
Pengambilan sampel
Menghancurkan sampel dengan pellet pestle
Penambahan digestion buffer dan Proteinase K
Memvortex larutan sampel
Menspin down larutan sampel
Penambahan lysis/bunding buffer
Penambahan Elusion buffer
Sampel DNA pada tabung mikro
Membuat resep primer untuk PCR
Memasukkan sampel isolasi DNA kedalam campuran resep primer
Melakukan amplifikasi DNA dengan PCR
Pembuatan gel agarose
Memasukkan sampel 49
