UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUIS GONZAGA DE ICA FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA ANALISIS MICROBIOLOGICO TEMA: MEDIOS DE CULTIVO DOCENTE: Q.F. BERTHA RAMOS ALUMNA: ANGELA SORIA PINEDA CICLO: IX
INTRODUCCION
Dado el pequeño tamaño de los microorganismos, la cantidad de información que puede obte obtene ners rsee de un indi indivi vidu duo o es muy muy limi limita tada da.. Por Por ello ello es neces necesari ario o el estu estudi dio o de pobla poblacio ciones nes,, que contie contienen nen miles miles o millon millones es de indivi individuo duos. s. Estas Estas poblaci poblacione oness se obtien obtienen en al hacer hacer crecer crecer los microo microorga rganis nismos mos bajo bajo condic condicion iones es más o menos menos bien bien definidas, como cultivos.
El estudio de estos cultivos permite detectar la presencia de microorganismos en una muestr muestraa y su posteri posterior or identi identifica ficació ción, n, efectu efectuar ar prueba pruebass de suscep susceptib tibili ilidad dad de estos estos microorganismos a antibióticos o a antisépticos concretos, etc. Uno de los sistem sistemas as más import important antes es para para la identi identifica ficació ción n de microo microorga rganis nismos mos es obse observ rvar ar su creci crecimi mien ento to en sust sustan ancia ciass alim alimen entic ticias ias arti artific ficial iales es prep prepara arada dass en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayorí mayoríaa de las bacter bacterias ias patóge patógenas nas requie requieren ren nutrie nutriente ntess comple complejos jos similar similares es en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes.
MEDIOS DE CULTIVO EN MICROBIOLOG MICROBIOLOGIA IA
DEFINICION DE CULTIVO:
En biología, biología, y espe especí cífi fica came ment ntee en microbiología, microbiología, un cult cultiv ivo o es un méto étodo para para la mult multip ipli lica caci ción ón de microorganismos, microorganismos, tales como bacterias y virus, virus, en el que se prepara un medio óptimo óptimo para para favore favorecer cer el proces proceso o dese desead ado. o. Un cult cultiv ivo o es empl emplea eado do como como un método fundam fundament ental al para para el estudio de las las bacterias y otro otross microorganismos que causan enfermedades. Se entiende por medio de cultivo la mezcla de sustancias, natu natura rale les, s, sint sintét étic icas as o amba ambas, s, que que perm permit itee el crecimiento y la reproducción de microorganismos o bien que permite mantener su viabilidad. Los Los medi medios os de cult cultiv ivo o son son otro otro de los los prod produc ucto toss que que enco encont ntrar rarem emos os en los los laboratorios de análisis clínicos. La mayoría de ellos pueden prepararse en el propio laboratorio, pero cada vez es más habitual que se adquieran preparados listos para su uso.
CARACTERÍSTICAS: Un microorganismo se siembra en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido de agar . Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azúcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo sólido donde las células que se multiplican no cambian de localización; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisión binaria una colonia macroscópica compuesta por decenas de millones de células similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecerá como cultivo puro de un solo tipo de bacteria. El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirv hirvie iend ndo o y se soli solidi difi fica ca al enfri enfriar arse se a 40 grad grados os.. Con Con míni mínima mass excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él. Diferencia entre un medio de cultivo sólido y uno líquido: El medio de cultivo sólido contiene entre 1.5 Y 2% de agar-agar; el medio líquido no contiene agar-agar.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuación. En los los dife difere rent ntes es medi medios os de cult cultiv ivo o se encu encuen entr tran an nume numero roso soss mate materi rial ales es de enriqu enriquecim ecimient iento o como como hidrato hidratoss de carbono carbono,, suero, suero, sangre sangre comple completa, ta, bilis, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valo valorr nutr nutrit itiv ivo o del del medi medio o y para para dete detect ctar ar reac reacci cion ones es de ferm fermen enta taci ción ón de los los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como c omo inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).
INDICACIONES: Muchas Muchas especie especiess bacteri bacteriana anass son tan parecid parecidas as morfol morfológi ógicam cament entee que es imposi imposible ble diferenciarlas sólo con el uso del microscopio; microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus características bioquímicas sembrándolas en medios de cultivo especiales. Así, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayoría de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si está presente. Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azúcares especiales que sólo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se añaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos ácidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentación, generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado.
A la izquierda, placas de Petri con cultivos bacterianos en medio sólido. A la derecha, tubos con cultivos en medio líquido inoculados con puntas de micropipeta .
Con otros medios de cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes: nutrientes: así, algunas algunas bacterias bacterias con enzimas hemolíticas hemolíticas (capaces (capaces de rom romper los glóbulos roj rojos) producen hemólisis y cambios apreciabl ables macroscópicamente en las placas de agar-sangre. Los diferentes medios y técnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiología de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibióticos a los que son sensibles esas bacterias. Los Los cult cultiv ivos os suel suelen en usar usarse se en medi medici cina na para para dete determ rmin inar ar la pres presen enci ciaa de agentes patógenos en fluidos corporales (p. ej. la sangre o la orina). orina).
CONDICIONES REQUERIDAS: El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio. Los medios de cultivo para poder ser utilizados y garantizar que los resultados obtenidos a partir de ellos sean confiables deben cumplir con los siguientes requisitos:
1- Disponibilidad de nutrientes adecuados: Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos caso casoss será serán n nece necesa sari rias as cier cierta tass vita vitami mina nass y otra otrass sust sustan anci cias as indu induct ctor oras as del del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar. Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de
estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaba la pérdida de los factores nutritivos lábiles. Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es util utiliz izar ar pept pepton onaa que, que, adem además ás,, repres represen enta ta una una fuen fuente te fácil fácilme ment ntee aseq asequi uibl blee de nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la peptona. Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a muchas sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamínica. Muy Muy a menu menudo do se añad añaden en al medi medio o de cult cultiv ivo o cier cierto toss colo coloran rantes tes,, bien bien como como indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.
2- Consistencia adecuada del medio: Partie Partiendo ndo de un medio medio líquid líquido o podemo podemoss modific modificar ar su consis consisten tencia cia añadie añadiendo ndo prod product uctos os como como albúmi albúmina, na, gelatin gelatinaa o agar, agar, con lo que obtend obtendríam ríamos os medios medios en estado semisólido o sólido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla. Actu Actualm almen ente te los los medi medios os sóli sólido doss son son de uso uso univ univer ersa sal, l, por por su vers versat atil ilid idad ad y comodi comodidad dad,, pero pero hay tambié también n gran gran cantid cantidad ad de medios medios líquid líquidos os cuyo cuyo uso está está ampliamente extendido en el laboratorio.
3- Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases: Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.
4- Condiciones Adecuadas De Humedad: Un nive nivell míni mínimo mo de hume humeda dad, d, tant tanto o en el medi medio o como como en la atmó atmósf sfer era, a, es imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufa estufass de cultiv cultivo o a 35-37º 35-37ºC C propor proporcio cionan nando do una fuente adecua adecuada da de agua agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio.
5- Luz ambiental: La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en pres presen enci ciaa de luz luz sola solar. r. Hay exce excepc pcio ione ness evid eviden ente tess como como serí seríaa el caso caso de los los microorganismos fotosintéticos.
6- pH: La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvi olvida darr que que la pres presen encia cia de ácid ácidos os o base basess en cant cantid idad ades es que que no impi impide den n el crecimiento crecimiento bacteriano pueden sin embargo embargo inhibirlo inhibirlo o incluso incluso alterar sus procesos procesos metabólicos normales.
7- Temperatura: Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los termófilos a 80ºC o incluso a temper temperatu aturas ras superio superiores res (hiper (hipertem temófi ófilos los). ). En líneas líneas general generales, es, los patóge patógenos nos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos tienen rangos más amplios.
8- Esterilidad del medio: Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecim crecimient iento o microb microbian iano o normal normal del o de los especi especimen menes es inocul inoculado adoss en dicho dichoss medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante).
PRESENTACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO: Los medios de cultivo se utilizan en una de las formas siguientes:
Medios Líquidos o caldos de cultivo : Son los que una vez preparados se mantienen en estado líquido. Suelen utilizarse para realizar la suspensión de disolución de la muestra a analizar analizar con el fin de conseguir conseguir la disolució disolución n madre. Pueden presentarse presentarse en bolsas bolsas de 5 litros, en frascos de 250 ml, o en tubos de un solo uso.
Medios sólidos: Contiene un agente espesante, por lo general agar a una concentración del 1,5 %. El agar es un derivado de algas. Es sólido a temperaturas inferiores a los 40 o
45ºC.
Medios semisólidos: Tienen Tienen una consis consisten tencia cia interm intermedi ediaa entre entre la de los anteri anteriore ores. s. Suelen contener una concentración de agar del 0,7 %. Tal como hemos apuntado, la mayoría de los medios de cultivo se compran hoy en día ya prep prepar arad ados os.. Unos Unos lleg llegan an para para su uso uso en dist distin inta tass pres presen enta taci cion ones es,, y otro otross deshidratados. La ventaja de los primeros es su comodidad y la desventaja, que su plazo de conservación es corto. Los deshidratados, en cambio, pueden conservarse bastante más tiempo, pero hay que prepararlos antes de usarlos.
CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO: Atendiendo a su utilidad práctica:
MEDIOS PARA AISLAMIENTOS PRIMARIOS: Para Usos Generales : No Selectivos , para cultivo de una amplia variedad de organismos difíciles de hacer crecer. A menudo están enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc)
Selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se añaden sustancias que inhi inhiba ban n el creci crecimie mient nto o de ciert ciertos os grup grupos os de bact bacteri erias as,, perm permit itie iend ndo o a la vez vez el crecimiento de otras. Variando las sustancia añadidas, se varía el tipo y grado de selectividad (Mac Conkey, Kanamicina-Vancomicina). Contienen uno o varios compuestos que inhiben el crecimiento de un determinado tipo de microorganismos y no afectan a otros tipos. Ej: El cristal violeta inhibe las gram +. Otra manera es modificar la fuente de carbono; si sustituímos la glucosa por maltosa, seleccionamos aquellos microorganismos capaces de digerirla
Enriquecidos: Algunos microorganismos no son capaces de desarrollarse en medios de cultivo cultivo normales. normales. Para cultivarlos cultivarlos necesitamos necesitamos añadir sustancias sustancias altamente nutritivas nutritivas como como sangre sangre,, suero suero,, extrac extractos tos de tejido tejidoss animal animales. es. Estos Estos medios medios son los medios medios enriquecidos, y los microorganismos que crecen en ellos son microorganismos exigentes o fastidiosos. Supr Suprim imen en el creci crecimi mien ento to de la flor floraa comp competi etiti tiva va norm normal al poten potenci cian ando do el cult cultiv ivo o y crecimiento deseado (Selenito, medio con Vitamina K). Ejemplo: agar-sangre.
Para Aislamientos Especializados: formulaciones nutritivas especiales que satisfacen reque requeri rimi mien ento toss de grup grupos os espe especí cífic ficos os de bact bacter eria ias, s, ayud ayudan ando do a su iden identi tifi ficac cació ión n (Lowenstein).
MEDIOS PARA IDENTIFICACIÓN IDENTIFICACIÓN::
Diferenciales: formul formulaci acione oness especia especiales les en las que se estudi estudian an las peculi peculiarid aridade adess fisi fisiol ológ ógic icas as (nut (nutri rici ción ón y resp respir irac ació ión n sobr sobree todo todo)) espe especí cífi fica cass de las las bact bacter eria ias. s. Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a la identificación de casi cualquier bacteria (Oxidación-Fermentación). Contienen Contienen distintos distintos compuestos compuestos químicos químicos o indicadores indicadores sobre los que determinados determinados microo microorga rganis nismos mos adquie adquiere re colora coloracio ciones nes especí específica ficass o reaccio reaccionan nan de una manera manera determinada. Ejemplo: Agar levine tiene colorantes especiales (eosina y azul de metileno) que nos permi permiten ten diferen diferenciar ciar a las colonias colonias que viven en el medio. medio. Escherichia Escherichia coli forma colonias de color verde claro, mientras que enterobacter forma colonias de color rosa salmón.
Medios Selectivos Y Diferenciales: Es un medio específico para enterobacterias. Cristal violeta inhibe a las gram +. Las sales biliares hace que sólo se desarrollen las gram - que puedan tolerar estas sales; las enterobacterias. El indicador es el rojo neutro, que es rojo a pH ácido e incoloro a pH básico. Como fuente de carbono se utilizan peptona y lactosa. Ejemplo: Agar Mclonkey tiene cristal violeta y sales biliares. Se usa para detectar E. digerirla, E. Coli y Salmonella . E. Coli es tolerante a la lactosa. Al digerirla, libera ácidos, por lo que se crea un medio ácido y el indicador se pone rojo. Salmonella no tolera la lactosa, por lo que no formará ácidos y formará colonias incoloras.
ALGUNOS MEDIOS DE CULTIVO DE USO HABITUAL: AGAR SANGRE: Medio enriquecido, estándar. El AS al 5% con base de TripticasaSoja es un medio de uso general que permite el crecimiento tanto de microorganismos exigentes como no exigentes, que incluyen bacterias aerobias y anaerobias, así como los del género Candida. Tambìén permite el crecimiento de algunos gérmenes exigentes como como estrep estreptoc tococo ocos, s, pneumo pneumococ cocos, os, Brucella, corine corinebac bacteri terias, as, Erysipelothrix y Pasteurella
AGAR POLIVITEX (chocolate): Medio enriquecido, para bacterias que no crecen en medi medios os habi habitu tuale ales. s. El Agar Agar choc chocol olate ate es un medi medio o dest destin inad ado o prin princip cipal alme ment ntee al aislamiento de gonococos y meningococos, pero en el que pueden crecer muchos otros
microorganismos exigentes. Con un medio análogo a éste es con el que Thayer y Martin han hecho hecho sus primer primeros os asilam asilamient ientos os select selectivo ivoss de gonoco gonococos cos,, despué despuéss de añadir añadir antibióticos.
MAC CONKEY: Este medio es ligeramente selectivo ya que la concentración de sales Biliares, que inhiben el crecimiento de los microorganismos Gram positivos, es baja en relación con otros medios similares. Se incluye también cristal violeta para inhibir el crecimiento de las bacterias Gram positivas, especialmente estafilococos y enterococos.
SCHAEDLER : medio medio básico básico enriqu enriquecid ecido o con sangre sangre.. Este Este medio medio reduct reductor or está está particularmente adaptado al cultivo de los gérmenes anaerobios.
Kanami mici cin na y Van Vancomi comici cin na. Conti ontien enee 75 µg/m µg/mll de KANA-VANCO: Con Kana Kanamicina, Kanamicina, que inhibe inhibe a la mayoría de los bacilos bacilos aerobios, aerobios, facultativos facultativos y anaerobios anaerobios except excepto o Bacter Bacteroid oides, es, y 7,5 µg/ml µg/ml de Vancom Vancomici icina, na, que inhibe inhibe a la mayorí mayoríaa de los microorganismos GramPositivos.
SALMONELLA-SHIGELLA: medi medio o alta altame ment ntee sele select ctiv ivo o para para Salm Salmon onel ella la y Shigella.
PREPARACIÓN Y CONSERVACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO: Los medios de cultivo que no se adquieren listos para su uso deben prepararse en el laboratorio (siguiendo las indicaciones de los fabricantes en el caso de los que parten de medios medios comerc comerciale ialess deshid deshidrata ratados dos). ). Posteri Posteriorm ormente ente se esteril esteriliza izan, n, se revisa revisan n y se conservan.
Consejos de preparación:
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Cuando peses medios de cultivo deshidratados, ten cuidado de no inhalar el polvo desprendido. Algunos contienen sustancias tóxicas para las personas.
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Los medios se preparan en frascos ISO de capacidad suficiente para facilitar la agitación y la completa disolución de los distintos componentes. Pero también se pueden utilizar autopreparadores, si el volumen de medio que se necesita es superior a 2L .Añade paulatinamente el agua necesaria, evitando formar una masa compacta. Todos Todos los medios medios deshid deshidrata ratados dos se prepar preparan an añadie añadiendo ndo agua agua desion desioniza izada da o destilada de calidad comprobada. La solución o la suspensión que se haga debe ser totalmente homogénea. Si necesita calentarse, hazlo lo mínimo posible. Es recomendable calentar el agua a 50-65 ºC, antes de añadirla porque eso favorece notablemente la disolución. Los comp compon onen entes tes debe deben n agit agitars arsee mien mientr tras as se cali calien entan tan,, sobr sobree todo todo los los agar agares es..
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Esterilización: Algunos medios de cultivo se esterilizan con autoclave, otros al baño María y otros mediante filtración por membrana. Todos ellos son procedimientos de esterilización. En todo caso las indicaciones del fabricante te indicarán que procedimiento debes seguir en cada uno de los medios comerciales deshidratados.
Revisión: Es impo import rtan ante te comp compro roba barr que que el medi medio o que que acab acabas as de prep prepar arar ar se comp compor orta ta correctamente. Las pruebas que debes hacer para tener seguridad son:
1. Revisión macroscópica: Se examina el medio a simple vista, atendiendo a su color, a
su opalescencia y transparencia, a la humedad en las placas ya preparadas y a la posible aparición de precipitados.
2. Vigilancia de Ph: Porque la mayoría de los microorganismos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro.
3. Vigilancia de la esterilidad: Se lleva a cabo incubando a 30 ºC durante 72 horas una pequeña porción, representativa del lote de medio preparado, para comprobar que allí no crecen gérmenes.
4. Prueba de la eficacia: En una pequeña porción representativa del medio preparado, se inoc inocul ulaa un micro microor orga gani nism smo o - norm normal alme ment ntee el prop propio io fabr fabric ican ante te acon aconse seja ja el más más adecuado- y se cultiva. Así se comprueba si en el medio de cultivo preparado ese microorganismo se desarrolla correctamente.
Conservación : Cada Cada lote lote de medio medio de cultiv cultivo, o, una vez prepar preparado ado,, esteri esteriliza lizado, do, revisado revisado y en su presentación final, se identifica mediante una etiqueta con el nombre del medio de cultivo correspondiente, el número de lote y la fecha de caducidad. Se almacenan en frigorífico frigorífico a 4ºC. No los guardes por debajo de 0ºC, porque eso altera la estructura del agar. Los medios preparados en placas se guardan en bolsas de plástico, precintadas con cinta adhesiva para preservarlos de la desecación, y se ponen en la nevera en posición invertida, para evitar la caída de gotas de condensación sobre el medio.
BIBLIOGRAFÍA o
http://html.rincondelvago.com/cultivo-de-microorganismos.html
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http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_medios.html
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http://www.mailxmail.com/curso-analisis-clinicos/medios-cultivo
