Laporan Praktikum Mikrobiologi

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI

AKTIVITAS BIOKIMIA BAKTERI

Oleh : Afifi Rahmadetiassani

083112620150008

Rika Safira

083112620150026

Rifky Cahyo Oktavianto

083112620150010

Ely Akbar

083112620150017

Dita Rahayu

083112620150001

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI DAN GENETIKA FAKULTAS BIOLOGI UNIVERSITAS NASIONAL JAKARTA 2011

Trusted by over 1 million members

Try Scribd FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions! Start Free Trial Cancel Anytime.







AKTIVITAS BIOKIMIA BAKTERI

I.Tujuan

Praktikum ini bertujuan untuk mengetahui berbagai macam aktivitas atau reaksi biokimia biokimia yang dapat dilakukan dilakukan oleh bakteri dan untuk mengidentifik mengidentifikasi asi suatu jenis jenis mikroba yang belum diketahui. II.

Tinjauan Pu Pustaka

Bakteri memiliki berbagai aktivitas biokimia dengan menggunakan nutrisi yang diperoleh dari lingkungan sekitarnya. Transformasi biokimia dapat timbul didalam dan diluar dari bakteri yang diatur oleh enzim. Setiap bakteri memiliki kemampuan dalam menggunakan enzim yang dimilikinya dimilikinya untuk degradasi karbohidrat, karbohidrat, lemak, lemak, protein, dan asam amino, metabolisme ini biasanya menghasilkan produk yang dapat digunakan digunakan untuk identifikasi identifikasi dan karakteris karakterisasi asi bakteri. bakteri. Pada prinsipnya prinsipnya pengamatan aktivitas biokimia atau metabolisme mikroorganisme yang diketahui dari kemampuan mikroorgani mikroorganisme sme untuk menggunakan menggunakan dan menguraikan molekul yang kompleks kompleks dan molekul-molekul sederhana. Selain itu, metabolisme seringkali menghasilkan hasil sampingan yang dapat digunakan untuk identifikasi (Ramaisyah, 2011). Aktivitas metabolisme tidak terlepas dari adanya enzim. Berdasarkan tempat beker bekerjan janya, ya, bakter bakterii memil memiliki iki juga juga jenis jenis enzim enzim yaitu yaitu endoenz endoenzim im dan eksoenz eksoenzim. im. Endoenzim yaitu enzim yang berkerja dalam sel. Sistem endoenzim selain bersifat anabol anabolik ik dapat dapat juga juga bersif bersifat at katabol katabolik, ik, sedangk sedangkan an eksoenz eksoenzim im yaitu yaitu enzim enzim yang yang disekresikan ke luar sel dan berdifusi ke dalam media. Sebagian besar eksoenzim bersifat hidroliktik, yang berarti bahwa eksoenzim menguraikan molekul kompleks menjadi molekul yang molekul-molekul yang lebih sederhana. Molekul-molekul yang lebih kecil ini kemudian dapat memasuki sel dan digunakan untuk kepentingan sel







Indol dan lain-lain. Pengujian biokimia merupakan salah satu hal yang sangat penting dalam dunia mikrobiologi (Lim, 1998). Uji TSIA (triple sugar iron agar) digunakan untuk membedakan kelompok atau genus Enterobacter, perbedaan tersebut didasarkan atas perbedaan dalam fermentasi karbohidrat dan produksi hidrogen sulfida oleh beberapa kelompok bakteri intestinal, uji indol indol digunak digunakan an untuk untuk menguj mengujii adanya adanya konvers konversii tripto triptofan fan menjad menjadii produk produk meta metabo boli litt dan dan menga mengala lami mi oksi oksidas dasii oleh oleh bakte bakteri ri denga dengan n akti aktivi vita tass enzim enzimat atik ik.. Kemampuan Kemampuan menghidroli menghidrolisis sis triptofan triptofan dengan memproduksi memproduksi indol bukan merupakan merupakan karakteristik semua mikroorganisme, dengan begitu berarti dapat digunakan sebagai penanda biokimia (Cappucino, 2001). Uji MR (Metyl Red), yaitu pH indikator akan mendeteksi adanya konsentrasi produk akhir asam dalam jumlah tinggi. pH asam rendah stabil dan dipelihara oleh E. coli pada akhir inkubasi. Selama periode inkubasi akhir, E. aerogens mengubah asam ini menjadi produk akhir non asam seperti 2, 3-butanediol dan asetil-metilkarbinol yang secara enzimatik (Cappucino, 2001). Voges Voges-P -Pro rosk skau auer er dici diciri rikan kan oleh oleh kemam kemampu puan an beber beberap apaa organ organis isme me untuk untuk memprodukasi produk akhir netral atau non asam (Cappucino, 2001).

III.

Alat, Bahan dan Cara Kerja

Alat dan Bahan : 1. Biakan

bakteri

yang

disediakan 2. Medi Medium um Star Starch ch Aga Agar r

telah

7. Medium

gula

(air

pepton

dengan dengan gula gula glukos glukosa, a, laktos laktosa, a, maltosa, manitol dan sakarosa)

3. Lugol

8. Medium TSIA

4. Lamp Lampu u spi spirrtus tus

9. Medium SI SIM

5. Jaru Jarum m inok inokul ulas asii

10. Reagen Reagen Kovack’s Kovack’s







14. Medium Sitrat Sitrat

16. Laruta Larutan n H203 3%

15. Medium Trytic Tryticase ase Soy Agar

17. Medium Skim Milk

Cara Kerja : 1. Hidr Hidrol olis isis is Pati Pati a.

Bakt akteri eri yang ang telah elah dis disedi ediakan akan dii diinoku nokula lassi ke dal dalam medi medium um Star Starch ch

Agar.

2.

b. b.

Bakt akteri eri di diinku inkuba bassi pad padaa suh suhu u 37° 37°C C sel selam amaa 24 jam. am.

c.

Larutan lu lugol di ditetesi di di atas medium.

d.

Diamati da dan di dicatat ap apa yang terjadi.

Hidr Hidrol olis isis is Prot Protei ein n

a. Bakteri Bakteri yang telah telah disediak disediakan an diinokulas diinokulasii ke dalam dalam medium medium Skim Milk. Milk. b. Bakter Bakterii diinkub diinkubasi asi pada pada suhu 37°C 37°C sela selama ma 24 jam. jam. c. Diamat Diamatii dan dicata dicatatt apa yang yang terjad terjadi. i.

3. Hidr Hidrol olis isis is Gela Gelati tin n a. Bakteri Bakteri yang telah telah disediak disediakan an diinokulas diinokulasii ke dalam dalam medium medium Nutrien Nutrien Gelatin. Gelatin. b. Bakter Bakterii diinkub diinkubasi asi pada pada suhu 37°C 37°C sela selama ma 24 jam. jam. c. Didiam Didiamkan kan di dala dalam m lemari lemari es es selama selama 30 meni menit. t. d. Diamat Diamatii dan dica dicatat tat apa apa yang yang terj terjadi adi..

4. Ferm Fermen enta tasi si Gula Gula a. Bakter Bakterii yang yang telah telah disediak disediakan an diinokul diinokulasi asi ke dalam dalam masing-m masing-masi asing ng medium medium gula: 

Medium glukosa, kapas penutup tabung berwarna kuning









Medium manitol, kapas penutup tabung berwarna hijau



Medium sakarosa, kapas penutup tabung berwarna biru

b. Bakter Bakterii diinkub diinkubasi asi pada pada suhu 37°C 37°C sela selama ma 24 jam. jam. c. Diamat Diamatii dan dicata dicatatt apa yang yang terjad terjadi. i.

5. Reaksi Reaksi TSIA TSIA (Tripl (Triplee Sugar Sugar Iron Iron Agar Agar)) a. Bakteri Bakteri yang telah disediakan disediakan diinoku diinokulasi lasi ke dalam dalam medium medium TSIA. TSIA. b. Bakter Bakterii diinkub diinkubasi asi pada pada suhu 37°C 37°C sela selama ma 24 jam. jam. c. Diamat Diamatii dan dicata dicatatt apa yang yang terjad terjadi. i.

6. Reaksi ksi In Indol a. Bakteri Bakteri yang telah disediakan disediakan diinoku diinokulasi lasi ke dalam dalam medium medium SIM. SIM. b. Bakter Bakterii diinkub diinkubasi asi pada pada suhu 37°C 37°C sela selama ma 24 jam. jam. c. Ditamb Ditambahk ahkan an 3 tetes tetes reage reagen n Kovak Kovak’s. ’s. d. Diamat Diamatii dan dica dicatat tat apa apa yang yang terj terjadi adi..

7. Reak Reaksi si Mera Merah h Met Metil il a. Bakteri Bakteri yang telah disediakan disediakan diinoku diinokulasi lasi ke dalam dalam medium medium MR-VP. MR-VP. b. Bakter Bakterii diinkub diinkubasi asi pada pada suhu 37°C 37°C sela selama ma 24 jam. jam. c. Ditamb Ditambahk ahkan an 3 tetes tetes indik indikato atorr merah merah metil. metil. d. Diamat Diamatii dan dica dicatat tat apa apa yang yang terj terjadi adi..

8. Reaks Reaksii Vog Voges es – Pro Prosk skaue auer r a. Bakteri Bakteri yang telah disediakan disediakan diinoku diinokulasi lasi ke dalam dalam medium medium MR-VP. MR-VP. b. Bakter Bakterii diinkub diinkubasi asi pada pada suhu 37°C 37°C sela selama ma 24 jam. jam. c. Ditambahkan Ditambahkan 3 tetes tetes reagen reagen Barrit Barritts ts dan dibiar dibiarkan kan selama selama 5 – 15 menit. menit.







9. Reak Reakssi Si Sitrat rat a. Bakteri Bakteri yang telah disediakan disediakan diinoku diinokulasi lasi ke dalam dalam medium medium Sitrat. Sitrat. b. Bakter Bakterii diinkub diinkubasi asi pada pada suhu 37°C 37°C sela selama ma 24 jam. jam. c. Diamat Diamatii dan dicata dicatatt apa yang yang terjad terjadi. i.

10. Tes Katala Katalase se a. Bakter Bakterii yang telah disedia disediakan kan diinoku diinokulas lasii ke dalam dalam medium medium Trypti Trypticas casee Soy Agar. b. Bakter Bakterii diinkub diinkubasi asi pada pada suhu 37°C 37°C sela selama ma 24 jam. jam. c. Dite Ditete tesi si laru laruta tan n H2O2 3%. d. Diamat Diamatii dan dica dicatat tat apa apa yang yang terj terjadi adi..

IV . Hasil dan Pembahasan









Uji Aktivitas Biokimia Bakteri

Bacillus

Jenis Bakteri Pseudomonas Isol Isolat at Tana Tanah h 1 Isol Isolat at Tan Tanah ah 2

subtillis Tidak

auroginosa Tidak

Terhidrolisis

Terhidrolisis (+)

terhidrolisis (-) Beku (-)

terhidrolisis (-) Beku (-)

(+) Beku (-)

Beku (-)

b. Laktosa

(+) , tanpa gas

(-) , tanpa gas

(-) , tanpa gas

(+) , ada gas

c. Maltosa

(-) , tanpa gas

(-) , tanpa gas

(-) , tanpa gas

(-) , tanpa gas

d. Manitol

(+) , tanpa gas

(-) , tanpa gas

(-) , tanpa gas

(+) , tanpa gas

e. Sakarosa

(-) , tanpa gas

(-) , tanpa gas

(-) , tanpa gas

(-) , tanpa gas

Merah Metil

(-) , tanpa gas Cincin kuning

(-) , tanpa gas Cinc Cincin in kuni kuning ng (-) (-)

(-) , tanpa gas Cinc Cincin in kuni kuning ng

(+) , tanpa gas Cincin kuning

Voges ges - Proskauer uer

(-) Cincin kuni uning

Cinc Cincin in merah erah (+)

(-) Cinc Cinciin mer merah ah

(-) Cincin merah

(-) Berflagel,

Tidak berflagel,

(+) Tidak

(+) Berflagel, cincin

cincin kuning

cincin kuning (-)

berflagel,

kuning (-)

Hidrolisis Pati Hidrolisis Gelatin Fermentasi Gula a. Glukosa

Indol

Sitrat

(-)

cincin kuning

Hijau (-)

(-) Biru (+)

Biru (+)

Hijau (-)







Metabolisme merupakan reaksi-reaksi kimia yang terjadi pada makhluk hidup. Proses metabolisme dibedakan menjadi dua jenis yaitu anabolisme dan katabolisme. Anabol Anabolism ismee (Biosi (Biosinte ntesis sis)) yaitu yaitu reaksi reaksi biokim biokimia ia yang yang meraki merakitt moleku molekul-m l-mole olekul kul sederhana menjadi molekul-molekul molekul-molekul yang lebih kompleks. kompleks. Misalnya pembentukkan pembentukkan prote protein in dari dari asam asam amino. amino. Secara Secara umum umum proses proses anaboli anabolik k membut membutuhka uhkan n energi energi.. Sedang Sedangkan kan katabo katabolis lisme me yaitu yaitu reaksi reaksi biokim biokimia ia yang yang memeca memecah h atau atau mengur menguraik aikan an molekul-molekul kompleks menjadi molekul-molekul molekul-molekul yang lebih sederhana. Proses katabolik melepaskan energi yang dibutuhkan oleh sel (Waluyo, 2004). Pada praktikum yang telah dilakukan, didapat hasil : menunjukkan bahwa medium tidak terhidrolisi terhidrolisiss oleh bakteri Uji hidrolis hidrolisis is Pati menunjukkan Basillus subtilis dan Pseudomonas auroginosa , hal ini ditunjukkan dengan adanya warna biru-ungu pada saat di tetesi oleh larutan lugol, dan pada bakteri tanah 1 dan bakteri bakteri tanah 2, menunjukkan menunjukkan warna bening/tid bening/tidak ak ada perubahan warna yang berarti pati sudah terhidrolisis sempurna, dan bakteri tanah mempunyai enzim amilase. Uji Hidroli Hidrolisis sis Gelatin Gelatin menunj menunjukka ukkan n hasil hasil negati negatiff pada ke-emp ke-empat at bakter bakterii yang yang

diujikan. Hal tersebut dibuktikan oleh medium yang tetap beku setelah dikeluarkan dari kulkas, yang berarti gelatin tidak terhidrolisis / bakteri tidak mempunyai enzim gelatinase Uji Fermentasi Gula menunjukkan aktivitas bakteri : •

Bacillus subtilis : pada larutan Glukosa dan larutan Maltosa terdapat gas dan







•

Isolate Isolate tanah 2 : terjadi terjadi fermentasi, fermentasi, hal ini ditunjukkan ditunjukkan adanya warna kuning pada pada laruta larutan n Glukos Glukosaa dan Maltos Maltosa. a. Dan adanya adanya gelemb gelembung ung pada pada laruta larutan n glukosa. Sedangkan pada larutan lainnya tetap berwarna ungu.

Uji Merah-Metil Merah-Metil yang yang dilaku dilakukan kan pada keempat keempat bakter bakterii menunj menunjukka ukkan n hasil

negatif, hal ini ditunjukkan dengan adanya cincin kuning pada larutan medium setela setelah h diberi diberi indika indikator tor MerahMerah-Met Metil, il, yang yang berart berartii bakter bakterii hasil hasil akhir akhir bakteri bakteri tersebut bukan asam organik, sehingga pH larutan tidak menjadi asam. Bacillus subtilis, subtilis, Uji Voges-proskauer menunjukkan Cincin kuning pada bakteri bakteri Bacillus dan menunjukkan cincin berwarna merah pada bakteri bakteri Pseudomonas auroginosa dan dan ke-2 ke-2 bakte bakteri ri isol isolat at tana tanah. h. Hal ini ini menu menunj njuk ukka kan n bahw bahwaa Pseudomonas auroginosa dan ke-2 ke-2 bakteri bakteri isolat isolat tanah tanah terseb tersebut ut dapat dapat mengkon mengkonver versi si asam asam menjad menjadii asetil asetil metil metil karbin karbinol, ol, keberad keberadaan aan senyaw senyawaa terseb tersebut ut dapat dapat didete dideteksi ksi dengan reagen Barrits Barrits sehingga membentuk membentuk senyawa senyawa kompleks kompleks berwarna berwarna merah muda. Uji Indol : pada ke-4 bakteri yang di ujikan menunjukkan hasil negatif, hal ini

ditunjukkan dengan adanya cincin berwarna kuning pada permukaan medium setelah ditetesi reagen Kovac’s, yang berarti pada ke-4 bakteri tersebut tidak ada yang mempunyai enzim triptofanase.







enzim sitrat permiase yang merubah asam sitrat menjadi asam piruvat dan CO2 setelah masuk kedalam dan dikonversikan dalam sel. Pada uji uji ini ini dida didapa patt hasi hasill Bacillus Bacillus subtilis subtilis dan Pseudomonas Uji TSIA : Pada auroginosa

hany hanyaa

merag eragiikan kan

gluk glukos osa, a, hal hal

ini dit ditanda andaii

deng dengan an war warna

merah/kuning pada lapisan medium. Sedangkan pada isolat bakteri tanah 1 & isolat bakteri tanah 2 tidak meragikan semua gula, hal ini ditunjukkan dengan adanya warna merah/merah pada lapisan medium Uji Hidrolisis Protein : Pada ke empat bakteri uji menunjukkan hasil negatif, hal

ini ditandai dengan tidak adanya zona bening pada medium skim milk, yang menandakan keempat bakteri tidak mempunyai enzim protease. Uji katalase : Pada uji ini ke-empat bakteri menunjukan hasil positif, hal ini

ditunjukkan ditunjukkan dengan adanya adanya pembentukkan pembentukkan gelembung gelembung setelah setelah di tetesi larutan larutan H2O2 3%. Hal ini berarti semua bakteri uji mempunyai enzim katalase

DAFTAR PUSTAKA

Cappucino, J. dan N. Sherman. Microbilogy A Laboratory Manual. Sixth edition. Benjamin Cumings. San Francisco. 2001.







LAMPIRAN









Gambar 2. Reaksi Merah metil. Positif terdapat cincin merah, negatif terdapat terdapat cincin kuning













Gambar 6. Tes katalase

Laporan Praktikum Mikrobiologi

Recommend Documents