Laporan Praktikum Hari : Jumat
Biokimia Hewan Tanggal : 27 Februari 2015
Pukul : 07.00 – 11.00
PJP : Ukhradiya M Safira, M.Si
Asisten : Amellia
Widia Ayu Lestari
PROTEIN (1)
(Uji Millon, Uji Hopkins-Cole, Uji Ninhidrin, Uji Belerang, Uji Xantoproteat, Uji Biuret)
Kelompok 6
Ilmi Amalia Yasin J3P114001
Fika Andarwati J3P114004
Nur Hidayat J3P114006
Grillinda Vicky N.P J3P114007
Fazar Ismail J3P114025
PROGRAM KEAHLIAN PARAMEDIK VETERINER
PROGRAM DIPLOMA
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2015
Pendahuluan
Protein adalah senyawa organic kompleks berbobot molekul tinggi yang merupakan polimer dari monomer-monomer asam amino yang dihubungkan satu sama lain dengan ikatan peptida. Molekul protein mengandung karbon, hidrogen, oksigen, nitrogen dan kadang kala sulfur serta fosfor. Protein berperan penting dalam struktur dan fungsi semua sel makhluk hidup dan virus.
Asam amino adalah senyawa organik yang memiliki gugus fungsional karboksil (-COOH) dan amina (biasanya –NH2). Dalam biokimia seringkali pengertiannya dipersempit, keduanya terikat pada satu atom karbon (C) yang sama (disebut atom C "alfa" atau α). Gugus karboksil memberikan sifat asam dan gugus amina memberikan sifat basa. Dalam bentuk larutan, asam amino bersifat amfoterik, cenderung menjadi asam pada larutan basa dan menjadi basa pada larutan asam.
Struktur asam amino secara umum adalah satu atom C yang mengikat empat gugus: gugus amina (NH2), gugus karboksil (COOH), atom hidrogen (H), dan satu gugus sisa (R, dari residue) atau disebut juga gugus atau rantai samping yang membedakan satu asam amino dengan asam amino lainnya. Atom C pusat tersebut dinamai atom Cα ("C-alfa") sesuai dengan penamaan senyawa bergugus karboksil, yaitu atom C yang berikatan langsung dengan gugus karboksil. Oleh karena gugus amina juga terikat pada atom Cα ini, senyawa tersebut merupakan asam α-amino. Asam amino biasanya diklasifikasikan berdasarkan sifat kimia rantai samping tersebut menjadi empat kelompok. Rantai samping dapat membuat asam amino bersifat asam lemah, basa lemah, hidrofilik jika polar, dan hidrofobik jika nonpolar.
Gambar 1. Struktur asam α-amino, dengan gugus amina di sebelah kiri dan gugus karboksil di sebelah kanan.
Protein berfungsi sebagai katalisator, sebagai pengangkut dan penyimpan molekul lain seperti oksigen, mendukung secara mekanis sistem kekebalan (imunitas) tubuh, menghasilkan pergerakan tubuh, sebagai transmitor gerakan syaraf dan mengendalikan pertumbuhan dan perkembangan. Analisa elementer protein menghasilkan unsur-unsur C, H, N dan 0 dan sering juga S. Disamping itu beberapa protein juga mengandung unsur-unsur lain, terutama P, Fe, Zi dan Cu (Soerodikoesoemo & Hari: 1989). Peran dan aktivitas protein dalam proses biologis antara lain sebagai katalis enzimatik, bahwa hampir semua reaksi kimia dalam · sistem biologi dikatalis oleh makromolekul yang disebut enzim yang merupakan satu jenis protein. Sebagian reaksi seperti hidrasi karbondioksida bersifat sederhana, sedangkan reaksi lainnya seperti replikasi kromosom sangat rumit (Staryer: 1995). Peran lainnya dari protein dalam sistem biologi adalah sebagai transport, penyimpanan dan koordinasi gerak. Penggolongan protein dibedakan menjadi beberapa macam, antara lain:
1. Berdasarkan struktur molekulnya
Struktur protein terdiri dari empat macam:
Struktur primer (struktur utama)
Struktur ini terdiri dari asam-asam amino yang dihubungkan satu sama lain secara kovalen melalui ikatan peptida.
Struktur sekunder
Protein sudah mengalami interaksi intermolekul, melalui rantai samping asam amino. Ikatan yang membentuk struktur ini, didominasi oleh ikatan hidrogen antar rantai samping yang membentuk pola tertentu bergantung pada orientasi ikatan hidrogennya. Ada dua jenis struktur sekunder, yaitu: ?-heliks dan ?-sheet.
Struktur Tersier
Terbentuk karena adanya pelipatan membentuk struktur yang kompleks. Pelipatan distabilkan oleh ikatan hidrogen, ikatan disulfida, interaksi ionik, ikatan hidrofobik, ikatan hidrofilik.
Struktur Kuartener
Terbentuk dari beberapa bentuk tersier, dengan kata lain multi sub unit. Interaksi intermolekul antar sub unit protein ini membentuk struktur keempat/kuartener
2. Berdasarkan Bentuk dan Sifat Fisik :
Protein globular
Terdiri dari polipeptida yang bergabung satu sama lain (berlipat rapat) membentuk bulat padat. Misalnya enzim, albumin, globulin, protamin. Protein ini larut dalam air, asam, basa, dan etanol.
Protein serabut (fibrous protein)
Terdiri dari peptida berantai panjang dan berupa serat-serat yang tersusun memanjang, dan memberikan peran struktural atau pelindung. Misalnya fibroin pada sutera dan keratin pada rambut dan bulu domba. Protein ini tidak larut dalam air, asam, basa, maupun etanol.
3. Berdasarkan Fungsi Biologi
Pembagian protein didasarkan pada fungsinya di dalam tubuh, antara lain:
Enzim (ribonukease, tripsin)
Protein transport (hemoglobin, mioglobin, serum, albumin)
Protein nutrien dan penyimpan (gliadin/gandum, ovalbumin/telur, kasein/susu, feritin/jaringan hewan)
Protein kontraktil (aktin dan tubulin)
Protein Struktural (kolagen, keratin, fibrion)
Protein Pertahanan (antibodi, fibrinogen dan trombin, bisa ular)
Protein Pengatur (hormon insulin dan hormon paratiroid)
4. Berdasarkan Daya Larutnya
Albumin. Larut air, mengendap dengan garam konsentrasi tinggi. Misalnya albumin telur dan albumin serum
Globulin Glutelin. Tidak larut dalam larutan netral, larut asam dan basa encer. Glutenin (gandum), orizenin (padi).
Gliadin (prolamin). Larut etanol 70-80%, tidak larut air dan etanol 100%. Gliadin/gandum, zein/jagung
Histon. Bersifat basa, cenderung berikatan dengan asam nukleat di dalam sel. Globin bereaksi dengan heme (senyawa asam menjadi hemoglobin). Tidak larut air, garam encer dan pekat (jenuh 30-50%). Misalnya globulin serum dan globulin telur.
Protamin. Larut dalam air dan bersifat basa, dapat berikatan dengan asam nukleat menjadi nukleoprotamin (sperma ikan). Contohnya salmin
5. Protein Majemuk
Adalah protein yang mengandung senyawa bukan hanya protein
Fosfoprotein. Protein yang mengandung fosfor, misalnya kasein pada susu, vitelin pada kuning telur
Kromoprotein. Protein berpigmen, misalnya asam askorbat oksidase mengandung Cu
Fosfoprotein. Protein yang mengandung fosfor, misalnya kasein pada susu, vitelin pada kuning telur
Kromoprotein. Protein berpigmen, misalnya asam askorbat oksidase mengandung Cu
Protein Koenzim. Misalnya NAD+, FMN, FAD dan NADP+
Protein Koenzim. Misalnya NAD+, FMN, FAD dan NADP+
Lipoprotein. Mengandung asam lemak, lesitin
Metaloprotein. Mengandung unsur-unsur anorganik (Fe, Co, Mn, Zn, Cu, Mg dsb)
Glikoprotein. Gugus prostetik karbohidrat, misalnya musin (pada air liur), oskomukoid (pada tulang)
Nukleoprotein. Protein dan asam nukleat berhubungan (berikatan valensi sekunder) misalnya pada jasad renik
Tujuan
Praktikum ini bertujuan agar mahasiswa mengetahui sifat dan struktur asam amino dan protein melalui uji-uji kualitatif. Serta mempelajari beberapa reaksi uji terhadap asam amino dan protein.
Metode
Uji Millon. Tambah 5 tetes pereaksi Millon ke dalam 3 ml larutan protein. Memanaskan kedua cairan tersebut dengan baik- baik. Jika menggunakan pereaksi terlalu banyak maka warna menghilang saat pemanasan berlangsung. Uji ini dilakukan terhadap larutan albumin 2%, gelatin 2%, kasein 2%, pepton 2%, dan fenol 2%.
Uji Hopkins- Cole. Campur 1.5 ml larutan yang akan diperiksa dengan 1.5 ml pereaksi Hopkins- Cole dalam tabung reaksi. Hati- hati dalam menambahkan 2 ml asam pekat melalui dinding tabung yang dimiringkan sehingga membentuk lapisan cairan pada dinding tabung. Tidak diperbolehkan mengocok larutan. Beberapa detik pada pertemua kedua lapisan cairan tersebut terbentuk sebuah cincin violet (ungu). Warna ini menunjukkan reaksi positif terhadap adanya triptofan. Uji ini dilakukan terhadap albumin 2%, kasein 2%, gelatin 2%, dan pepton 2%.
Uji Ninhidrin. Tambah 0.5 ml larutan ninhidrin 0.1% ke dalam 3 ml larutan protein. Memanaskan kedua larutan ke dalam penangas air mendidih selama 10 menit, perhatikan perubahan warna larutan yang terjadi. Uji ini dilakukan terhadap larutan albumin 0.02%, kasein 0.02%, gelatin 0.02%, dan pepton 0.02%.
Uji Belerang. Tambah 1 ml larutan protein dalam larutan 2.5 ml NaOH 10%, didihkan beberapa menit. Tambah 1 tetes larutan Pb-asetat 5%, lanjut pemanasan beberapa menit kembali sambil mengamati warna yang terjadi. Uji ini dilakukan terhadap albumin 0.02%, kasein 0.02%, gelatin 0.02%, dan pepton 0.02%.
Uji Xantoproteat. Menambahkan 1 ml HNO3 pekat dalam 2 ml larutan protein. Campur baik- baik dan memanaskan dengan hati- hati. Memperhatikan warna kuning tua yang timbul. Mendinginkan tabung, tambah tetes demi tetes larutan NaOH pekat hingga larutan basa. Mengamati perubahan warna yang terjadi pada larutan. Uji ini dilakukan terhadap albumin 2%, kasein 2%, gelatin 2%, pepton 2%, dan fenol 2%.
Uji Biuret. Tambah 1 ml NaOH dalam 3 ml larutan protein dan kocok. Tambah 1 tetes larutan CuSO4 0.1%, kocok kembali. Jika tidak terjadi perubahan warna, tambah larutan CuSO4 1 atau 2 tetes.
Hasil dan Pembahasan
Protein merupakan salah satu zat gizi yang sangat dibutuhkan mahluk hidup. Protein memegang peranan penting dalam pertumbuhan dan perkembangan, selain itu untuk mendukung aktifitas yang dilakukan oleh manusia, hewan dan tumbuhan. Protein merupakan zat gizi kunci untuk pertumbuhan fisik manusia dan hewan karena sangat dibutuhkan untuk pertumbuhan tulang dan otot. Sejalan dengan manfaat protein sebagai zat gizi yang berperan dalam pertumbuhan, perkembangan, maka dibutuhkan 15%-20.% protein dari total kebutuhan atau keluaran per hari. Oleh karena itu perlu memperhatikan asupan protein pada makanan yang dikonsumsi untuk mengoptimalkan pengaruhnya. (Annonymous,2012)
Protein merupakan suatu polimer dari asam amino. Asam amino merupakan turunan asam karboksilat yang mengandung gugus amina. Jadi setiap molekul asam amino sekurang-kurangnya mengandung dua buah gugus fungsional, yaitu gugus karboksil (-COOH) dan gugus amina (-NH2). Asam amino dapat diperoleh dari hasil hidrolisis protein. Struktur asam amino mengandung gugus -NH2 yang terikat pada atom C alfa (a), yaitu atom C yang terikat pada gugus karboksil. Struktur asam amino secara umum adalah satu atom C yang mengikat empat gugus: gugus amina (NH2), gugus karboksil (COOH), atom hidrogen (H), dan satu gugus sisa (R, dari residue) atau disebut juga gugus atau rantai samping yang membedakan satu asam amino dengan asam amino lainnya.
Gambar. Struktur Asam Amino (Annonymous,2012)
Semua asam amino yang ditemukan pada protein memiliki ciri yang sama, yaitu gugus karboksil dan amina terikat pada atom karbon yang sama. Perbedaan asam amino satu sama lain terletak pada rantai sampingnya. Rantai samping yang dilambangkan dengan R dapat berupa alkil, cincin benzena, alkohol, dan turunannya.
Dalam uji yang dilakukan, terdapat beberapa macam protein diantaranya Urea, Gelatin, Kasein dan Pepton. Urea adalah senyawa organik yang tersusun dari unsur karbon, hidrogen, oksigen dan nitrogen dengan rumus CON2H4 atau (NH2)2CO. Urea biasa ditemukan pada hasil perombakan eritrosit pada sel-sel hati. Eritrosit atau sel darah merah yang sudah rusak (120 hari) dirombak menjadi 'haemo' dan 'globin'. Selanjutnya 'haemo' akan diubah menjadi zat warna empedu yaitu bilirubin dan urobilin yang mengandung urea dan amonia yang akan keluar bersama urin dan feses. Gelatin adalah asam amino non essensial yaitu glisin dan prolin, gelatin banyak ditemukan sebagai protein penyusun kulit. Kasein paling banyak ditemukan pada susu karena kasein merupakan komponen utama protein penyusun susu, kasein mengandung asam amino tirosin. Pepton adalah hidrolisat protein yang berasal dari reaksi hidrolisis protein oleh enzim protease. Pepton digunakan sebagai sumber nitrogen pada media pembiakan mikroorganisme untuk dapat tumbuh dengan baik.
Gambar. Urea (Annonymous,2012) Gambar. Alpha-Kasein (Annonymous,2012)
Gambar. Gelatin (Annonymous,2012) Gambar. Pepton (Annonymous,2012)
Pada uji tersebut digunakan beberapa macam larutan pereaksi seperti larutan pereaksi biuret, millon, ninhidrin, dan hopkins-cole. Sedangkan untuk uji belerang, dan xantoproteat tidak menggunakan larutan pereaksi khusus. Berikut ,merupakan komposisi dan cara pembuatan masing-masing pereaksi yang digunakan pada uji Protein 1.
Biuret : NaOH 10% : 10 g NaOH dilarutkan dalam 100 ml H2O CuSO4 0,1 % : 0,1 g CuSO4 dilarutkan dalam 100 ml H2ONinhidrin : 0,1 g Ninhidrin dilarutkan dalam 100 ml asetonHopkins- Cole : H2C2O4 + sebuk Mg dalam 100 ml H2OMillon : Hg dilarutkan dalam HNO3, diencerkan dengan H2O
Biuret : NaOH 10% : 10 g NaOH dilarutkan dalam 100 ml H2O
CuSO4 0,1 % : 0,1 g CuSO4 dilarutkan dalam 100 ml H2O
Ninhidrin : 0,1 g Ninhidrin dilarutkan dalam 100 ml aseton
Hopkins- Cole : H2C2O4 + sebuk Mg dalam 100 ml H2O
Millon : Hg dilarutkan dalam HNO3, diencerkan dengan H2O
Hasil
Uji Hopkins-Cole
Tabel. Hasil Uji Hopkins-Cole
Sampel
Hasil
Gambar
Keterangan
Gelatin 0,1%
-
Tidak Terdapat cincin violet
Kasein 0,1%
-
Tidak terdapat cincin violet
Pepton 0,1%
+
Terdapat cincin violet
Keterangan :
( + ) mengandung triptofan
( - ) tidak mengandung triptofan
Uji Biuret
Tabel. Hasil Uji Biuret
Sampel
Hasil
Gambar
Keterangan
Gelatin 0,1%
+
Ungu
Kasein 0,1%
-
Biru
Pepton 0,1%
-
Putih
Keterangan :
( + ) mengandung asam amino (ikatan peptida)
( - ) tidak mengandung asam amino (ikatan peptida)
Uji Millon
Tabel. Hasil Uji Millon
Sampel
Hasil
Gambar
Keterangan
Gelatin 0,1%
-
Putih
Kasein 0,1%
+
Kuning Kemerahan
Pepton 0,1%
-
Putih
Urea 0,1%
-
Putih
Keterangan :
( + ) mengandung tirosin
( - ) tidak mengandung tirosin
Uji Belerang
Tabel. Hasil Uji Belerang
Sampel
Hasil
Gambar
Keterangan
Gelatin 0.1%
-
bening
Kasein 0.1%
-
Tidak berwarna
Pepton 0.1%
-
Cokelat
Keterangan :
( + ) mengandung sistein / sulfur
( - ) tidak mengandung sistein / sulfur
Uji Xantoproteat
Tabel. Hasil Uji Xantoproteat
Sampel
Hasil
Gambar
Keterangan
Gelatin 0,1%
+
Orange
Kasein 0,1%
+
Orange
Pepton 0,1%
+
Orange
Keterangan :
( + ) mengandung inti benzena
( - ) tidak mengandung inti benzena
Uji Ninhidrin
Tabel. Hasil Uji Ninhidrin
Sampel
Hasil
Gambar
Keterangan
Gelatin 0,1%
-
Putih
Kasein 0,1%
-
Putih
Pepton 0,1%
-
Putih
Keterangan :
( + ) mengandung gugus amino bebas
( - ) tidak mengandung gugus amino bebas
Pembahasan
Uji Hopkins - Cole
Uji hopkins cole merupakan uji kimia yang digunakan untuk menunjukkan adanya asam amino triptofan. Pereaksi yang dipakai mengandung asam glioksilat. Kondensasi 2 inti induk dari trptofan oleh asam glioksilat akan menghasilkan senyawa berwarna ungu. Reaksi positif ditunjukkan dengan adanya cincin ungu pada bidang batas.
Triptofan merukan salah satu asam amino essensial yang tidak bisa diproduksi sendiri oleh tubuh. Gugus fungsinal triptofan adalah Indol, yang tidak dimiliki oleh asam amino lainnya membuat triptofan menjadi prekusor dari banyak senyawa penting tubuh seperti melatonin (hormon perangsang tidur), serotonin (suatu transmiter pada sistem saraf) dan niasin (suatu vitamin).
Gambar. Triptofan (Annonymous, 2012)
Gambar. Reaksi Hopkins-Cole (Annonymous, 2012)
Karena percobaan ini tidak dilakukan maka, hasil yang di dapatkan berdasarkan hasil yang ada dalam literatur. Berdasarkan hasil yang didapatkan yang memiliki hasil positif terhadap uji hopkins-cole adalah Pepton. Cincin ungu yang terbentuk pada larutan yang positif disebebkan oleh pereaksi yang terdiri dari asam glioksilat (CHO.COOH) dalam H2SO4 triptofan akan berkondensasi dengan aldehid dan membentuk kompleks berwarna dari jenis asam 2,3,4,5-tetrahidro-ß-karbolin-4-karboksilat. Reaksi tersebut hanya akan berhasil jika ada oksidator kuat. Dalam praktikum ini digunakan H2SO4, Sehingga dapat dikatan bahwa fungsi H2SO4 dalam percobaan ini adalah oksidator agar terbentuk cincin ungu pada larutan bahan yang positif mengandung triptofan. Untuk bahan uji yang menghasilkan hasil negatif, didasarkan karena asam amino penyusun gelatin maupun kasein tidak terdapat asam amino triptofan. Gelatin terdiri dari asam amino glisin dan prolin sedangkan, Kasein terdiri dari asam amino tirosin. Oleh sebab itu tidak terdapat cincin ungu pada hasil percobaan gelatin dan kasein.
Uji Ninhidrin
Uji Ninhidrin digunakan untuk identifikasi asam amino bebas yang terdapat dalam sampel. Asam amino bebas adalah asam amino yang gugus aminonya tidak terikat (Robinson 1995). Ninhidrin adalah reagen yang berguna untuk mendeteksi asam amino dan menetapkan konsentrasinya dalam larutan. Senyawa ini merupakan hidrat dari triketon siklik dan bila bereaksi dengan asam amino akan menghasilkan zat warna ungu. Hanya atom nitrogen dari zat warna ungu yang berasal dari asam amino, selebihnya terkonversi menjadi aldehid dan karbondioksida. Jadi, zat warna ungu yang sama dihasilkan dari semua asam amino α dengan gugus amino primer dan intensitas warnanya berbanding lurus dengan konsentrasi asam amino yang ada (Hart 2003).
Gambar 3 Reaksi uji Ninhidrin (Bintang M ,2010)
Hasil percobaan menunjukkan bahwa semua sampel yang diuji bereaksi negatif yakni tidak mengandung gugus amino bebas. Hal tersebut disebabkan karena konsentrasi bahan uji yang digunakan tidak sesuai dengan metode yang harus dilakukan.
Adanya kandungan gugus karboksil (COOH) dan amino bebas (NH3) pada sampel protein tersebut ditunjukkan dengan perubahan warna sampel menjadi biru muda. Semakin banyak ninhidrin pada zat uji yang dapat bereaksi, semakin pekat warnanya. Pemanasan yang dilakukan pada tiap uji percobaan bertujuan untuk koagulasi protein sehingga tidak dapat larut dalam air dan terbentuknya endapan.
Uji Belerang
Ikatan disulfida merupakan jenis ikatan kovalen lain yang dimiliki oleh peptida dan asam amino dalam protein (Hart 2003). Sistein merupakan asam amino yang mengandung atom S pada molekulnya. Reaksi Pb-asetat dengan asam-asam amino tersebut akan membentuk endapan berwarna gelap, yaitu garam PbS. Penambahan NaOH dalam percobaan ini adalah untuk mendenaturasikan protein sehingga ikatan yang menghubungkan atom S dapat terputus oleh Pb-asetat membentuk PbS, sedangkan Pb berfungsi sebagai donor Pb+ (Girindra 1986). Hasil percobaan pada literatur sampel albumin 0.02% akan membentuk endapan PbS, sehingga dapat disimpulkan bahwa larutan tersebut mengandung asam amino yang rantainya samping mempunyai senyawa belerang.
S2+(aq) + Pb2+(aq) PbS(s)
S2+(aq) + Pb2+(aq) PbS(s)
Gambar. Reaksi Uji belerang (Girindra,1986)
Sistein merupakan asam amino non esensial bagi manusia yang memiliki atom S, bersama-sama dengan metionin, karena memiliki atom S, sistein menjadi sumber utama dalam sintesis senyawa-senyawa biologis lain yang mengandung belerang. Sistein dan metionin pada protein juga berperan dalam menentukan konformasi protein karena adanya ikatan hidrogen pada gugus tiol. Sumber utama sisteina pada makanan adalah cabai, bawang putih, bawang bombay, brokoli, haver, dan inti bulir gandum (embrio). L-sistein juga diproduksi secara industri melalui hidrolisis rambut manusia dan babi serta bulu unggas (Arbianto Purwo 1993).
Uji Xantoproteat
Uji Xantoproteat merupakan uji untuk menunjukan adanya inti benzene (cincin fenil) pada suatu sampel protein. Dalam uji Xantoproteat, inti benzene akan ternitrasi oleh asam nitrat pekat membentuk turunan nitrobenzene berwarna kuning tua. Pada suasana basa (ditambahkan larutan basa), uji Xantoproteat akan mengubah kompleks warna kuning tua pada sampel menjadi warna
orange.
Gambar. Reaksi Uji Xantoproteat (Bintang,2010)
Dalam percobaan ini semua sampel menghasilkan uji yang positif terhadap reagen xantropoteat yang ditandai dengan terbentuknya kompleks berwarna kuning tua/kuning muda ketika berada dalam suasana asam (ditambahkan HNO3) dan terbentuk kompleks berwarna jingga/kuning ketika berada dalam suasana basa (ditambahkan NaOH). (Poedjiadi 2007) Fungsi penambahan HNO3 adalah sebagai penyebab terjadinya reaksi nitrasi karena inti benzena dari asam amino akan bereaksi dengan HNO3 dan menghasilkan campuran berwarna kuning. (Girindra 1986)
Gambar. Asam Amino Mengandung Inti Benzena (Fidanci,2013)
Hasil percobaan menunjukkan, larutan protein yang menghasilkan reaksi positif terhadap uji ini adalah kasein 0,1%pepton 0,1% gelatin 0,1% dan fenol 0,1% Hal ini menunjukkan bahwa di dalam ketiga zat uji tersebut terdapat asam amino yang mengandung inti benzena, yaitu tirosin, fenilalanin, atau triptofan.
Uji Millon
Uji Millon digunakan untuk mengidentifikasi protein yang mengandung tirosin dalam suatu sampel yang ditandai dengan terbentuknya kompleks berwarna merah pada sampel protein. Tirosin merupakan asam amino yang mengandung gugus fenol pada rantai samping-nya (gugus R-nya). Pereaksi millon mengandung merkuri dan ion merkuro dalam asam nitrit dan asam nitrat. Gugus fenol pada tirosin ini akan ternitrasi membentuk garam merkuri dengan pereaksi millon yang akan membentuk kompleks berwarna merah. (Poedjiadi 2007) Uji ini dilakukan pada sampel, gelatin, kasein, pepton, dan urea dengan konsentrasi 0,1%.
Gambar. Reaksi Uji Millon (Annonymous,2012)
Hasil percobaan yang kami lakukan reagen yang positif adalah kasein 0,1% dengan menghasilkan warna kuning merahan, sedangkan untuk gelatin 0,1% , pepton 0,1% dan urea 0,1 % berwarna putih yang berarti negatif. Hal ini sesuai dengan pendapat sedangkan menurut Sajuthi Dondin et.al. (2010) bahwa kasein merupakan protein yang paling banyak mengandung asam amino tirosin.
Gambar. Asam Amino Tirosin(Annonymous,2012)Tirosin merupakan gugus R dari asam amino polar yang larut dalam air atau lebih hidrofilik dibandingkan dengan asam amino nonpolar, karena golongan ini mengandung gugus fungsional yang mengikat ikatan hydrogen dengan air. Bentuk yang
Gambar. Asam Amino Tirosin
(Annonymous,2012)
umum adalah L-tirosin (S -tirosin), yang juga ditemukan dalam tiga isomer struktur: para, meta,dan orto (Lehninger 1982). Tirosin dalam bentuk tirosina, memiliki peran kunci dalampengaktifan beberapaenzim tertentu melalui proses fosforilasi (membentuk fosfotirosina) pada transduksi signal. Bagi manusia, tirosina merupakan prekursor hormon tiroksin dan triiodotironin yang dibentuk dikelenjar tiroid, pigmen kulit melanin, dan dopamin, norepinefrin dan epinefrin (Winarno FG 2004).
Uji Biuret
Biuret adalah senyawa dengan dua ikatan peptida yang terbentuk pada pemanasan dua molekul urea. Uji biuret digunakan untuk mengetahui adanya ikatan peptida pada sampel protein. Komposisi dari reagen ini adalah senyawa kompleks yang mengandung unsur karbon (C), hidrogen (H), oksigen (O), dan nitrogen (N) dan merupakan hasil reaksi antara dua senyawa urea (CO(NH2)2). Dalam suasana basa (penambahan NaOH), ion Cu2+ yang berasal dari pereaksi biuret (CuSO4) akan bereaksi dengan gugus –CO dan – NH dari rantai peptida yang menyusun protein membentuk kompleks berwarna violet.
Gambar. Reaksi Uji Biuret
Pada Uji Biuret hanya larutan gelatin yang positif mengandung peptida. Karena pada larutan gelatin menunjukkan warna violet dengan CuSO4. Hal ini menunjukkan bahwa di dalam sampel tersebut terdapat ikatan peptida yang menggabungkan asam amino yang satu dengan yang lainnya. Sedangkan larutan kasein dan pepton negatif, tidak mengandung peptida. Hal ini ditunjukkan kedua larutan tersebut tidak menunjukkan warna violet. Larutan kasein menunjukkan warna biru dikarenakan pengaruh dari larutan CuSO4 yang berlebih.
Simpulan
Berdasarkan hasil uji yang sudah telah dilakukan, diketahui bahwa protein merupakan bentuk polimer dari asam amino. Asam amino tersebut memeliki 3 komponen penting, yaitu gugus karboksil, gugus amin dan gugus bebas yang dapat berikatan dengan unsur lainnya sehingga menjadikan asam amino memeliki 20 jenis yang berbeda. Hal ini dapat dibuktikan dengan menggunakan uji Ninhidrin dan Uji Biuret. Dimana untuk Uji Ninhidrin untuk mengidentifikasi gugus bebas asam amino. Uji ini tidak spesifik untuk asam amino tertentu, sehingga uji ini dapat digunakan untuk uji umum protein, hasil positif jika terdapat warna ungu pada hasil percobaan, namun karena pada saat proses praktikum banyaknya larutan tidak sesuai dengan prosedur karena keterbatasan pereaksi dan bahan uji maka, hasilnya pun tidak maksimal sehingga hasil praktikum kami semua negatif. Sedangkan untuk Uji Biuret digunakna untuk mengidentifikasi ikatan peptida, hasil positif pada Gelatin 0,1% dengan warna ungu yang dihasilkan, hal ini berarti pada Gelatin 0,1% terdapat ikatan ikatan peptida.
Untuk mengidentifikasi jenis asam amino lainnya dapat menggunakan Uji Millon, Uji Xantoproteat, Uji Belerang dan Uji Hopkins. Uji Millon digunakan untuk mengidentifikasi protein yang mengandung tirosin dalam suatu sampel yang ditandai dengan terbentuknya kompleks berwarna merah, dalam uji tersebut Kasein 0,1% positif mengandung asam amino tirosin. Uji Xantoproteat merupakan uji untuk menunjukan adanya inti benzene pada asam amino. Asam amino yang mengandung inti benzene adalah Tirosin, Triptofan dan Fenilalanin dalam uji ini semua bahan uji menunjukkan hasil yang positif yaitu Gelatin 0,1%, Kasein 0,1% dan Pepton 0,1%. Uji Belerang adalah uji yang dilakukan untuk mengidentifikasi unsur sulfur pada asam amino, Sistein merupakan asam amino yang mengandung atom S pada molekulnya. Pada uji ini semua bahan uji menunjukkan hasil negatif Gelatin 0,1%, Kasein 0,1% dan Pepton 0,1%, karena menurut literatur protein yang mengandung sistein adalah Albumin, sedangkan protein albumin tidak kami ujikan pada percobaan ini. Uji hopkins cole merupakan uji kimia yang digunakan untuk menunjukkan adanya asam amino triptofan. Reaksi positif ditunjukkan dengan adanya cincin ungu pada bidang batas. Pepton 0,1% menunjukkan hasil positif pada uji ini.
Daftar Pustaka
Arbianto Purwo. 1993. Biokimia Konsep-Konsep Dasar. Bandung (ID): ITB Pr
Hart Harold et al. 2003. Kimia Organik. Suminar Setiati Achmadi, penerjemah; Jakarta (ID): Erlangga. Terjemahan dari: Organic Chemistry.
Robinson T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Padmawinata K, penerjemah. Bandung (ID): ITB Pr
Mendel. Friedman, John W. Finley. 1971.Jurnal of Agricultural and Food Chemistry. http://pubs.acs.org// [ 28 Februari 2015 ]
Mendel. Friedman, John W. Finley. 1971.Methods of Tryptopan Analysis . http://pubs.acs.org// [ 28 Februari 2015 ]
Annonymous, 2012. Biokimia Paper Asam Amino. http://ub.ac.id// [ 28 Februari 2015 ]
Kumala, Poppy. 1998.Kamus Kedokteran Dorland. ECG. Penerbit; Jakarta (ID):Buku Kedokteran.
Girindra A. 1986. Biokimia I . Jakarta: Gramedia.
Poedjiadi. 2007. Dasar-dasar Biokimia. Jakarta (ID): UI Press
Bintang Maria. 2010. Biokimia Teknik Penelitian. Jakarta (ID): Erlangga
Sajuthi Dondin.et al . 2010. Purifikasi dan Pencirian Enzim Protease Fibrinolitik dari Ekstrak Jamur Merang. Jurnal Makara Sains. 14 (2): 145-150
Winarno FG. 2004. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta (ID): GramediaLehninger. 1982.Dasar-Dasar Biokimia Jilid I . Maggy Thenawidjaja, penerjemah. Jakarta (ID): Erlangga.Terjemahan dari: Principles of Biochemistry.
Katili, Abubakar Sidik. 2009. Struktur dan Fungsi Protein Kolagen. Pelangi Ilmu. Vol.2. Hal.22 No. 5
http://www.g-excess.com/penggolongan-protein-dan-strukturnya.html [ 1 Maret 2015 ]
http://id.wikipedia.org/wiki/Protein[ 1 Maret 2015 ]
http://id.wikipedia.org/wiki/Asam_amino [ 1 Maret 2015 ]
