PRAKTIKUM VI PEMBUATAN MEDIA ALKALINE PEPTONE WATER 1 % Tanggal : 17 MARET 2012
I. Judul
Pembuatan media Alkaline Peptone Water 1%
II. Tuju Tujuan an
A. Tujuan Tujuan Inst Instruk ruksio sional nal Umum Umum Pada akhir praktikum ini mahasiswa diharapkan terampil membuat media yang digunakan untuk pertumbuhan awal bakteri Vibrio cholera memenuhi standar secara kualitas dan kuantitas. B. Tujuan Tujuan Instru Instruksi ksional onal Khusus Mahasiswa dapat membuat media APW 1 %
III.
Prinsip
Ditimbang, dilarutkan dan disterilisasi
IV.
Dasar Teori
Media merupakan campuran bahan tertentu dengan aquadest, yang memiliki beberapa macam fungsi. Fungsi tersebut antara lain untuk menumbuhkan mikroba, isolasi mikroba tertentu, memperbanyak jumlah, uji sensitivitas, uji biokimia, dan perhitungan jumlah kuman. Media Alkaline Peptone Water merupakan media pengaya pengaya untuk Vibrio untuk Vibrio cholera dan spesies vibrio dari makanan, air, kotoran, dan klinis. Media ini telah direkomendasikan oleh berbagai
penulis untuk meningkatkan pemulihan spesies vibrio dalam bahan tinja dan sampel lain. Peptone memberikan niteogen, vitamin, mineral dan asam amino esensial untuk pertumbuhan. Natrium klorida memasok elektrolit yang penting untuk transportasi dan keseimbangan osmotik dan mendorong pertumbuhan Vibrio cholerae. PH media mengarah ke alkalinitas media untuk menghambat sebagian besar flora yang tidak diinginkan serta dapat mengganggu kelangsungan hidup dari spesies vibrio utuh. Pertumbuhan pada tabung ditandai dengan kekeruhan dibandingkan dengan kontrol tanpa makulasi. Langkah-langkah tambahan yang direkomendasikan seperti plating kemedia selektif dan non selektif untuk isolasi dan morfologi, studi biokimia dan serologi untuk identifikasi. Bahan klinis yang mengandung sejumlah kecil spesies vibrio harus dimokulasi kedalam media pengaya sebelum plating kenedia selektif. Rentang pH pada media ini adalah 8,6-9,0 pada 250C. Komposisi dari Media Alkaline Peptone Water adalah
− Pancreatic digest of casein
10,0 g/l
− Peptone
10,0 g/l
− Sodium chloride
5,0 g/l
V. Alat dan Bahan
a. Alat 1. Neraca analitik 2. Gelas beaker 3. Spatel 4. Gelas ukur 5. Batang pengaduk
6. Erlenmeyer 7. Kompor listrik 8.
Autoclave
9. Aluminium foil 10. Kapas lemak 11. Tabung reaksi + rak 12. Api Bunsen 13. Bola hisap 14. Pipet ukur 10 ml 15. Benang pulung b. Bahan 1. Bubuk APW Merck Oxoid CM 1028 2. Aquadest 3. pH stick VI. Cara Kerja
1. Disiapkan alat dan bahan 2. Tabung reaksi diberi label (nama, jumlah, dan tanggal pembuatan) 3.
Ditimbang bubuk APW Oxoid CM 1028 sebanyak 1 gram pada neraca analitik
4. Dimasukkan ke dalam erlenmeyer 5. Ditambahakan 100 ml aquadest, diaduk hingga homogen
6. Ditutup dengan aluminium foil, dipanaskan hingga larut sempurna dengan kompor listrik 7. Diukur pH media dengan pH stick pada pH 8-9. Kemudian dituang 10 ml ke tabung reaksi 8.
Disterilisasi dengan autoclave pada suhu 1210C selama 15 menit
9. Media siap digunakan
VII.
Hasil Pengamatan
Media Alkaline Peptone Water 1% setelah dipanaskan pada kompor listrik media berwarna kuning pias dan setelah disterilisasi pada autoclave media berwarna bening.
Gambar media APW 1 % dalam erlenmeyer
Gambar media APW 1 % dalam tabung reaksi
VIII. Pembahasan
Media Alkaline Peptone Water merupakan media enrichment exclusive. Media ini tergolong media Enrichment (pengaya) karena media ini digunakan untuk pengayaan spesies Vibrio (Vibrio cholera). Media ini bersifat ekslusif karena menekan pertumbuhan mikroba/bakteri yang bersifat asam. Berdasarkan fungsinya media ini untuk spesies Vibrio dari sampel makanan, air dan klinis. Media ini diperuntukkan bagi bakteri yang bersifat basa yaitu dapat tumbuh pada media dengan suasana alkali/basa.
Pada praktikum kali ini, untuk pembuatan 100 ml media Alkaline Peptone Water 1% diperlukan bahan : Takaran 30 g/l Untuk 1 % = 10 g/l
X
= 10 x 100 gram / L 1000
X
= 1gram
Jadi, bubuk Alakline Peptone Water OXOID CM1028 yang ditimbang sebanyak 1 gram. Berdasarkan komposisinya media Alkaline Peptone Water tidak mengandung agar dalam penyusunnya. Hal ini menunjukkan media APW tergolong media cair yaitu media yang tidak mengandung pemadat. Media APW 1 % memiliki pH 9. Berdasarkan nilai pH tersebut media ini bersifat basa ( alkaline).Kebasaan ini mendukung pertumbuhan bakteri Vibrio cholera yang merupakan bakteri yang tumbuh dengan baik pada pH di atas 8. Kebasaan media APW ini juga berfungsi menekan atau menghambat pertumbuhan bakteri yang bersifat asam. Pembuatan media APW 1 % memerlukan proses sterilisasi. Sterilisasi ini
bertujuan untuk mensterilkan media dari mikroba-mikroba yang
dapat mengganggu
pertumbuhan mikroba. Sterilisasi dilakukan pada suhu 1210C selama 15 menit.
IX. Kesimpulan 1.
Secara visual warna media setelah dipanaskan berwarna kuning pias dan setelah disterilisasi berwarna bening.
2.
Media Alkaline Peptone Water 1% merupakan Enrichment Exclusive Media untuk Vibrio cholerae dan spesies Vibrio
3.
Media Alkaline Peptone Water 1% merupakan media cair
4.
Pada proses pembuatannya media disterilisasi pada suhu 1210C selama 15 menit
