INTRODUCCIÓN
En el prese presente nte labor laborat ator orio io abor abordar darem emos os dos dos temas temas funda fundame menta ntale less para para el curso curso de
Microbiología:
MICROSCOPIO
COMPUESTO
Y
TINCION
GRAM
o
COLORACIÓN DE BACTERIAS. El uso adecuado de un microscopio es una de las destrezas más importantes que debe aprender un estudiante microbiología. Los microscopios se desarrollaron a finales del siglo XVII y hoy en día, continúan siendo importantes para la identificación de hongos y algunos otros microorganismos. Es por eso que los estudiantes debemos aprender como utilizarlos y cuidarlos adecuadamente.Y en cuanto al tema de Tinción de Bacterias, definiremos el uso de colorantes, colorantes, del método Gram, Gram, y utilizando utilizando las muestras hechas en la semana anterior con los medios de cultivo, hallaremos los tipos de Bacteria y que Bacterias son específicamente.
OBJETIVOS MICROSCOPIO COMPUESTO
•
Manejar correctamente el microscopio conociendo la función de cada parte del microscopio.
•
Conocer, mediante la observación de las muestras, cual es el objetivo apropiado para observarlas (1Ox; 43x; 97x).
• •
Enseñar el cuidado y mantenimiento apropiado de los microscopios. Aprender los pasos de un adecuado manejo del enfoque y observación de muestras con el microscopio.
TINCIÓN DE LAS BACTERIAS (Método Gram)
•
Mediante este método podemos teñir las bacterias, para su mejor descripción
•
Determinación de bacterias Gram (+) ó Gram (-) •
El método de tinción de bacterias sirve para diferenciar entre distintas formas de microorganismos.
•
Podemos usar amplificaciones mayores.
FUNDAMENTO TEORICO MICROSCOPIO COMPUESTO Un microscopio compuesto tiene más de un lente objetivo. Los microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en láminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imágenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio óptico común está conformado por tres sistemas:
* El sistema mecánico está constituido por una palanca que sirve para sostener, elevar y detener los instrumentos a observar. * El sistema de iluminación comprende un conjunto de instrumentos, dispuestas de tal manera que producen las ranuras de luz. * El sistema óptico comprende las partes del microscopio que permiten un aumento de los objetos que se pretenden observar mediante filtros llamados "de antigel subsecuente". Sabemos que existen dos tipos de microscópicos: Simple y Compuesto.
MICROSCOPIO SIMPLE Consiste en una lente o cristal de aumento montado en una armazón graduable provisto de un soporte para la conveniente colocación del objeto y de un espejo que refleja la luz.
MICROSCOPIO COMPUESTO Se diferencia del simple por que consta de dos juegos de lentes, uno conocido como objetivo, y el otro por ocular; montado en un tubo (como observaremos a continuación en la figura siguiente). Podemos conseguir un enfoque preciso con la ayuda de un tornillo micrométrico. Los microscopios compuestos dan un aumento mayor que los simples; y son necesarios para ver y examinar objetos tan minúsculos como las bacterias. Un microscopio compuesto se divide en dos partes: Mecánica y óptica. A continuación veremos cada una de las partes.
PARTE MECÁNICA Principales componentes de los microscopios, descripción general y usos
Componente
Descripción
Parte de metal o plástico sobre la cual descansa el resto de las partes del microscopio. Columna en forma de “C” que se proyecta de la base y que sostiene a Brazo la platina y a los componentes ópticos. Plataforma plana unida a la parte inferior del brazo sobre la cual se Platina colocan los portaobjetos o muestras a observar. Manija debajo de la abertura de la platina que consiste de un grupo de Cierre del Diafragma o piezas de metal a manera de obturador que regula la cantidad de luz Condensador que atraviesa al portaobjetos colocado en la platina. No está presente en todos los microscopios – colecta los rayos de luz Condensador del iluminador y los enfoca – incrementa la resolución, aumenta el contraste de la muestra. Botón de ajuste del Sube y baja el condensador. condensador knob Parte cilíndrica/vertical unida en la parte superior del brazo que Cabezal sostiene el sistema óptico. Plato giratorio que sostiene los objetivos (lentes), unido a la parte Revólver inferior del cabezal, puede dársele la vuelta para cambiar los lentes (objetivos). Ajuste del Botón grande que mueve el cabezal hacia arriba y abajo para observar macrométrico la muestra en el enfoque macrométrico. Botón pequeño que mueve el cabezal a distancias más cortas, de Ajuste del manera más lenta y es usado para observar a la muestra con un micrométrico enfoque más nítido. Iluminador, Fuente Controla la cantidad de luz que se transfiere a la muestra. lumínica Tubo de metal corto, removible que contiene lentes ubicados en la Oculares parte superior del tubo, generalmente de 10X, 43X, 97X de aumento. Base
Principales componentes de los microscopios, descripción general y usos
Componente Ajuste de Dioptría
Descripción
Ajuste usado para compensar la diferencia de observación de los ojos. Tubos de metales pequeños, atornillados dentro del revólver que Objetivos (lentes) incrementa el aumento de la muestra (a menudo se refieren sólo como objetivos). Espejo Usado para reflejar la luz a través de la muestra. Usado para ajustar el espejo para que refleje la luz a través de la Eje giratorio del espejo muestra. También se les refiere como lentes suplementarios, pueden ser Lentes auxiliares encontrados en microscopios de disección en la base de la cubierta de los objetivos o cabezal.
TINCIÓN DE BACTERIAS DEFINICIÓN DE COLORANTES O TINTES Un tinte se define como una sustancia o compuesto orgánico que tienen los grupos cromóforo y auxocromo ligados al núcleo bencénico.
Existen varios métodos de tinción pero estos están agrupados en tres tipos de tinción específicos, los cuales pasaremos a mencionar.
Los tipos de tinción son: A.
B.
C.
Tinción simple:
Tinción compuesta:
Tinción de estructuras:
1.
Colorantes básicos
2.
Colorantes ácidos
3.
Colorantes indiferentes
1.
Tinción de Gram
2.
Tinción de ácidos resistentes
1.
Feulgen (para material nuclear)
2.
Tinción de endósporas
3.
Tinción de pared celular
4.
Tinción de flágelos
5.
Tinción de cápsulas
El método que usaremos para estudiar para la descripción de bacterias es el método de Tinción de Gram.
TINCIÓN DE GRAM La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva
a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.
Bacterias Clostridium perfringens (Gram positivas).
Bacterias Escherichia coli (Gram negativas) vistas al microscopio tras ser teñidas con la tinción de Gram.
Bacterias Gram positivas de Bacillus anthracis (bacilos morados) que producen una enfermedad llamada Carbunco, encontrados en una muestra liquido cerebroespinal. Si
hubiera una especia de bacteria Gram negativa apareceria de color rosa. El resto son leucocitos atacando la infección.
PARTE EXPERIMENTAL Materiales de vidrio: -
Portaobjetos
-
Tubo de ensayo
Medios de cultivo: -
Agar nutritivo
-
Caldo nutritivo
Colorantes: -
Cristal violeta (azul o morado)
-
Lugol
-
Safranina (rojo)
-
Alcohol – Acetona
Equipo: -
Mechero
-
Inoculador
-
Microscopio
PROCEDIMIENTO
1.
Secamos el portaobjetos pasando por el fuego 2.
Preparamos el frotis de Agar nutritivo y Caldo nutritivo.
3.
Dejamos secar al ambiente.
4.
Fijamos al calor ( 3 veces)
5.
Teñimos con cristal violeta por 20 segundos.
6.
Lavamos con agua por 2 segundos.
7.
Cubrimos el frotis con lugol durante 1 minuto.
8.
Decoloramos con agua por 2 segundos.
9.
Contracolorear con safranina y dejar que se tiña por 20 segundos.
10.
Lavamos con agua y lo secamos con papel filtro.
11.
Examinamos en el Microscopio con objetivo de 97X luego de secarse.
MICROSCOPIO COMPUESTO
CONCLUSIONES
-
Pudimos
determinar
el
tipo de Bacteria presente en las muestras que preparamos. -
Los resultados que se obtuvimos en su mayoria de la
coloración Gram fueron
Streptococos. -
Conluimos que es necesario seguir el procedimiento con el debido cuidado pues al inicio no logramos los resultados esperados.
RECOMENDACIONES -
Es necesario realizar correcta y minuciosamente los procedimientos del frotis y la fijación para obtener los resultados correctos.
-
Es recomendable tener en cuenta saber el manejo del microscopio correctamente para no dañar el microscopio.
-
Se recomienda seguir el procedimiento minuciosamente, pues si no se corre el riesgo de no obtener ningún resultado.
CUESTIONARIO 1. Establecer la diferencia entre poder de resolución y abertura numérica.
-
Resulta evidente que el poder de resolución de un Microscopio óptico está restringido por los valores limitados de la abertura numérica y la longitud de onda de la luz visible.
2. Completar: Partes del Microscopio Ocular
Funcion(es) lFunción del ocular es presentar al ojo dicha imagen de la forma más legible posible, agrandándola lo que sea necesario
Objetivo
Función principal de un cualquier objetivo es obtener una imagen del objeto observado lo más nítida y luminosa posible
Condensador
Es la de concentrar la luz generada por la fuente de iluminación hacia la preparación
Diafragma de Iris
Es limitar el haz de rayos que atraviesa el sistema de lentes eliminando los rayos demasiado desviados
Tornillo Macrometrico
Sirve para alejar o acercar el tubo y la platina. Se obtiene la imagen de la muestra (enfoque o ajuste grueso). Sirve para dar claridad a la imagen. Se logra el ajuste fino
Tornillo Micrometrico
-
3. Hacer una tabla en relación a enfermedades microbianas que son transmitidas por el aire, agua y alimento.
ENFERMEDAD Salmonelosis
SÍNTOMAS PRINCIPALES
ALIMENTOS TÍPICOS
MODO DE TRANSMISIÓN
Diarrea, dolor
Huevos, carnes y
Comienzan entre las 8 y 48 horas
abdominal, dolor de
productos lácteos sin
después
de
comer
el
alimento
cabeza, fiebre y náuseas pasteurizar.
contaminado y dura entre 1 y 8 días.
Dolor de cabeza, diarrea Leche sin pasteurizar,
Comienzan entre 3 y 9 días después de
y dolor abdominal
vegetales crecidos con
ingerir el alimento contaminado, dura de
Listeria
severo. Leche sin pasteurizar y
estiércol, etc. Fiebre repentina,
2 a 9 días si no hay complicaciones. Comienza dentro de las 24 horas
monocytogenes
quesos blandos, carnes
escalofríos, dolor de
después
de ave, paté de carne,
espalda, dolor
contaminado. Dura entre 2 y 7 días.
ensaladas, etc.
abdominal y diarrea.
Escherichia coli
de
comer
el
alimento
-
4. Responder a) ¿Existen diferencias químicas entre las paredes celulares de las Bacterias gram positivas y gram negativas?
-
Las bacterias gram negativas contienen un porcentaje más alto de lípidos que las bacterias gram positivas. Las paredes celulares de las bacterias gram negativas son también más delgadas que las de las gram positivas; las paredes de las bacterias gram negativas tienen una cantidad mucho menor de peptido-glucano con ligaduras cruzadas menos extensas que en las paredes de las bacterias gram positivas.
b) Afecta la edad del cultivo a la reacción de Tinción de Gram.
-
La edad del cultivo afecta a la reacción de tinción Gram pues cultivos viejos de algunas bacterias gram positivas pierden la facultad de retener el cristal violeta y se tiñen con la safranina.
5. Hacer una lista de Bacterias Gram positivas y Gram negativas con las enfermedades que provocan.
GRAM POSITIVAS
GRAM NEGATIVAS
Bacillus subtilis Clostridium tetani Corynebacterium diphtheriae Lactobacillus acidophilus Streptococcus pyogenes
Achromobacter Brucella ovis Klebsiella pneumoniae Escherichia coli Salmonella typhi
-
BIBLIOGRAFÍA
1. Wesley A. Volk
Microbiología Basica Ed. Harlon – Año 1996
México (sexta edición)
2. A. J. Salle
Bacteriología Ed. Gustavo Gili – Año 1960 Barcelona (cuarta edición)
3. Harry Seeley
Microbiología en Acción Ed. Blume – Año 1973
ANEXOS
Estafilococos
Muestra Nº 01
Muestra Nº 02
