Ensayo de Biuret

Ensayo de Biuret: Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4H4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

Consiste en tratar una proteína o péptido con Cu

++

en medio alcalino, produciéndose una ++

coloración violácea por form ación de un complejo de coordinación entre el Cu

y los pares

electrónicos libres de los nitrógenos de los grupos amino de la unión peptídica. Son necesarias por  lo menos dos uniones peptídicas para que tenga lugar la reacción. La reacción del biuret no es una reacción específica para proteínas. Eso hace que un resultado positivo con este reactivo deba ser cuidadosamente evaluado para descartar los resultados falsos positivos Un resultado negativo de la reacción del biuret sobre una muestra problema no necesariamente indica la ausencia de proteínas, ya que puede ocurrir a) que no existan proteínas o péptidos en la muestra (ni tampoco otras sustancias no proteicas biuret positivas), b) que existan una o más m ás sustancias interferentes en la muestra que impidan que se produzca la reacción (lo que daría lugar  a un resultado falso negativo). Esto puede descartarse (o evitarse) si conozco de antemano la composición aproximada de la muestra. Por ejemplo, si deseo determinar el contenido de péptidos + generados por una reacción de hidrólisis ácida, los H del medio interferirán con la reacción del ++ biuret, ya que ésta necesita de un medio alcalino para la formación del complejo con Cu . En este caso la interferencia puede eliminarse alcalinizando el medio antes de realizar el ensayo (en caso contrario obtendría un falso negativo como resultado) y c) Que existan péptidos, p éptidos, pero a una concentración inferior al límite de sensibilidad del método. Todo método perm ite determinar la presencia de un compuesto sólo si la concentración del mismo es superior a cierto valor. Existen métodos mucho mas sensibles que el biuret (ver mas abajo).

Figura 1: Reacción de Biuret.

Ensayo de Xantroproteíco:

Esta reacción se usa para detectar la presencia de proteínas solubles en una solución. Se realiza mediante el uso de HNO3 concentrado que, en presencia de proteínas o aminoácidos con restos aromáticos torna la solución de un color amarillo oscuro.

Los anillos fenilo que contengan un grupo activante pueden ser nitrados produciendo un compuesto Amarillo. La producción de un producto coloreado Amarillo al añadir ácido nítrico es una prueba para la presencia de tirosina o triptófano en una proteína. La adición de base fuerte hace que el color se torne más oscuro hacia anaranjado. L as manchas amarillas en la piel causadas por ácido nítrico son el resultado de la reacción xantoproteíca. La reaccion xantoproteica se puede considerar como una sustitucion electrofilica aromatica de los residuos de tirosina de las proteinas por el acido nitrico dando un compuesto coloreado amarillo a pH acido.