Informe de Laboratorio 151004_6

LABORATORIO BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR

EDER REMOLINA CASTILLO CÓDIGO 91516370 CARLOS ARTURO DELGADO BAREÑO CÓDIGO 1097665681 LYDA YANIRA VENEGAS AYALA CÓDIGO 52811020 GRUPO: 151009_6

TUTORA DIANA CAROLINA PARRA

ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD S ALUD – ECISA MARZO 06 DE 2017 1 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular

INFORME DE LABORATORIO BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR OBJETIVOS La guía de prácticas del curso de Biología Celular y Molecular tiene como objetivo dar herramientas al estudiante para comprender las propiedades, estructura, funciones, orgánulos celulares y las interacciones bioquímicas, genéticas, con el ambiente y su ciclo vital desarrollando su pensamiento científico y crítico respecto a las relaciones que se dan en la Biología celular y Molecular.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS 

Conocer y poner en práctica práctica el conjunto de normas que se deben seguir para evitar poner en riesgo la integridad física o vital de las personas reunidas en el laboratorio.



Concientizar la importancia del uso adecuado de elementos de protección personal



Conocer la forma correcta de usar los contenedores de desechos y el guardián



Conocer los riesgos a los que se expone al momento de trabajar con algunos agentes patógenos e infecciosos como hongos y sangre en el laboratorio.



Reconocer los equipos que se utilizan en el laboratorio y su función



Reconocer la importancia de limpiar el área de trabajo antes y después de trabajar en ella.



Conocer el material que se emplea para el trabajo en el laboratorio y la forma correcta de usarlo



Conocer las partes del microscopio y la función de cada una



Aprender a manipular correctamente el microscopio



Aprender a realizar un montaje húmedo para las observaciones en el microscopio



Aprender a calcular el diámetro de visión en el microscopio durante el trabajo con el papel milimetrado

2 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular

INFORME DE LABORATORIO BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR OBJETIVOS La guía de prácticas del curso de Biología Celular y Molecular tiene como objetivo dar herramientas al estudiante para comprender las propiedades, estructura, funciones, orgánulos celulares y las interacciones bioquímicas, genéticas, con el ambiente y su ciclo vital desarrollando su pensamiento científico y crítico respecto a las relaciones que se dan en la Biología celular y Molecular.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS 

Conocer y poner en práctica práctica el conjunto de normas que se deben seguir para evitar poner en riesgo la integridad física o vital de las personas reunidas en el laboratorio.



Concientizar la importancia del uso adecuado de elementos de protección personal



Conocer la forma correcta de usar los contenedores de desechos y el guardián

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Conocer los riesgos a los que se expone al momento de trabajar con algunos agentes patógenos e infecciosos como hongos y sangre en el laboratorio.

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Reconocer los equipos que se utilizan en el laboratorio y su función

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Reconocer la importancia de limpiar el área de trabajo antes y después de trabajar en ella.

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Conocer el material que se emplea para el trabajo en el laboratorio y la forma correcta de usarlo

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Conocer las partes del microscopio y la función de cada una



Aprender a manipular correctamente el microscopio



Aprender a realizar un montaje húmedo para las observaciones en el microscopio



Aprender a calcular el diámetro de visión en el microscopio durante el trabajo con el papel milimetrado




Observar los procesos de isotónicos, hipotónicos e hipertónicos en células sanguíneas y vegetales usando la elodea



Observar los cambios que sufren las células durante su proceso reproductivo (meiosis- mitosis)


ÍNDICE Práctica No. 1: Bioseguridad Práctica No. 2: Microscopía Práctica No. 3: Célula: Crenación, Hemólisis, Plasmólisis y Turgencia. Práctica No. 4: Permeabilidad selectiva del eritrocito. Práctica No. 5: Tejidos vegetales y Aislamiento de cloroplastos. Práctica No. 6: Acción de lisosomas. Práctica No. 7: Mitosis y Meiosis. Bibliografía


DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD PRÁCTICA No. 1 BIOSEGURIDAD Introducción El significado de la palabra bioseguridad se entiende por sus componentes: “bio” de bios (griego) que significa vida, y seguridad que se refiere a la calidad de ser seguro, libre de daño, riesgo o peligro. Bioseguridad en el Laboratorio de Microbiología es el conjunto de normas y procedimientos que debe seguirse, para conservar la salud y seguridad del personal que labora en el laboratorio y de la comunidad frente a los riesgos de infección para evitar contaminarse y contaminar a los demás con agentes potencialmente patógenos. Los microorganismos pueden entrar al huésped por diferentes mecanismos: contacto directo con la sustancia infectada (saliva, sangre, pus, lesión); salpicaduras de sangre o saliva, secreciones nasofaríngeas sobre la piel o mucosa sana o erosionada, contacto directo con objetos contaminados y, por aerosoles contaminados.

Objetivo Se socializó la información descrita a continuación y el uso adecuado de los elementos de protección personal, se verificó que los integrantes del grupo portaran la bata blanca y se dio a conocer su importancia ya que es ella la que brinda protección evitando que la ropa se contamine y contamine a otras personas fuera del laboratorio, a su vez, permite identificar si en algún momento se tuvo contacto con algún tipo de reactivo o fluido que ponga en riesgo la salud. El lavado de manos es esencial antes y después de cada práctica y debe hacerse de la forma correcta para que estén seguras y libres de contaminación. Es indispensable limpiar el área de trabajo antes y después de cada práctica, ya que es imposible conocer qué tipo de sustancias, fluidos o agentes se usaron durante la actividad anterior en el laboratorio. Es esencial aprender a identificar y separar el tipo de residuo que va en cada recipiente de desechos ubicado en el laboratorio, se da a conocer el guardián, recipiente adicional donde se almacenan para desechar todo tipo de elementos corto-punzantes y/o que han tenido contacto con fluidos como sangre.

Material que se llevó al laboratorio Elementos de protección personal Bata Gorro Guantes

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Tapabocas Gafas de bioseguridad Toallas desechables Jabón antiséptico

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Material que proporcionó en el Laboratorio Alcohol Antiséptico

Procedimiento: 1. Normas de Bioseguridad 

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Se Utilizó la "bata de Laboratorio" debidamente abotonada y limpia y se retiró antes de salir del laboratorio. Se usó guantes para manipular muestras y cultivos de microorganismos, evitando contaminar el área de trabajo y los implementos personales (esfero, libros, apuntes); descartándolos en la caneca roja. Se dio uso adecuado a los guantes. Se recibió información de cómo utilizar mascarillas de respiración, la cual debe encajar cómoda y adecuadamente sobre el puente de la nariz para evitar el empañamiento de las gafas protectoras. Esta protege sobre todo la mucosa nasal que es más susceptible a infecciones que la bucal, debido a que esta última tiene mayor cantidad de flora normal que la protege contra infecciones. Se recibió información de cómo utilizar anteojos de protección para evitar lesiones oculares causadas por partículas proyectadas hacia el rostro del operador, a la vez que protege contra infecciones considerando que muchos gérmenes de la flora oral normal son patógenos oportunistas. No se permitió comer, beber, fumar ni colocar otros objetos en la boca, mientras se estuvo en el Laboratorio. Se mantuvo el Laboratorio limpio y aseado. Se descontaminaron las áreas de trabajo antes de iniciar la práctica de laboratorio y una vez terminada la práctica. Se descartó todo el material contaminado en los recipientes destinados para ello.








El lavado de manos se hizo al empezar el laboratorio y antes de abandonarlo Se conocieron las reglas del uso y cuidado de todos los equipos. Se leyeron y se entendieron los pasos de cada procedimiento antes de proceder a realizarlo.

2. Desinfección del área de Trabajo. Se limpió el área de trabajo con Alcohol Antiséptico antes y después de cada práctica

3. Manejo de elementos de protección personal. 4. Manejo de residuos. Residuos infecciosos o de riesgo biológico Muchas enfermedades infecciosas se propagan a través de la sangre y otros fluidos corporales, de manera que es importante tomar las precauciones necesarias para no exponerse a ellas innecesariamente. Los fluidos corporales incluyen la orina, heces, sangre, saliva, leche materna, secreciones nasales y oculares, y secreciones segregadas por heridas o tejidos. La segregación en la fuente es la base fundamental de la adecuada gestión de residuos y consiste en la clasificación y disposición de los residuos en las canecas y contenedores adecuados, de acuerdo con el código de color adoptado por la legislación vigente. Los residuos se deben depositar en los recipientes adecuados, los cuales deben ser del color correspondiente a la clase de residuos que se va a depositar en ellos y deben estar marcados e identificados de acuerdo con la siguiente tabla: 7 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular

5. Uso de Reactivos. Se recibió información de que todos los reactivos que se utilizan en las operaciones y reacciones en el laboratorio son potencialmente peligrosos por los que, para evitar accidentes, deberán trabajarse con cautela. Numerosas sustancias orgánicas e inorgánicas son corrosivas o se absorben fácilmente por la piel, produciendo intoxicaciones o dermatitis, por lo que se ha de evitar su contacto directo; si este ocurriera, deberá informar inmediatamente al docente Para la manipulación de los reactivos se debe tener en cuenta:  

 

Los reactivos del laboratorio deben permanecer en su lugar respectivo. Si necesita de un reactivo tome la cantidad que necesite del envase sin introducir sustancias o utilizar las espátulas, que no hayan sido previamente limpiadas, dentro del mismo. Al finalizar coloque el envase en su sitio respectivo. No devuelva material que ha sido sacado del envase al mismo, si no está seguro de que no se encuentra contaminado o mezclado con otras sustancias

6. Uso Equipos. Para la manipulación de los equipos se debe tener en cuenta: 



Los equipos deben ser mantenidos completamente limpios después de haber sido utilizados. Si no sabe cómo opera un equipo, solicite el catálogo de funcionamiento o que se le enseñe a operarlo.


Equipos del Laboratorio:

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Incubadora: Equipo que permite depositar cajas de Petri y hacer cultivos de microorganismos y cultivos celulares que necesitan calor.



Estufa: Equipo que sirve para esterilizar el material del laboratorio resistente al calor.



Baño María: Equipo que permite calentar sustancias sobre una cama de agua.



Balanza: Equipo que permite medir la cantidad exacta de sólidos, no se debe mover de su ubicación puesto que ha sido calibrada exactamente en ese lugar. Se debe encender cinco minutos antes de usarla. 9 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular



Agitador : Equipo que permite mezclar líquidos y para ello se debe poner dentro del recipiente una cápsula que permite que gire.



Centrífuga: Equipo que permite introducir tubos de ensayo, permite graduar las revoluciones y el tiempo que debe permanecer las muestras dentro de ella.



Microscopio: Equipo que aumenta el tamaño de un objeto de forma que pueda ser observado por el ojo humano.

Cuidados con los equipos: Microscopio: Cuando hay necesidad de movilizar el microscopio de un sitio a otro, éste debe sostenerse en posición vertical, y tomarlo por el brazo y por la base, que son las partes más sólidas del equipo.

Balanza: 

Verificar siempre la nivelación de la balanza.



Limpie la balanza de derrames y salpicaduras, estando apagada.



Al encender la balanza déjela estabilizar por 10 minutos como mínimo.

Utilice siempre un recipiente para pesar, no ubique las sustancias o



especímenes directamente en el platillo. 

Al pesar mantener las puertas cerradas para mejorar la estabilidad.



No pese sustancias corrosivas, calientes o que puedan degradar el interior de la balanza.



No mover bajo ninguna circunstancia las balanzas de su posición.



Revise la capacidad máxima del equipo.

Espectrofotómetro: Estos equipos son muy delicados por lo cual es conveniente leer las instrucciones de uso antes de ser utilizados. 

Permitir que el instrumento se caliente antes de hacer algún procedimiento.



Verificar el 0 y el 100% T cada vez que se vaya a hacer lecturas y cuando varíe la longitud de onda. 10 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular





Asegurarse de que las cubetas estén limpias y libres de ralladuras y huellas digitales. Esto debe hacerse cada vez que va a usarse. Mantener cerrada la tapa del porta-muestras durante el proceso de medición, para asegurar una lectura adecuada.

7. Uso Material de Vidrio. Recomendaciones 

El material de vidrio se debe dejar limpio.



Cualquiera que sea el sistema que se utilice se debe enjuagar muy bien el material de vidrio con agua corriente varias veces y finalmente con agua destilada.



El material de vidrio graduado, como probeta, bureta, pipetas, matraz aforado, nunca debe ser sometido a calentamiento.



Se pude calentar el material de contención, como: vaso de precipitado, balón, tubos de ensayo, erlenmeyer.



Descartar el material de vidrio roto en el contenedor dispuesto para tal fin.

Uso de Material de vidrio Se recibió información del siguiente material existente en el laboratorio: 

Embudo: Puede ser de vidrio el cual se usa para filtrar una solución empleando aparte de un filtro de papel doblado en cuatro partes y abierto en la primera de ellas para depositar el líquido; o de plástico, para cosas más simples de acuerdo a su practicidad.



Tubo de ensayo: Permite la mezclar reactivos con soluciones, es resistente al calor, la forma correcta de usarlo sobre un mechero es en posición inclinada, sujetándolo por medio de una pinza de madera y haciendo movimientos de rotación sobre el calor. Existen tubos de ensayo de diámetros variados; para usarlos en la centrífuga se debe tener en cuenta que el material del que está hecho sea plástico y traiga una tapa, no es 11 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular

recomendable para depositar sangre ya que se quedaría adherida a sus paredes.



Gradilla: Plataforma de plástico o de madera donde se deposita los tubos de ensayo.



Cápsulas: Son en porcelana, se utilizan para calentar sustancias en la estufa hasta obtener el reactivo puro.



Mortero: Se usa para macerar o mezclar sustancias en el laboratorio.



Vasos de Precipitado: Sirve para preparar y calentar soluciones sobre un trípode con malla de asbesto.



Probeta: Es una pieza volumétrica por lo tanto es la más exacta, el valor aforado debe estar siempre sobre la línea llamada menisco. Permite medir de forma estricta una solución; las hay de vidrio, plástico y se encuentran de diferentes volúmenes. No se debe preparar soluciones dentro de ella.



Vidrio de Reloj: Se usa para pesar en la balanza.



Pipeta: Permite tomar la solución y para ello se usa junto con una pieza llamada Pipeteador. No se debe dejar sobre el mesón sin ningún tipo de protección y se debe procurar que la punta esté libre de cualquier tipo de contaminación.



Agitador de Vidrio: Permite mezclar soluciones hasta que queden homogéneas. 12 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular



Termómetro: Se usa en los vasos de precipitado y su función es medir la temperatura.



Pipeta Pasteur : Permite tomar volúmenes pequeños y aplicar gotas.



Tubo de Centrífuga: Recipiente alargado de plástico con tapa y se usa para poner sustancias dentro de la centrífuga.



Frasco Lavador : Recipiente con una boquilla larga que debe permanecer siempre bien cerrado y permite lavar con agua estéril los recipientes del laboratorio.



Espátula: Se usa para sacar del recipiente reactivos sólidos.



Mechero de Bunsen: Se usa para dar calor a las soluciones y está conectado a la línea de gas natural. El material de vidrio graduado no se debe calentar.


Presentación de resultados Teniendo en cuenta la fórmula V1xC1=V2xC2; en una tabla presente diluciones al 0.5%, 1%, 1.5% y 5% de hipoclorito de sodio que tiene una concentración inicial de 10% indicando la concentración inicial, concentración final, volumen inicial de hipoclorito, volumen de agua y volumen final para cada dilución. HIPOCLORITO DE SODIO AL 0.5%

NaCIO al 0.5% = 10ml NaCIO + 200ml H2O

HIPOCLORITO DE SODIO AL 1%

HIPOCLORITO DE SODIO AL 1.5%

HIPOCLORITO DE SODIO AL 5%

NaCIO al 1% = 10ml NaCIO + 100ml H2O

NaCIO al 1.5% = 10ml NaCIO + 66.6ml H2O

NaCIO al 5% = 10ml NaCIO + 20ml H2O

Cuestionario: Defina que es Bioseguridad: la bioseguridad se integra por medidas y normas que tratan de preservar la seguridad del medio ambiente en general y de los trabajadores, pacientes y visitantes de algún lugar donde se utilizan elementos físicos, químicos o biológicos, sobre todo sangre y fluidos corporales que puedan provocar daño, por su carácter potencialmente infecciosos o contaminante. 1. ¿Cómo puede usted evitar en el laboratorio daños a su salud? Antes de entrar al laboratorio asegúrese de llevar puesta la bata para evitar manchas o daños en la ropa. Saber que procedimiento se va a desarrollar en la práctica, en el laboratorio. Utilizar siempre los elementos de protección personal como guantes, gorro y tapabocas. 2. Defina el concepto de Limpieza, contaminación, desinfección, descontaminación y esterilización -

El termino limpieza se emplea para denominar a todas aquellas acciones que permiten eliminar la suciedad de algo o alguien, la finalidad de la limpieza no es más que la eliminación total de aquellas bacterias o 14 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular

microorganismos que se encuentran en el cuerpo y en los diferentes entornos en donde se encuentren las personas. -

Descontaminación: Es la reducción de la cantidad de microorganismos con el fin de disminuir el riesgo de infección y carga bacteriana de los efluentes, es necesario que el material sea desinfectado en el lugar donde se utiliza, así para evitar que se adhieran restos de materia orgánica

-

Contaminación: Se denomina a la presencia en el ambiente de cualquier agente químico, físico o biológico nocivos para la salud o el bienestar de la población.

-

Desinfección: Es un proceso físico o químico que mata o inactiva agentes patógenos tales como bacterias, virus y protozoos impidiendo el crecimiento de microorganismos patógenos en fase vegetativa.

-

Esterilización: Eliminación o muerte de todos los microorganismos que contiene un objeto, superficie o sustancia, y que se encuentren acondicionados de tal forma que no puedan crecer nuevamente.


ACTIVIDAD PRÁCTICA No. 2 MICROSCOPÍA Introducción El microscopio es un instrumento que permite aumentar el tamaño de un objeto un número determinado de veces. Existen dos grandes tipos de microscopio: el microscopio óptico (que usa luz) y el microscopio electrónico (que usa electrones). El microscopio óptico fue el instrumento que llevó al descubrimiento de la célula, mientras que el microscopio electrónico, dado su enorme poder de resolución, permitió establecer una descripción detallada de las estructuras subcelulares (como por ejemplo los organelas celulares). El microscopio óptico funciona en base a lentes de vidrio convergentes, que como su nombre lo indica, provocan que los rayos de luz converjan en un punto, al cual se le llama foco. Al lograr que un número de rayos de luz que normalmente veríamos separados, enfoquen en nuestra retina, podemos interpretar esa imagen (que es una imagen virtual) como una ampliación de la imagen real. Su sistema óptico posee un lente condensador (que concentra la luz proveniente de la fuente), una serie de lentes objetivos (que recogen los rayos difractados por la muestra), con diferentes poderes de aumentos (usualmente 4x, 10x, 40x y 100x) y uno o dos lentes oculares (cerca de los ojos) que generalmente proporcionan un aumento de 10x. Los términos de aumento se expresan en x, de tal forma que un aumento de 10x (“diez por”) significa que una imagen está

aumentada 10 veces el tamaño original. El aumento total del microscopio es el producto de los aumentos del lente objetivo más el lente ocular.


Objetivo Comprender el funcionamiento del microscopio y reconocer los diferentes poderes del microscopio mediante diferentes montajes. 1. El procedimiento de microscopía comenzó identificando las partes del microscopio que se describen a continuación: o

Oculares, pueden ser de 10x o de 16x (veces de aumento), tiene dos juegos de lentes de los cuales un juego invierte la muestra y el otro aumenta su tamaño.

Porta-oculares

o

o

Tornillo ojo izquierdo, conocido también como graduador de Dioptrías para personas con defectos visuales.

o

Cabeza, es la parte que sostiene los porta-oculares y el tornillo de graduación.

o

Brazo, sirve para sostener con una mano el microscopio mientras se mueve, la otra mano debe ir debajo de la base.

o

Revolver, es la pieza giratoria que sostiene los objetivos. Estos pueden ser de 4x (anillo color rojo), 10x (anillo color amarillo), 40x (anillo color azul) y 100x (anillo color blanco) se llama objetivo de inmersión; para ello se usa con una gota de aceite sobre la muestra ya que permite una mayor refracción en la observación y se usa en montajes secos o permanentes.

o

Platina o carro mecánico, tiene una pinza que permite coger y sostener la muestra. Tiene dos tornillos ubicado uno encima de otro, el de arriba mueve la platina y el otro mueve la pinza.

o

Diafragma, controla la cantidad de luz y la lleva a un punto.

o

Tornillo macrométrico y micrométrico para desplazamientos grandes y dar enfoque a las observaciones respectivamente.

o

Fuente de Luz

o

Base, da soporte y estabilidad al microscopio.

o

Las observaciones se deben hacer bien sentados, con los brazos sobre el mesón de trabajo.


o

La intensidad de la luz se puede variar con una palanca que trae el condensador o en el botón que hay al lado del botón de encendido.

Material que se llevó al laboratorio para esta actividad Papel milimetrado, Hilos de colores, Recorte de periódico con la letra asimétrica, laminas portaobjetos, laminillas, elementos de protección personal.

Material que proporcionó el Laboratorio Planta acuática Elodea, Microscopio óptico. Lamina con extendido coloreada, Aceite de inmersión, Papel de Arroz o de óptica, Alcohol isopropílico.


Procedimiento: 1. Identificación de las partes del microscopio

2. Funciones del Microscopio Partes del microscopio Fuente de Luz Condensador Diafragma Platina y pinza

Objetivos Oculares Tornillo Macrométrico Tornillo Micrométrico Revolver

Función Foco que proyecta la luz hacia el condensador Sistema de lentes que concentran y dirigen la luz hacia un punto de la lámina portaobjetos. Regula la luz que llega al condensador Plataforma con una perforación donde se ubica y se sostiene por medio de una pinza las láminas portaobjetos. Permite desplazarla hacia adelante y atrás por medio de un sistema de cremalleras. Conjunto de lentes sostenido por el revolver que permite ampliar las imágenes Juego de lentes que amplían las imágenes. Se usa para desplazamientos grandes de la platina. Se usa para enfocar una imagen Sostiene y permite girar el juego de objetivos de 4x, 10x, 40x y el de inmersión. 19 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular

3. Se realizó el Montaje húmedo de la siguiente forma: Para dar inicio al montaje se siguieron los siguientes pasos: o

Se tomó una lámina portaobjetos

o

Se tomaron dos gotas de agua de la planta acuática Elodea y se ubicaron sobre la lámina.

o

Se tomó una laminilla cubreobjetos y se ubicó en posición oblicua en el borde de la lámina, permitiendo que cayera sin dejar burbujas en su interior.

o

Se limpió el exceso de líquido de la lámina con una toalla de papel.

o

Se encendió el microscopio.

o

Se verificó que el objetivo que posición fuera el de 4x (anillo amarillo)

o

La platina del microscopio debía estar en la parte de abajo antes del montaje.

o

Se ubicó la lámina sobre la platina y se sostuvo con la pinza.

o

Se subió la platina hasta el tope.

o

Se ajustaron los oculares

o

Se dio inicio a la exploración usando los tornillos macro y micrométrico.


4. Observación con el objetivo de inmersión 100X Procedimiento para montajes secos – Testículo de Ratón Para la observación de este montaje se usó el lente de inmersión (100x) junto con el aceite. o

Se giró el revolver hasta que el lente de 100 x y el de 40x deja el espacio libre en el centro para aplicar la gota de aceite.

o

Se subió el condensador hasta que la luz se concentró e indicó el punto donde se debe aplicar la gota.

o

Se ubicó la lámina micropreparada del testículo de ratón

o

Se ubicó el objetivo de inmersión 100x

o

Se subió la platina observando directamente hasta que la gota subió.

o

Al terminar la observación se limpió el objetivo con alcohol isopropílico.


5. Comprobación de los poderes o capacidades del microscopio 

Se hizo el montaje del recorte de la letra “a” de la siguiente forma: o

Se recortó la letra

o

Se ubicó sobre una lámina portaobjetos humedeciéndola un poco

o

Se cubrió con una laminilla cubreobjetos

o

Se verificó que el objetivo 4x (anillo amarillo) estuviera en posición de observación.

o


o

Se subió la platina hasta el tope.

o

Se ajustaron los oculares

o

Se dio inicio a la observación usando los tornillos macro y micrométrico.




Se hizo el montaje de los hilos de la siguiente forma: o

Se cortaron hilos de colores

o

Se ubicaron sobre una lámina portaobjetos humedeciéndolos un poco.

o

Se cubrieron con una laminilla cubreobjetos.

o


o

Sube la platina hasta el tope.

o

Se ajustaron los oculares.

o

Se inició la observación con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos macro y micrométrico.

o

De la misma manera se hizo la exploración con los objetivos de 10x y 40x


6. Cálculo del diámetro del campo de visión


Cuestionario 1. Para las muestras de la letra, la hebra de hilo observadas determine: a. ¿Cómo se manifiesta el poder de resolución? El poder de resolución se manifiesta cuando podemos ver dos puntos que están unidos como si estuvieran separados, como se observó en la tinta de la letra o en las hebras de los hilos, el ojo humano no es capaz de alcanzar esta distinción. b. ¿Cómo se manifiesta el poder de aumento? Se manifiesta en el montaje de la letra asimétrica, el aumento total se da por el aumento del ocular x el aumento del objetivo. c. ¿Cómo se manifiesta el poder de definición? El poder de definición se da cuando se puede observar una imagen perfecta con contornos definidos. d. ¿Cómo se manifiesta el poder de penetración o profundidad? Este poder permite ver los diferentes planos de una preparación. 2. ¿Cuál es la utilidad del microscopio? El microscopio es un equipo de laboratorio cuya importancia recae en la posibilidad de ver entes que a simple vista para el ojo humano es imposible.


PRÁCTICA No. 3 CÉLULA: CRENACIÓN, HEMÓLISIS, PLASMÓLISIS Y TURGENCIA Introducción Se recordó que las células sanguíneas y vegetales permiten la entrada y la salida de agua la cual modifica su forma dependiendo del estado de hidratación la cual se determina de la siguiente por los siguientes fenómenos: -

Isotónico

:

Se conoce como el estado natural de la célula, la concentración del soluto es igual a la concentración interna.

-

Hipotónico

:

Se presenta cuando es menor la concentración del soluto y mayor la concentración de solvente.

-

Hipertónico :

La concentración de soluto es mayor que la concentración de solvente.

La membrana plasmática de las células vegetales y animales es muy permeable al agua, siendo pocas las sustancias que la atraviesan con igual facilidad, esto ocasiona que cuando exista entrada y salida de ella, la célula también se altere en su forma, ya que ésta, en parte está determinada por el estado de hidratación de los coloides celulares.

Objetivo El objetivo de este procedimiento fue reconocer el estado de hidratación de las células sanguíneas y vegetales. Se observó los fenómenos de hipotonía, isotonía e hipertonía en células animales y vegetales.

Material • • • • • • • •

Microscopio compuesto. 6 portaobjetos y 6 cubreobjetos. Vasija con agua destilada. Pipeta Pasteur. Solución de NaCl al 0.6% Solución de NaCl al 0.9% Solución de NaCl al 1.2% Solución de NaCl al 10% 26 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular

Para empezar el trabajo se dispuso la balanza en situación de encendido Se preparó la solución de NaCl al 0.6%, 0.9%, 1.2% y 1.0% de la siguiente forma: 1. Para la solución de NaCl al 0.6%. - Se tomó 10 ml de agua con una pipeta Pasteur - Se depositó en un vaso de precipitado - Con una espátula se tomó Cloruro de Sodio y se depositó en un vidrio de reloj dispuesto sobre la balanza hasta obtener 0.06gr 2. Para la solución de NaCl al 0.9%. - Se tomó 10 ml de agua con una pipeta Pasteur - Se depositó en un vaso de precipitado - Con una espátula se tomó Cloruro de Sodio y se depositó en un vidrio de reloj dispuesto sobre la balanza hasta obtener 0.09gr. 3. Para la solución de NaCl al 1.2%. - Se tomó 10 ml de agua con una pipeta Pasteur - Se depositó en un vaso de precipitado - Con una espátula se tomó Cloruro de Sodio y se depositó en un vidrio de reloj dispuesto sobre la balanza hasta obtener 0.12gr 4. Para la solución de NaCl al 1.0%. - Se tomó 10 ml de agua con una pipeta Pasteur - Se depositó en un vaso de precipitado - Con una espátula se tomó Cloruro de Sodio y se depositó en un vidrio de reloj dispuesto sobre la balanza hasta obtener 1gr. Luego de tener la medida exacta de NaCl, cada grupo la depositó en el vaso de precipitado y usando un agitador de vidrio obtuvo una mezcla homogénea.

Células sanguíneas: 1. Proceso de montaje isotónico en células sanguíneas: Se ubicó una gota de sangre sobre una lámina portaobjetos Se cubrió con una laminilla cubreobjetos. Se ubicó la lámina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza. Se subió la plataforma hasta el tope. Se ajustaron los oculares. Se inició la observación con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos macro y micrométrico. De la misma manera se hizo la exploración con los objetivos de 10x y 40x      



2. Proceso de montaje hipotónico en células sanguíneas: Se ubicó una gota de sangre sobre una lámina portaobjetos Se agregó tres gotas de solución de NaCl al 0.6%  


    



Se cubrió con una laminilla cubreobjetos. Se ubicó la lámina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza. Se subió la plataforma hasta el tope. Se ajustaron los oculares. Se inició la observación con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos macro y micrométrico. De la misma manera se hizo la exploración con los objetivos de 10x y 40x

3. Proceso de montaje hipertónico en células sanguíneas: Se ubicó una gota de sangre sobre una lámina portaobjetos Se agregó tres gotas de solución de NaCl al 1.2% Se cubrió con una laminilla cubreobjetos. Se ubicó la lámina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza. Se subió la plataforma hasta el tope. Se ajustaron los oculares. Se inició la observación con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos macro y micrométrico. De la misma manera se hizo la exploración con los objetivos de 10x y 40x       



4. Proceso de montaje hipertónico en células sanguíneas: Se ubicó una gota de sangre sobre una lámina portaobjetos Se agregó tres gotas de solución de NaCl al 1.0% Se cubrió con una laminilla cubreobjetos. Se ubicó la lámina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza. Se subió la plataforma hasta el tope. Se ajustaron los oculares. Se inició la observación con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos macro y micrométrico. De la misma manera se hizo la exploración con los objetivos de 10x y 40x       



Células vegetales (Elodea): 1. Proceso de montaje isotónico en células vegetales: Se tomó la muestra del ápice de la Elodea Se ubicó la Elodea por el envés sobre una lámina portaobjetos Se cubrió con una laminilla cubreobjetos. Se ubicó la lámina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza. Se subió la plataforma hasta el tope. Se ajustaron los oculares. Se inició la observación con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos macro y micrométrico.       




De la misma manera se hizo la exploración con los objetivos de 10x y 40x

2. Proceso de montaje hipotónico en células vegetales: Se ubicó la Elodea por el envés sobre una lámina portaobjetos Se agregó tres gotas de solución de NaCl al 0.6% Se cubrió con una laminilla cubreobjetos. Se ubicó la lámina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza. Se subió la plataforma hasta el tope. Se ajustaron los oculares. Se inició la observación con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos macro y micrométrico. De la misma manera se hizo la exploración con los objetivos de Observación de Elodea con ocular y objetivo 10x y 40x de 10x 









 

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3. Proceso de montaje hipertónico en células sanguíneas: Se ubicó la Elodea por el envés sobre una lámina portaobjetos Se agregó tres gotas de solución de NaCl al 1.2% Se cubrió con una laminilla cubreobjetos. Se ubicó la lámina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza. Se subió la plataforma hasta el tope. Se ajustaron los oculares. Se inició la observación con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos macro y micrométrico. De la misma manera se hizo la exploración con los objetivos de 10x y 40x       



4. Proceso de montaje hipertónico en células sanguíneas: Se ubicó la Elodea por el envés sobre una lámina portaobjetos Se agregó tres gotas de solución de NaCl al 1.0% Se cubrió con una laminilla cubreobjetos. Se ubicó la lámina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza. Se subió la plataforma hasta el tope.     


 



Se ajustaron los oculares. Se inició la observación con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos macro y micrométrico. De la misma manera se hizo la exploración con los objetivos de 10x y 40x

Presentación de resultados -

-

Se detectó que al usar sangre que no es fresca afecta el resultado al momento de la observación. No se detecta la diferencia entre las soluciones Con el objetivo de 40x no es posible obtener una imagen definida. La enervadura (parte oscura de la superficie de la elodea) contiene tejido parénquimo fotosintético, en el cual están contenidos los cloroplastos; las células tienen forma rectangular, se estimulan con la luz y cuando se agrupan en el borde de la célula lo hacen porque la vacuola ocupa todo el centro de la célula en una solución hipertónica. Con una solución de NaCl al 1.0 los cloroplastos se agrupan hacia el centro de la célula ya que ha salido agua de ella y por lo tanto se ha reducido su tamaño.

Cuestionario 1. Mencione las diferencias observadas entre el comportamiento de la célula vegetal y animal. Explique.

Rta.: Se observó que la principal diferencia entre las células sanguíneas y de la Elodea hace referencia a su color rojo y verde respectivamente. Las células vegetales tienen una estructura más definida y es de forma alargada mientras en las células sanguíneas se presenta de forme redondeada. 2. Describe lo que sucede en una célula cuando se coloca en un medio: a) Hipotónico: En este medio las células aumentan su tamaño debido a la absorción de la solución b) Isotónico: Este es el estado natural de las células, en este medio no presenta ningún tipo de modificación c) Hipertónico: Las células reducen su tamaño debido a la extracción de agua buscando una nivelación en la concentración del soluto. 3. Explique en qué consisten los fenómenos de ósmosis y de difusión. a) Osmosis: Es un medio de transporte celular por medio del cual un disolvente como el agua pasa a través de una membrana semipermeable. Las moléculas de agua se mueven de una mayor concentración a una menor concentración. 30 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular

b) Difusión: Es el movimiento que hacen los átomos y las moléculas de una región de mayor concentración a una de menor concentración 4. ¿Por qué los sueros fisiológicos que se aplican a pacientes intravenosamente deben ser isotónicos?

Rta.: Porque la osmolaridad del líquido isotónico se aproxima a la concentración del plasma en suero. Con esto se busca evitar que las células tengan una reacción hipotónica o hipertónica que pueda afectar la salud de un paciente.


PRÁCTICA No. 4 PERMEABILIDAD SELECTIVA DE LA MEMBRANA DEL ERITROCITO Introducción Cuando un eritrocito es colocado en una solución isotónica, que contiene moléculas que pueden atravesar la membrana, la molécula penetrante entra en la célula ocasionando que ésta estalle. Este estallamiento de los eritrocitos es llamado hemólisis y puede ser detectado por medio de un espectrofotómetro, que mide el cambio en la absorción de la luz, debido al paso de la hemoglobina hacia el exterior.

Objetivo Se visualizó y determinó el porcentaje de hemólisis en eritrocitos causada por diferentes moléculas.

Material • • • • • • • •

4 vasos de precipitados de 100 ml. 6 vasos de precipitado de 250 ml. Una pipeta de 1 ml. 6 pipetas de 10 ml. Un agitador de vidrio. Una pizeta con agua destilada. Espectrofotómetros. Celdas para espectrofotómetro.

Reactivos • • • • • • • •

Solución de NaCl 0.17 M Solución de Glicerol 0.32 M Solución de Metanol 0.32 M Solución de Butanol 0.32 M Solución de Oxalato de amonio 0.12 M Solución de Fructuosa 0.25 M Solución de Ácido cítrico 0.26 M Material biológico Sangre desfibrinada (10 ml) por grupo de trabajo. Sangre humana con anticoagulante EDTA


Procedimiento Se preparó una solución llamada “stock” de la sigui ente forma: - Se colocó con una pipeta 5 ml de sangre en un vaso de precipitado - Se adicionó 45 ml de solución isotónica de NaCl 0.17 M. - Se agitó levemente para homogenizar. Se preparó una solución al 100% de hemolisis de la siguiente forma: - Se dispuso en un vaso de precipitados 0.5 ml de solución “ stock” - Se agregó 3 ml de agua destilada - Se adicionó 26.5 ml de solución de NaCl 0.17 M. - Se agitó levemente para homogenizar Se preparó una solución al 100% de hemolisis de la siguiente forma: - Se depositó en un vaso de precipitados 0.5 ml de solución “ stock” - Se agregó 29.5 ml de solución de NaCl 0.17 M. - Se agitó ligeramente. Para calibrar el espectrofotómetro se siguieron los siguientes pasos: -

Se ajustó al 0% de Transmitancia y a una longitud de onda de 525 nm, Se llenó una celda con la solución de 100% de hemolisis Se calibró a 100% de Transmitancia a la misma longitud de onda.

Una vez calibrado el espectrofotómetro, se obtiene la lectura de Transmitancia para la solución de 0% de hemolisis. Es de resaltar que los datos obtenidos sirvieron para realizar la curva estándar para Hemólisis de la sangre, graficando % de Transmitancia contra % de Hemólisis. Posteriormente en un vaso de precipitados se dispuso 29.5 ml de cada una de las soluciones: - Oxalato de amonio - Metanol - Butanol - Fructosa - Ácido cítrico Luego de esto se procedió de la siguiente forma: Se adicionó 0.5 ml de solución “ stock”, agitando suavemente y se llenó la celda con la mezcla. Se introdujo la celda en el espectrofotómetro calibrando de antemano 33 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular

Se tomaron las lecturas de cada una de las soluciones las cuales arrojaron los siguientes datos:

0% Hemolisis

2.8076

100% Hemolisis

6.1646 Células Estalladas

Oxalato de amonio

20.300

Metanol

63.220 > hemólisis – células + hemoglobina al medio; > Glóbulos rojos rotos + espacio para paso de electrones

Butanol

62.793

Fructosa

8.4229 < hemólisis + células

Ácido cítrico

53.955

Nota: Los valores que arroja el espectrofotómetro no tienen unidad 34 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular

PRÁCTICA No. 5 Acción de lisosomas Introducción Las sustancias que penetran en la célula por fagocitosis o pinocitosis van a experimentar la acción de las enzimas digestivas intracelulares, contenidas en orgánulos llamados lisosomas. Estos orgánulos son

corpúsculos

esféricos

que

miden

aproximadamente 0.5 micrómetros, están delimitados por una unidad de membrana y contienen enzimas hidrolíticas. Se han encontrado lisosomas en todas las células animales y vegetales. Los lisosomas promueven la digestión intracelular, tanto del material exógeno que penetra en la célula por pinocitosis, como también el material endógeno. Este último puede estar constituido por orgánulos degenerados o por productos de desasimilación del metabolismo celular.

Objetivo Se observó la función de los lisosomas de manera análoga en ciliados.

Material •

Microscopio compuesto Porta y cubreobjetos.

•

Pipeta de un ml.

•

Mechero de Bunsen

•

6 tubos de ensayo 15 x 150 mm.

• Gradilla. • Pinzas •

Tela de asbesto.

•

Tripie Recipiente para baño María.

•

Pipeta Pasteur 35 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular

• Termómetro. •

Hoja de papel aluminio.

Reactivos •

Solución de Rojo Congo al 0.4%

•

Material biológico

•

Cultivo de levaduras de pan. (30 ml.)

Procedimiento 

Se tomaron tres tubos de ensayo



En cada uno de ellos se dispuso un mililitro del cultivo de levaduras.



Un tubo se puso en el hielo durante 10 minutos.



Otro se coloca en el baño María a 30ºC



El último se tapó con papel aluminio y se puso en un baño María hirviendo durante 10 minutos.

Al término de la exposición de cada temperatura, se colocó de inmediato en cada tubo 0.5 ml de rojo de Congo al 0.4%. Se Agitó cada tubo y se dejó en reposo durante 5 minutos. Al hacer las observaciones al microscopio de cada uno de los tubos, poniendo atención al grado de tinción que se presentaron se observó que cuando se presentaron los cambios fuertes de temperatura y con la exposición a la luz el color se hizo más oscuro, mientras que el tubo que estuvo protegido de la exposición su color se mantuvo claro.




PRÁCTICA No 6 Tejidos vegetales: Aislamiento de cloroplastos intactos Introducción La célula es la unidad básica de la vida que contiene una amplia variedad de distintos tipos de orgánulos. Si se requiere estudiar la función particular de los cloroplastos u otro orgánulo resulta de gran valor poder aislar en estado puro el orgánulo que interesa. La separación de un orgánulo, por lo general se hace mediante la técnica de centrifugación diferencial, la cual depende del principio de que las partículas de tamaño diverso se desplazan hacia el fondo del tubo de centrifuga a diferentes velocidades cuando se les coloca en un campo centrífugo. Una suspensión de material de células rotas se somete al principio de la fuerza centrífuga muy baja durante un corto período de tiempo, de modo que solo los núcleos y las células íntegras se sedimentan formando un precipitado. Con fuerzas centrífugas cada vez mayores se pueden separar los cloroplastos y las mitocondrias en suspensión, luego los microsomas y para finalizar los ribosomas. Este último paso requiere de una ultracentrífuga, la cual genera velocidades que producen hasta 100 000 veces la fuerza de la velocidad. Los cloroplastos cuando son aislados cuidadosamente son capaces de reducir el colorante

2,6-Diclorofenol-Indo

fenol

(DCPIP),

lo

cual

debe

ser

medido

espectrofotométricamente comparado con una muestra control. La reducción se debe a que capta los electrones en lugar del NADPox en la parte no cíclica de la fotosíntesis.

Objetivo: Se probó un método de aislamiento de cloroplastos y se observó su funcionamiento en condiciones óptimas y con “SHOCK” osmótico.

Materiales y Reactivos • Linterna • Mortero y pistilo • Pipeta de 10 ml.


• • • • • • • • • • • • • • •

Pipeta de un ml Vaso de precipitados de 100 ml. Tijeras. 6 tubos de ensayo 15mm X 150 mm. y Gradilla. Embudo. Bolsa de hielo. Sobre de gasas. Charola metálica. Pipeta Pasteur con goma. Cubeta con agua destilada. 3 espectrofotómetros. 6 celdas para espectrofotómetro. Una centrífuga clínica. 6 tubos para centrífuga. Solución de NaCl 0.35 M en Buffer de fosfatos 0.02 M, pH 8. (buffer salino) Solución de DCPIP 0.3 M.

Material biológico Hojas de espinacas o de acelgas (3 o 4 por equipo)

Procedimiento 1. Se enfrió con anticipación el mortero con hielo, se le agregó 20 ml de buffer salino frío y las partes verdes de sus hojas de espinacas. 2. Se trituraron durante 5 minutos y luego se filtró el homogenizado a través de gasa doble previamente humedecida con 10 ml de buffer salino. 3. El filtrado se distribuyó de manera equitativa en dos tubos de ensayo y se centrifugó a 1000 rpm. Durante tres minutos, se obtuvieron dos fases: -

El sobrenadante: que contiene los cloroplastos en suspensión.

-

El precipitado: que tiene células intactas y núcleos.

El sobrenadante obtenido se colocó en tubos de ensayo fríos. Se desechó el precipitado. Se coloca de nuevo el sobrenadante en tubos de centrífuga y se centrifugó a 3000rpm durante 5 minutos. 40 Grupo 151009_6 Laboratorio de Biología Celular y Molecular

Al final de este tiempo se descartó el sobrenadante y el precipitado se suspende en buffer salino frío utilizando en total 2 ml por cada tubo. De esta manera se preparó la suspensión de cloroplastos intactos.

Para preparar la suspensión de cloroplastos con “ shock” osmótico: 

Se colocó en un tubo 1 ml de la suspensión de cloroplastos intactos y 4 ml de agua destilada.



Se envolvió 4 tubos de ensayo con papel aluminio, y después se prepararon los tubos de la siguiente manera:


Tubo

1

2

3

4

(este tubo no se expone a la luz)

(Blanco)

0.5 ml

0.5 ml

0.5 ml

0.5 ml

Buffer Salino

9.5 ml

9.5 ml

9.5 ml

9.5 ml

Suspensión

0.2 ml

__

__

__

__

0.2 ml

0.2 ml

__

Solución de DCPIP 0.3 M.

cloroplastos con SHOCK osmótico Suspensión de Cloroplastos intactos

Antes de proceder a tomar las lecturas correspondientes debe agitar perfectamente bien todos los tubos. -

Se calibró el espectrofotómetro a 0% de absorbancia a una longitud de onda de 450 nm

-

Se llenó una celda con el contenido del tubo No. 4 (tubo blanco) y se calibró a 0% de absorbancia a la misma longitud de onda.

-

Una vez calibrado el espectrofotómetro se obtuvo las lecturas de absorbancia a 450 nm de los tubos 1, 2 y 3 al tiempo de 0 minutos de exposición a la luz.

-

Enseguida se expuso los tubos 1, 2 y 4 a la luz, colocándolos a una distancia aproximada de 15 cm de la linterna durante un minuto.

-

Al término de este tiempo se taparon nuevamente con papel aluminio

Se procedió a realizar las lecturas de absorbancia a 450 nm de los tubos 1, 2 y 3 en el espectrofotómetro.


Presentación de resultados Se presentan en la siguiente tabla los datos experimentales obtenidos.

Tubo/Tiempo de exposición Tubo 1. Suspensión cloroplastos con SHOCK osmótico Tubo 2. Suspensión de Cloroplastos intactos (expuesto a la luz) Tubo 3. Suspensión de Cloroplastos intactos (no expuesto a la luz) Tubo 4. Blanco

0 min

5 min

7.2021

9.3750

2.7954

3.2837

3.7354

5.707

10.022

11.365

Nota: el Buffer presenta contaminación por lo tanto los valores deben ser confirmados. -

Se nota un incremento en los valores a medida que pasa el tiempo aunque solo tiene reactivos

-

El cambio en los valores del tubo 3 debió mantenerse intacto, sin embargo al tener la boca del tubo descubierta permitió el ingreso de luz por la parte superior del tubo.

-

Los resultados del tubo blanco deberían ser iguales al no haber cloroplastos que reaccionen a la luz.


PRÁCTICA No 7 Meiosis y Mitosis Son procesos de división celular, la meiosis consiste en que una célula madre al dividirse produce dos células hijas que contienen la mitad de cromosomas que la célula madre; la mitosis se da cuando la célula duplica su material genético y produce dos células hijas idénticas a la célula madre.

Objetivo Se aprendió a diferenciar los periodos del ciclo celular.

Material • Microscopio.

Aceite de inmersión.

•

• Acetocarmín • Metanol • Bisturí

Micropreparados que ilustran los procesos de mitosis y meiosis.

•

Procedimiento mitosis Para la observación de este montaje se usó el lente de inmersión (100x) junto con el aceite. o


o


o

Se ubicó la lámina micropreparada del ápice radical de la cebolla

o


o


o



Presentación de resultados


Procedimiento meiosis Para la observación de este montaje se usó el lente de inmersión (100x) junto con el aceite. o


o


o

Se ubicó la lámina micropreparada del corte transversal del testículo de ratón

o


o


o




Informe de Laboratorio 151004_6

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