UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN SIMON FACULTAD: CIENCIAS Y TECNOLOGIA CARRERA: INGENIERIA DE ALIMENTOS
MATERIA : LABORATORI LABORATORIO O DE ANALISIS DE ALIMETOS DOCENTE : GIANNINI ZALLOCCO MARIA ESTHER ESTUDIANTE ESTUDIANT E : JHOANA QUINO CHOQUE GRUPO :3 FECHA : 15/ VI / 09
COCHABAMBA – BOLIVIA
DETERMINACIÓN DE VITAMINA C
1. INTRODUCCION: La dieta es la fuente de todos los nutrientes para los seres humanos. Estos se dividen clásicamente en componentes de la dieta que proporcionan energía (carbohidratos, grasas y proteínas), fuentes de aminoácidos esenciales y no esenciales (proteínas), ácidos grasos insaturados (grasas), minerales (oligominerales), y vitaminas (compuestos orgánicos hidrosolubles y liposolubles). orgánicas necesarias para la nutrición de mamíferos; las sustancias requeridas únicamente por microorganismos y células en cultivo deben definirse como factores de crecimiento, para evitar afirmaciones sin Una vez ingerida con el alimento es absorbida al intestino, transportada a una célula y asimilada en su interior. Hay vitaminas que se transforman en coenzimas, como la vitamina B y la mayoría de las hidrosolubles, a excepción de la C. Otras vitaminas tienen otros modos de actuación. Son responsables de importantes procesos biológicos, producción del pigmento visual, necesarias para la producción de protrombina, osificación o funcionan como antioxidantes. Las vitaminas no generan energía, son acalóricas. Sus carencias o deficiencias originan trastornos y patologías concretas. Las vitaminas son consideradas como nutrientes porque el organismo las necesita para poder aprovechar otros nutrientes, participando en los procesos metabólicos del organismo, todas tienen un papel metabólico específico. Esta definición distingue entre vitaminas y oligoelementos esenciales, que son nutrientes inorgánicos necesarios en pequeñas cantidades. También excluye a los aminoácidos esenciales, que son sustancias orgánicas preformadas y necesarias, que se encuentran en la dieta en cantidades mucho mayores. El término vitamina se restringe aquí para incluir únicamente las sustancias fundamento científico en cuanto a su beneficio terapéutico, como las vitaminas para los seres humanos. Cuando la vitamina se encuentra en más de una forma química (p. ej., piridoxina, piridoxal, piridoxamina), o como un precursor (p. ej., caroteno para vitamina A), esos análogos a veces se denominan vitámeros. Las vitaminas, a pesar de su composición química diversa, pueden definirse como sustancias orgánicas que deben obtenerse en pequeñas cantidades a partir del ambiente, porque los seres humanos no pueden sintetizarlas de novo, o su velocidad de síntesis es inadecuada para la conservación de la salud (por Ej., la producción de ácido nicotínico (niacina) a partir del triptofano). En la mayor parte de los casos, la fuente ambiental es la dieta, ya que el organismo es incapaz de sintetizarlas, pero una excepción obvia a esta regla general es la síntesis endógena de vitamina D que se puede formar en la piel con la exposición al sol, y algunas pueden formarse por la flora intestinal (las vitaminas K, B 1, B12 y ácido fólico, que se forman en pequeñas cantidades en la flora intestinal), o sintetizarse en el hígado a través de sus precursores (p. ej. los carotenos, y la vitamina A) Las vitaminas son sustancias orgánicas, de naturaleza y composición variada imprescindibles en los procesos metabólicos que tienen lugar en la nutrición de los seres vivos. No aportan energía, ya que no se utilizan como combustible, pero sin ellas el organismo no es capaz de aprovechar los elementos constructivos y energéticos suministrados por la alimentación. Normalmente se utilizan en el interior de las células como antecesoras coenzimas, a partir de las cuales se elaboran miles de enzimas que regulan las reacciones químicas de las que viven las células. Los antiguos métodos biológicos utilizados para determinar o incluso demostrar la actividad biológica de las vitaminas en la actualidad han sido reemplazados por los métodos microbio-lógicos (EMB). Los métodos fisico-químicos, principalmente la cromatografía gas líquido (GLC) y la cromatografía líquida de alta presión (HPLC) han sido aplicados para solucionar muchos problemas relacionados con el análisis de las vitaminas La vitamina C es una de las que analizaremos, la propiedad química más importante del ácido ascórbico es su oxidación, por la transferencia de uno o dos electrones; debido a esto ayuda a prevenir la oxidación de las moléculas solubles en agua. También, indirectamente, protege a las vitaminas A y E de la oxidación, así como a algunas vitaminas del grupo B; tales como la riboflavina, tiamina, ácido fólico, y ácido pantoténico. Actúa como un desintoxicante y puede reducir los efectos colaterales de drogas como la cortisona, aspirina e insulina y puede reducir la toxicidad de metales pesados como el plomo, mercurio y arsénico. Gracias a su poder reductor, el ácido ascórbico se puede determinar por valoración con soluciones oxidantes La estabilidad de la vitamina C es otro inconveniente, porque es la más lábil de las vitaminas de los alimentos. La mayor pérdida se produce durante la recolección, el procesamiento y almacenamiento debido a la oxidación; la cual es acelerada por la luz, el oxígeno, el calor, el incremento del pH, la actividad de agua, la presencia de cobre y sales ferrosas y por las oxidasas, por lo que su extracción debe realizarse en medio ácido
Si bien en la literatura aparecen reportados varios métodos para la determinación de ácido ascórbico, recopilados en un trabajo anterior, el método recomendado por la AOAC es la titulación con el indicador redox 2,6 – diclorofenolindofenol, aunque dicha valoración se aplica preferentemente a los extractos vegetales.
2. OBJETIVOS:
Realizar el análisis del contenido de vitamina C (acido ascórbico) en muestras frutales por el método volumetrico con titulación de 2,6 Diclorofenol
3. FUNDAMENTO TEORICO: Las vitaminas son sustancias orgánicas imprescindibles en los procesos metabólicos que tienen lugar en la nutrición de los seres vivos. No aportan energía, puesto que no se utilizan como combustible, pero sin ellas el organismo no es capaz de aprovechar los elementos constructivos y energéticos suministrados por la alimentación. Normalmente se utilizan en el interior de las células como precursoras de los coenzimas, a partir de los cuales se elaboran los miles de enzimas que regulan las reacciones químicas de las que viven las células. Si bien las vitaminas individuales difieren mucho en cuanto a estructura y función, se aplican algunas aseveraciones generales. Las vitaminas hidrosolubles sólo se almacenan en una cantidad limitada y se requiere consumo frecuente para conservar la saturación de los tejidos. Las vitaminas liposolubles pueden almacenarse en cantidades muy abundantes, y esta propiedad les confiere un potencial de toxicidad grave que excede mucho la del grupo hidrosoluble. En la forma que se consumen, muchas vitaminas no tienen actividad biológica y requieren procesamiento in vivo. En el caso de varias vitaminas hidrosolubles, la activación incluye fosforilación (tiamina, riboflavina, ácido nicotínico, piridoxina), y es posible que también requiera acoplamiento a nucleótidos purina o piridina (riboflavina, ácido nicotínico). En sus principales efectos conocidos, las vitaminas hidrosolubles participan como cofactores para enzimas específicas, en tanto al menos dos vitaminas liposolubles, A y D, se comportan como hormonas e interactúan con receptores intracelulares específicos en sus tejidos blanco. De acuerdo a su solubilidad la podemos clasificar a las vitaminas en: Hidrosolubles: Se caracterizan porque se disuelven en agua, por lo que pueden pasarse al agua del lavado o de la cocción de los alimentos. Muchos alimentos ricos en este tipo de vitaminas no nos aportan al final de prepararlos la misma cantidad que contenían inicialmente. Las vitaminas hidrosolubles son generalmente coenzimas o precursores de ellos. En consecuencia, la carencia de una vitamina se traduce en el frenado o paralización de la reacción en la que está implicada, con las consecuencias biológicas previsibles. El ácido ascórbico, por ejemplo, es esencial para la actividad de la prolinhidroxilasa, un enzima que intervienen en la síntesis del colágeno; la vitamina B 12 es esencial para la actividad de la malonil-CoA mutasa, que transforma el metilmalonil-Coa en succinil-CoA, mientras que el folato es una parte esencial de la molécula del propio coenzima A. Las vitaminas liposolubles tienen funciones menos definidas, y en algunos casos todavía no bien conocidas a nivel molecular, aunque su deficiencia también da lugar a enfermedades carenciales
A diferencia de las vitaminas liposolubles no se almacenan en el organismo. Esto hace que deban aportarse regularmente y sólo puede prescindirse de ellas durante algunos días. El exceso de vitaminas hidrosolubles se excreta por la orina, por lo que no tienen efecto tóxico por elevada que sea su ingesta. Complejo B :
- Liberadoras de Energía: Tiamina (B1), Riboflavina (B2), Niacina (B3), Biotina y Acido Pantoténico. - Hematopoieticas: Acido Fólico y Vitamina B12 - Otras: Piridoxina (B6), Piridoxal y Piridoxamina. Las fuentes de esta vitamina son: hígado, riñón, carne, huevos, marisco y productos lácteos. Se ha observado deficiencia de esta vitamina en vegetarianos estrictos; infecciones intestinales crónicas y ancianos, así mismo el consumo de alcohol aumenta sus necesidades. Es la responsable de problemas de absorción y anemia perniciosa.
No Complejo B :
Vitamina C (Acido Ascórbico)
Liposolubles Son las que se disuelven en disolventes orgánicos, grasas y aceites. Se almacenan en el hígado y tejidos adiposos, por lo que es posible, tras un aprovisionamiento suficiente, subsistir una época sin su aporte.
Si se consumen en exceso (más de 10 veces las cantidades recomendadas) pueden resultar tóxicas. Esto les puede ocurrir sobre todo a deportistas, que aunque mantienen una dieta equilibrada recurren a suplementos vitamínicos en dosis elevadas, con la idea de que así pueden aumentar su rendimiento físico. Esto es totalmente falso, así como la creencia de que los niños van a crecer más cuantas más vitaminas les hagamos tomar. Las vitaminas son Vitamina A (Retinol, â-Catotenos), Vitamina D (Colecalciferol), Vitamina K ( Filoquinonas, Menaquinonas) y Vitamina E (Tocoferoles), de la cuales mencionaremos de manera abreviada.
Vitamina A: Retinol . La vitamina A sólo está presente como tal en los alimentos de origen animal, aunque en los vegetales se encuentra como provitamina A, en forma de carotenos. Los diferentes carotenos se transforman en vitamina A en el cuerpo humano. Se almacena en el hígado en grandes cantidades y también en el tejido graso de la piel (palmas de las manos y pies principalmente), por lo que podemos subsistir largos períodos sin su aporte. Se destruye muy fácilmente con la luz, con la temperatura elevada y con los utensilios de cocina de hierro o cobre. La función principal de la vitamina A es la protección de la piel y su intervención en el proceso de visión de la retina. También participa en la elaboración de enzimas en el hígado y de hormonas sexuales y suprarrenales. El déficit de vitamina A produce ceguera nocturna, sequedad en los ojos (membrana conjuntiva) y en la piel y afecciones diversas de las mucosas. En cambio, el exceso de esta vitamina produce trastornos, como alteraciones óseas, o incluso inflamaciones y hemorragias en diversos tejidos. El consumo de alimentos ricos en vitamina A es recomendable en personas propensas a padecer infecciones respiratorias (gripes, faringitis o bronquitis), problemas oculares (fotofobia, sequedad o ceguera nocturna) o con la piel seca y escamosa (acné incluido). Su función principal consiste en la protección del tejido epitelial, en la intervención de los mecanismos que permiten el crecimiento y la reproducción y en el ciclo bioquímico de la retina (formación del pigmento rodopsina) Vitamina D: calciferol . La vitamina D es fundamental para la absorción del calcio y del fósforo. Se forma en la piel con la acción de los rayos ultravioleta en cantidad suficiente para cubrir las necesidades diarias. Si tomamos el sol de vez en cuando, no tendremos necesidad de buscarla en la dieta. En países no soleados o en bebés a los que no se les expone nunca al sol, el déficit de vitamina D puede producir descalcificación de los huesos (osteoporosis), caries dentales graves o incluso raquitismo.
Vitamina K . La vitamina K es un principio esencial en la dieta para la biosíntesis normal de varios factores necesarios en la coagulación de la sangre. La vitamina K en presencia de diarrea, antibióticos que reducen la flora intestinal, o cualquiera de los síndromes de malabsorción. Vitamina E: En animales, los signos de
deficiencia de vitamina E comprenden anormalidades estructurales y funcionales de muchos órganos y sistemas. Esas alteraciones morfológicas se acompañan de defectos bioquímicos que parecen afectar al metabolismo de ácidos grasos y muchos otros sistemas de enzimas. Es notable el hecho de que un gran número de signos y síntomas de deficiencia de vitamina E en animales se asemejan de manera superficial a estados patológicos en seres humanos; sin embargo, hay pocas pruebas inequívocas de que la vitamina E tiene importancia nutricional en seres humanos . (objetivo de nuestra práctica) El término vitamina C debe usarse como un nombre descriptivo genérico para todos los compuestos que muestran desde el punto de vista cualitativo la actividad biológica del ácido ascórbico y la podemos encontrar en carnes, cereales, frutas (cítricos, sandía, melón, papaya, mango, kiwi) hortalizas, leche de vaca, verduras, entre otros. La Vitamina C o Acido Ascórbico
Entre sus principales funciones tenemos: - Antioxidante y captador de radicales libres - Formación y reparación de colágeno - Síntesis de Proteoglucanos - Participa en el metabolismo de Tirosina, carbohidratos, histamina, noradrenalina y hierro - Cofactor en varias reacciones orgánicas El ácido Ascórbico actúa como un fuerte agente reductor y en su oxidación cede dos átomos de hidrógeno para transformarse en ácido dihidroscórbico, que también tiene actividad de Vitamina C. La ausencia de ésta vitamina da como resultado la enfermedad conocida como Escorbuto la cual se caracteriza por un defecto de la síntesis de colágeno, que queda de manifiesto por la falta de cicatrización de heridas, defectos de la formación de los dientes, rotura de capilares que conducen a la aparición de abundantes petequias, debilidad muscular, perdida del cabello, entre otros. El ácido ascórbico es una cetolactona de seis carbonos, que tiene relación estructural con la glucosa y otras hexosas, se oxida de modo reversible en el organismo hacia ácido deshidroascórbico. Este último compuesto posee actividad completa de vitamina C. Las fórmulas estructurales del ácido ascórbico y del ácido deshidroascórbico son las siguientes:
Ácido ascórbico y deshidroascórbico. Tomado de Goodman y Gilman. Las bases farmacológicas de la terapéutica. Usos: La vitamina C puede tener muchos efectos positivos, incluyendo los siguientes. Refuerza las funciones del sistema inmune. Protege contra el cáncer. Es necesario en el proceso de curación de heridas. Ayuda a prevenir cataratas. Incrementa el colesterol HDL (bueno). Disminuye los riesgos de enfermedades cardíacas. Reduce la presión sanguínea. Es útil en el tratamiento de alergias. Mantiene saludables los vasos sanguíneos. Neutraliza el asma y los espasmos. Ayuda a combatir la infertilidad masculina. Ayuda a proteger a los diabéticos contra complicaciones a largo plazo. Protege contra sarpullidos y sus efectos. Puede asistir en el tratamiento de sangrado de encías, contusiones leves y artritis. Asiste al tratamiento de artritis y otros estados inflamatorios. Si usted consume mucha carne curada, procesada o preservada como la panceta, chorizo, jamón, salchichas o fiambres, debería saber que la vitamina C ayuda a prevenir que este tipo de alimentos generen causantes de cáncer, "nitrosaminas" en el estómago. Es una buena idea ingerir alimentos ricos en vitamina c, o en su defecto, ingerir suplementos de vitamina C, al mismo tipo que consume alimentos procesados. Suplementos: La vitamina C está presente en muchas frutas y vegetales. Los alimentos que son excelentes fuentes de vitamina C incluyen el jugo de naranja, pimienta verde, pomelo, papaya, uva, melón, frutillas, mango, brócoli, jugo de tomate, repollo de Bruselas, coliflor y col. La vitamina C también se halla en
verduras de hojas verdes crudas y cocidas (espinaca, nabo verde); tomates, papas, calabaza, frambuesa y ananá enlatados o frescos. Esta vitamina es sensible a la luz, el aire, y el calor. Ingerir vegetales crudos o no tan cocidos, incrementa su contenido de vitamina C. Otros suplementos: Se puede adquirir la vitamina C tanto de forma natural como sintética, también llamada ácido ascórbico, en una gran variedad de formas de suplementos. Las tabletas, cápsulas y tabletas masticables son probablemente las más populares, pero la vitamina C también viene en polvo cristalino, tableta efervescente y en forma líquida. Se puede adquirir un rango de dosage de 25 mg a 1.000 mg por tableta. Está disponible la vitamina C "protegida" si nota que el ácido ascórbico provoca malestar al estómago. La vitamina C esterificada es una modalidad disponible de vitamina C la cual, consideran los fabricantes, es mejor absorbida por el cuerpo. La experiencia en laboratorio ha demostrado que esto último no es así, y también se demostró que la vitamina C común es absorbida adecuadamente. Precauciones: En general la vitamina C no es tóxica. En altas dosis ( más de 2.000mg diarios) puede causar diarrea, gas, o trastorno estomacal. Consulte a su médico antes de ingerir suplementos de vitamina C en caso de tener algún problema de riñón. Los niños cuyas madres ingieren 6g o más de vitamina se pueden desarrollar escorbuto debido a la repentina ingesta diaria de gotas. Interacciones posibles: La vitamina C tiene los siguientes efectos en el cuerpo. Incremento de la absorción de hierro de alimentos y suplemento de hierro o suplementos multivitamínicos y/o minerales. Disminución en la absorción de cobre. Interfiere con el análisis de sangre para la vitamina B12, informe a su médico en caso de ingerir vitamina C, al momento del análisis de sangre. No tiene efectos adversos con otros medicamentos o hierbas. La vitamina C es utilizada para desintoxicar el hígado de drogas y otros químicos. Si está actualmente tomando medicamentos, consulte a su médico antes de ingerir suplemento de cualquier vitamina.
ANALISIS DE VITAMINAS Debido a que las vitaminas no se almacenan y el contenido en los alimentos varía grandemente, es necesario efectuar el análisis de estos compuestos, para así: a) Establecer los requerimientos diarios de las personas b) Establecer los alimentos que los aportan en mayor calidad. Al analizar a las vitaminas no se puede establecer un método general para cuantificarlas a todas, sino que cada una va a poseer su método con sus restricciones y especificaciones. En general los métodos se pueden clasificar de la siguiente manera:
1. Vitaminas Hidrosolubles a) Químicos y Físicas : a. b. c. d. e. f.
Fluorométricos (Tiocromo) Caolorimétricos Espectrofotométricos Polarográficos Gravimétricos Volumétricos
b) Bioensayos: Utilizando animales de experimentación (ratas), mediante estos ensayos se evlúan los cambios o trastornos que presente el animal. c) Microbiológicos: a. Ochromonas danica b. Lactobacillus fermenti c. Kleeckera brevis
d. Lactobacillus casei
2. Vitaminas Liposolubles a) Químicos y Físicos a. Absorción UV b. Colorímetricos: ensayo Carr-Price c. Fotométricos b) Bioensayos: Se evalúa el desarrollo de la rata y al terminar el ensayo, al animal se le extraer el hígado.
4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL: Determinación de acido ascórbico Pesamos 10g de muestra (fruta triturada, jugo de naranja) en la balanza analítica, en un vaso de precipitado En una pipeta volumétrica tomamos 10ml de de acido oxálico al 2% y enrasamos con agua destilada en un matraz aforado de 50 ml Preparamos el equipo de filtración y posteriormente filtramos el contenido del matraz Tomamos 10ml del filtrado en un erlenmeyer y le añadimos 20ml de acido oxálico Posteriormente procedemos a realizar la titulación de nuestra muestra y el patrón de acido ascórbico 0,1mg/ml con 2,6 DCFI, para ver mejor el punto de viraje añadir éter etílico (el cual extrae el color a la superficie para mejor visualización) Preparación del patrón: Se pesa 0.1g de acido ascórbico y se diluye a 100ml del cual se saca una alícuota de 10ml para luego enrasar a 100ml, del ultimo de saca 5 ml de la solución patrón de acido ascórbico para luego titular
6. DATOS: Determinación de acido ascórbico Nº Muestra Cantidad 1 2
Jugo naranja kiwi
de
V de titulación de 2,6 DCFI (ml) 30
2ml 10.7700 g
50ml
23 2ml
titulación
5. CALCULOS Para el jugo de naranja: 0.5 mg vit. C X mg vit. C 0.9842 mg vit. C X mg vit. C
15.24ml de 2,6 DCFI 30ml de 2,6 DCFI 2 ml naranja 100ml
X1 mg vit. C = 9.21mg vit. C / 100 ml de jugo de naranja Para el kiwin:
0.5 mg vit. C X mg vit. C
15.24ml de 2,6 DCFI 23 ml de 2,6 DCFI
0.7546 mg vit. C X mg vit. C
2 ml de 2,6 DCFI 50ml de 2,6 DCFI
18.86 mg vit. C X mg vit. C
10.7700 g kiwi 100g
X1 mg vit. C =175.16 mg vit. C/ 100ml de kiwi
6. RESULTADOS: Nº 1 2
Muestra Jugo de naranja kiwi
Vit. C (acido ascorbico) 9.21mg vit. C / 100 ml de jugo de naranja 175.16 mg vit. C/ 100ml de kiwi
7. CONCLUSION: Dada la importancia de la vitamina C que contribuye a nuestro organismo en aspectos mencionados anteriormente en el marco teórico se realiza análisis del contenido las vitamina C en el jugo de naranja y el kiwi, este ultimo presenta mas porcentaje de vitamina C que casi todos los frutos, el cual determinamos por el método colorimétrico con la titulación del 2,6 DCFI
8. CUESTIONARIO: 1) Que otros métodos analíticos se emplean para determinar la vitamina C? El ácido ascórbico (AA) es fácilmente oxidado a ácido dehidroascórbico (ADA) y por lo tanto, es necesario seleccionar las condiciones de extracción en forma cuidadosa con el fin de minimizar las posibles pérdidas debido a las etapas de preparación de las muestras. Las soluciones de extracción más comúnmente utilizadas son las de los ácidos metafosfórico, oxálico y acético y mezclas de ellos. Se puede agregar EDTA en ciertos procedimientos para complejar los iones de los metales así como también agentes reductores como ditiotreitol (DTT). Básicamente existen dos enfoques diferentes para la determinación del ácido ascórbico: - La determinación del ácido ascórbico presente en la muestra o en el extracto de muestra ignorando alguna presencia posible de ADA. - La determinación del ácido ascórbico "total" que incluye la suma de AA y ADA utilizando un método que transforma ya sea AA a ADA o ADA a AA con la consiguiente cuantifícación de ADAoAA. Todos los métodos que utilizan las propiedades reductoras de la molécula de ácido ascórbico pertenecen a la primera categoría. Se pueden utilizar muchos reactivos y de todos ellos, el 2,6-diclorofenolindofenol (DCFI) es ciertamente el más utilizado debido a que su uso es simple y los resultados son en general confiables. El DCFI es de color azul profundo pero incoloro cuando es reducido por AA. Por lo tanto, es fácil titular volúmenes fijos del extracto de la muestra hasta que permanezca un color rosado y comparar el volumen de reactivo utilizado con aquellos de una solución estándar de concentración conocida de AA. En ciertos casos, no se percibe el cambio de color debido a otros componentes coloreados presentes en el extracto En estos casos, el punto final de la titulación puede visualizarse midiendo el cambio de potencial en la solución con un electrodo de platino-plata/cloruro de plata (Pt-Ag/AgCl) (23).
Uno de los métodos más específicos que pertenecen a la segunda categoría fue desarrollado por Deutsch y Weeks (24) y se basa en la medición de ADA después de la oxidación de todo el AA utilizando ya sea oxígeno unido a carbón u otro oxidante tal como iodo. El ADA formado es luego derivatizado con ofenilendiamina para formar un derivado fuertemente fluorescente, el que puede cuantificarse fácilmente por la comparación con soluciones estándares. El método es un procedimiento AOAC de acción final (25). En años recientes, diversos investigadores han publicado procedimientos que utilizan HPLC para separar y cuantificar AA y/o ADA. El siguiente procedimiento de ensayo permite la determinación simultánea de AA y ácido eritórbico (26) y se ha utilizado para determinar AA en carne, productos cárnicos, alimentos procesados, alimentos enriquecidos, verduras, frutas, leche y bebidas.
Extracción El material (1-5 g) es extraído con 25-50 ml de ácido metafosfórico 0,5% que contiene ditiotreitol 0,2% (DTT) utilizando un homogenizador o mediante agitación. Después de la centrifugación, el extracto es diluido con buffer acetato pH 4,8 que contiene DTT 0,2%, se filtra usando un filtro de 0,45 μm y se inyecta en el
HPLC. El Cuadro 10 muestra las condiciones de HPLC.
Resumen 1. La determinación del ácido ascórbico puede realizarse fácilmente mediante titulación con DCFI pero sólo se está determinando AA y en algunos casos pueden ocurrir interferencias. 2. El método de Deutsch y Weeks con el derivado de quinolina fluorescente formado con fenilendiamina proporciona una manera confiable de medir la vitamina C "total". 3. Si ha de determinarse el ácido ascórbico "total", HPLC puede proporcionar una alternativa confiable suponiendo que utilizan condiciones apropiadas extracción para la reducción ADA a AA previo a cuantificación con HPLC. Cuadro 10
Condiciones de cromatografía para ácido ascórbico Columna Fase estacionaria Fase móvil Flujo Presión Volumen de inyección Detección Tiempo de retención Estándar Cálculo
Acero inoxidable; 250x4,0 m Hypersil ODS (Shandon), 5 μm
Buffer acetato": Metanol: Agua (15:40:945) 0,8ml/min 90 bar 10- 20 μl UV: 254 nm aprox. 6-8 min aprox. 10 μg/ml
Método estándar externo Recuento de área o altura a Buffer acetato:36,8 g de acetato de sodio*3H 20 disueltos en 800 ml de agua, 101 ml de ácido acético, pH ajustado a 3,8 y diluido a 1000 ml con agua.
1)
El
método volumétrico con 2.6 DCFI que dificultades presenta?
Es menos efectiva con muestras coloridas, por lo cual se debe realizar mas diluciones, ademas de que es un poco dificultoso observar el punto de viraje y presenta ciertas interferencias
