CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA (PRÁCTICA No.2) Profesora: Catalina Vasco, PhD. Ayudante: Sr. Carlos Navas C. Barba, M., M., Inguillay, S. y Tamayo, Tamayo, P.
(
[email protected]) Grupo 3 (Martes) Fecha de realización: Martes 20 de agosto del 2013 Fecha de entrega: Martes 27 de agosto del 2013
ÍTEM Coloquio Participación Presentación y formato Resumen ejecutivo Tablas de datos y diagramas Cálculos Resultados y discusión Conclusiones y recomendaciones Subtotal PENALIZACIÓN Atraso en la entrega del informe TOTAL
PUNTAJE /3.0 /2.0 /0.5 /1.0 /1.0 /0.5 /1.5 /0.5
/10.0 /1.0
/10.0
RESUMEN EJECUTIVO: El planteamiento de la práctica posee dos objetivos en la aplicación de cromatografía de capa fina, primero, la separación de distintos pigmentos vegetales presentes en hojas de espinaca; para lo que se procedió a la extracción de la muestra por trituración, con mortero, y su disolución con acetona:éter (1:1); de la que se colocó una alícuota en la placa, previamente preparada, que luego se introdujo en la cámara de saturación con cloroformo:éter (3:7), durante media hora. Al cabo de lo que se extrajo la placa y se midieron las distancias recorridas por el eluyente y los pigmentos, y se calculó sus factores de retención ( ), de 0.750 para el pigmento verde (clorofilas), y 0.983 para el amarillo (carotenoides). El segundo objetivo era la identificación de sustancias no coloreadas, para lo que se siguió un proceso similar al anterior, pero sin disolución de las muestras, y empleando hexano como eluyente, además para medir las distancias en la placa se empleó una cámara UV, con lo que se concluyó valores de 0.283, 0.783, 0.842, 0.858 para los componentes del diesel, y 0.150 para el naftaleno, mientras para benceno y tolueno, no hubo coloración, y no pudo calcularse. Con lo que se concluyó, con las limitaciones de la técnica, que los pigmentos vegetales así como el diésel se componen componen de variadas sustancias, en el primer caso, de clorofilas y carotenos, y en el segundo, de alcanos y aromáticos principalmente.
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Tabla 5. Valores de serie eluotrópica (de
TABLAS DE DATOS
menor a mayor polaridad) de solventes en
Tabla 1. Distancias recorridas en la placa de
Silica Gel 20
separación de pigmentos vegetales Distancia del Eluyente= 12 cm Color de pigmentos Distancia [cm.] Verde 9.0 Amarillo 11.8
Tabla 2. Distancias recorridas en la placa de separación de sustancias no coloreadas (Diésel)
(Bidlingmeyer, 1992, p. 190)
Distancia del Eluyente= 12 cm Componente Distancias [cm] 1 3.4 2 9.4 3 10.1 4 10.3
CÁLCULOS La ecuación principal en esta práctica es el cálculo del factor de retención, mediante:
Tabla 3. Distancias recorridas en la placa de separación de sustancias no coloreadas (Naftaleno)
Distancia del Eluyente= 12 cm Componente Valores(cm) 1 1.8
Cálculo del Rf para las clorofilas
RESULTADOS Y DISCUSIÓN Tabla 4. Valores de factor de retención de Rf ideales para pigmentos vegetales. (Harborne,
Tabla 6. Valores de Rf obtenidos para los
1998, p. 231; Adds, Larkcom y Miller, 2004,
pigmentos vegetales
p. 14). Pigmentos Clorofilas (Tipo a) Carotenos (Tipo )
Rf (ideal) 0.60 0.98
Color de pigmentos Verde Amarillo
Rf 0.750 0.983
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Tabla 7. Valores de Rf obtenidos para los
comparación de Rf, se hizo más compleja ya
componentes del Diésel
que se tiene una gama tan amplia que fue difícil e incluso en cierta manera “erróneo”
Componente 1 2 3 4
Rf 0.2833 0.7833 0.8417 0.8583
compararlo con valores de otras experiencias. Además al ser incoloro y tener que emplearse una lámpara UV, el espectro de emisión de ésta, que pudo dejar invisibles o poco perceptibles parte de las muestras, así como como las
Tabla 8. Valores de Rf obtenidos para el Naftaleno Componente 1
erratas
de
observación,
complicaron
la
obtención de datos. Rf 0.15
Los datos calculados de Rf permitieron una comparación para conocer que compuestos se encontraron en el extracto de espinaca, al cotejar con valores de bibliografía, obtenidos de experiencias similares (Tabla 4.).
Sin embargo, al tomar en cuenta
que el
hexano empleado como eluyente es no polar y la sílica gel polar, a partir de polaridad de las muestras “serie eluotrópica” (Tabla 5.) se estableció que las muestras más polares (benceno y tolueno), difícilmente pudieron ser disueltas por el eluyente, a diferencia de las
Aunque no se pueden considerar los valores Rf como constantes universales, ya que pequeñas variaciones en el método o incluso en el material (estructura) empleado, las modifican, siendo una debilidad de la técnica, se observó
menos polares (naftaleno). Por lo que al considerar el diésel, se pudo inferir que en su composición
se
hallaban
especialmente
hidrocarburos saturados alifáticos, así como aromáticos.
una relación cercana entre el valor para el pigmento verde y la clorofila en especial la
CONCLUSIONES
tipo A, y entre el pigmento amarillo y lo carotenoides en especial el -caroteno, lo que permitió concluir su equivalencia, al menos como una buena aproximación. En el caso del diésel, que se halla formado por cientos de compuestos de variado tipo, la
Se consideró, valores de Rf de bibliografía y por comparación con los obtenidos (Rf. verde=0.750, Rf. Amarillo=0983), en el caso del extracto de espinaca, se pudo concluir que está formado esencialmente de de carotenoides carotenoides y clorofilas.
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La adición de colorantes, reactivos con las
Para los compuestos no coloreados, del
muestras podrían facilitar el análisis de
naftaleno
los compuestos no coloreados.
se
pudo
concluir
que
es
prácticamente puro, aunque poco perceptible (Rf=0.15), en el caso del benceno y tolueno,
BIBLIOGRAFÍA:
muy probablemente porque su espectro de absorción se hallaba lejano del de emisión de
Harborne,
J.
(1998). Phytochemi Phytochemical cal
la lámpara, y por su diferencia de polaridad
Methods A Guide to Modern Technique Techniquess
con el eluyente su análisis fue imposible, en el
of Plant Analysis. (3ra. Ed.). Londres,
diésel su amplia cantidad de componentes
UK: Thomson Science.
(Rf1=0.283, Rf2=0.783, Rf3=0.842, Rf4=
Adds, J., Larkcom, E. y Miller, R. (2004).
0.858) impidió una identificación clara, sin
Genetics, Evolution and Biodiversity).
embargo, por consideraciones de polaridad, se
(1ra. Ed.). Londres, UK: Nelson Thornes
pudo concluir que en su mayoría se compone
Ltd.
de alcanos alifáticos alifáticos y aromáticos, aromáticos, que son los
más comunes en el petróleo del que se extrae.
Lee, M. (1981). Analytical Analytical Chemistry of Polycyclic Polycyclic Aromatic Compounds. (1ra.
Ed.). New York, EUA: Academic Press,
RECOMENDACIONES
Inc.
B.
(1992). Practical Practical
Para la aplicación de la cámara UV, se
HPLC: Methodology Methodology and Applications.
deberían analizar compuestos que tengan
(1ra. Ed.). New York, EUA: John Wiley
el mismo espectro de absorción, en el que
& Sons, Inc.
emite la lámpara.
Bidlingmeyer,
Reichardt, C. (2003). Solvents and
Para una mejor observación de los
Solvent Effects in Organic Chemistry.
componentes del extracto vegetal, se
(3ra. Ed.). Ed.). Weinheim, Weinheim, Alemania: Wiley-
deberían fijar cantidades específicas de
VCH Verlag GmbH & Co.
hojas y solvente durante la extracción (p. ej. 10 g. de hojas con 50 mL. de solvente, (Ocampo, Ríos, Betancur y Ocampo, 2008, p. 86).
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ANEXOS:
Imagen 1. Placas de cromatografía de capa fina de pigmentos vegetales.
Imagen 2. Placas de cromatografía de capa fina bajo luz UV, de compuestos no coloreados
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