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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL ESCUELA SUPERIOR DE INGENIERÍA QUÍMICA E INDUSTRIAS EXTRACTIVAS EXTRACTIVAS Laboratorio De Químia !e "o# $i!roarburo# Re%orte !e %r&tia '()*
Cromato+ra,ía e- %"aa .-a / o"um-a
Nombre !e" a"um-o0 Tora" Garía 1or+e Mario
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O41ETIVOS
De.-ir e" o-e%to !e romato+ra,ía / a%"iar"o e- "a %uri.ai5- !e om%ue#to# 6 I-!iar e- 7ue o-#i#te "a romato+ra,ía !e a!#ori5- / "a !e %artii5-
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ALCANCES
Documentarse en conceptos de mezcla, pureza, propiedades físicas y químicas de la materia.
METAS
!reparar las placas "nas o cromatoplaca , y los aplicadores
!reparar la c#mara cromatogra"c a
!reparar las muestras
Aplicaci$n de las muestras desarrollo de la placa
Leer con detenimiento el desarrollo de la practica
Analizar cuidadosamente You're Reading a Preview cada una de las latrial. Unlock fulletapas access withde a free técnica de cromatografía Download With Free Trial
E8%"iar e" o-e%to !e %o"ari!a! eromato+ra,ía E#tab"eer "a re"ai5- / "a !i,ere-ia 7ue e8i#te e-tre "a romato+ra,ía e- %"aa .-a / "a %re%arati9a
Consultar la tabla %evelado de de toxicidad de las placas los reactivos y productos Sign up to vote on this title Determinaci$ empleadosenUseful el Not useful del %f experimento
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me!ia-te %"aa# %re%arati9a#
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Determi-ar e" R, !e "a# #u#ta-ia# #e%ara!a#
Investigación bibliográfica sobre el tema. Cromatografía:
La cromatografía es uno de los principales métodos para la separación de especies químicas estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La You're a Preview cromatografía es un método físico deReading separación basado en la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y Unlock full access with a free trial. otra móvil.
Download WithlaFree Trial se disuelve en una fase En todas las separaciones cromatogrficas muestra móvil, que puede ser un gas un líquido o un fluido supercrítico. Esta fase móvil se hace pasar a través de una fase estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija en una columna o sobre una superficie sólida. Las fases se eligen de tal forma qu los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase móv y la fase estacionaria. !quellos componentes queSign sonupretenidos contitle ms fuerza to vote on this por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo" por el contrario los Useful Not useful componentes que unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez #omo consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas discriminadas que pueden analizarse cualitativa y$o
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El proceso es similar a la cromatografía de papel con la ventaja de que se desarrolla ms rpidamente, proporciona mejores separaciones y se puede elegi entre diferentes adsorbentes. La ##& es una técnica estndar en el laboratorio d química orgnica. )ebido a su simplicidad y velocidad, la ##& se utiliza a menud para monitorizar las reacciones químicas y también para el anlisis cualitativo de los productos de una reacción, puesto que permite conocer de manera rpida y sencilla cuntos componentes hay en una mezcla Procedimiento
*na placa de ##& es una lmina de vidrio, metal o plstico recubierta con una capa delgada de un sólido adsorbente %gel de sílice o al(mina'. +e deposita una pequea cantidad de la muestra problema en disolución en un punto en la parte inferior de la placa.
Entonces la placa se introduce en una cubeta cromatogrfica, de forma que sólo parte inferior de la placa queda sumergida en el líquido. Este líquido o eluyente e la fase móvil y asciende por la placa de ##& por capilaridad. ! medida que el eluyente pasa por el lugar donde est la mancha de la mezcla You're entre Reading Preview de cada uno de los problema se establece un equilibrio lasamoléculas componentes en la mezcla que son adsorbidas y las que se encuentran en Unlock full access with a free trial. disolución.
With Free Trial En principio, los componentesDownload se diferenciarn en solubilidad y en la fuerza de su adsorción, de forma que unos componentes se desplazarn ms que otros. #uando el eluyente llega a la parte superior de la placa, esta se saca de la cubeta se seca, y los componentes separados de la mezcla se visualizan. Visualización de las manchas
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+i los compuestos son coloreados se pueden observar las manchas a simple vist +i no es así, hay varios métodos para visualizar las manchas correspondientes a
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Cálculo del factor de retención Rf
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#uando son visibles, se puede determinar para cada una de las manchas el valor de 3f %factor de retención', o la distancia que cada compuesto se desplaza en la placa. #ada compuesto tiene un 3f característico que depende del disolvente empleado y del tipo de placa de ##& utilizada, pero es independiente del recorrid del disolvente. )e esta manera se puede ayudar a identificar un compuesto en un mezcla al comparar su 3f con el de un compuesto conocido %preferiblemente cuando se hacen eluir en la misma placa de ##&'.
#romatografía en columna Es una técnica de purificación, puesto que permite aislar los compuestos deseados de una mezcla. Procedimiento
You're Reading a Preview Unlock full access with a free trial.
La cromatografía en columna utiliza una columna de vidrio vertical que se llena con un soporte sólido adsorbente %fase estacionaria4 Download With Free Triallos ms utilizados son gel de sílice %+i5' y al(mina %!l56''7. La muestra que se quiere separar se deposita en la parte superior de este soporte. El resto de la columna se llena con el eluyente %disolvente que constituye la fase móvil' que, por efecto de la gravedad, hace mover la muestra a través de la columna. +e establece un equilibrio entre e soluto adsorbido en la fase estacionaria y el disolvente quetitle fluyepor la Sign upeluyente to vote on this columna. )ebido a que cada uno de los componentes de una Not usefulestablecer Useful mezcla interacciones diferentes con la fase estacionaria y la móvil, sern transportados a diferentes velocidades y se conseguir su separación. !sí, de manera similar a
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separación de los componentes de la mezcla. +i por el contrario el disolvente es muy apolar, no eluirn los compuestos de la columna. 8or lo tanto, la elección de eluyente es crucial para el é2ito de la cromatografía en columna. ! menudo se utiliza un gradiente creciente de polaridad para la elución. La ##& se utiliza para determinar y elegir el sistema solvente adecuado para cada separación.
En 9:;< se introdujo una versión modificada denominada cromatografía en columna rpida. La diferencia con la cromatografía en columna tradicional es que en la técnica rpida el disolvente se hace atravesar la fase estacionaria aplicando una presión positiva. Esto hace que las separaciones mejoren en resolución y se pueda disminuir el tiempo de elución, por lo cual constituye un método de elecció
Análisis de los eluatos de la columna
+i los compuestos separados en una cromatografía en columna son coloreados, progreso de la separación se puede monitorizar visualmente. 1o obstante, a menudo los compuestos que deben ser aislados suelen ser incoloros. En este caso, se recogen secuencialmente pequeas fracciones de eluatos en tubos Reading se a Preview rotulados y la composición de You're cada fracción analiza por cromatografía en capa fina. *na vez identificadas lasUnlock diferentes fracciones que contienen el mismo full access with a free trial. producto, se re(nen, se elimina el disolvente y se analiza la identidad de los componentes por métodos espectroscópicos. Download With Free Trial
DESARROLLO DE LA PR;CTICA C%'(A')%A*&A + !LACA (A+%&AL A -&L&A%/
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7.3preparacion de los aplicadores.
;. se aplican las muestras con los microaplicadores y se de0an secar
You're Reading a Preview 6. !%+!A%AC&' D+ LA< CA(A%A< C%'(A')%A*&CA
a2 se coloca el disolvente en la c#mara en la cantidad su"ciente y necesaria para que el nivel del disolvente quede por deba0o de las Download With Free Trial aplicaciones de las muestras.
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=. se de0a correr el disolvente 9asta cierta altura, teniendo cuidado de que el disolvente de la c#mara no toque el origen de las muestras, y que la c#mara este totalmente cerrada.
You're Reading a Preview Unlock full access witheste a free trial. >. sacar las placas y de0arlas secar, paso es el revelado de placa
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Costo beneficio (con respecto a otros medios de realización de la práctica)
Técnicas cromatográficas
9. #romatografía en capa fina. 8or este método se pueden analizar mezclas de aminocidos. La muestra para anlisis se aplica por medio de un tubo capilar en la superfic de una capa fina adsorbente en forma de banda, punto o mancha y es adsorbida en la superficie por la acción de fuerzas electrostticas %&uerzas de -an der. =aals, puentes de hidrogeno, efectos inductivos, etc'. Los adsorbentes ms utilizados son gel de silica, alumina, tierra silícea, celulosa y poliamidas. #omo soportes del adsorbente se utilizan laminas o placas de vidrio, plsticas o metlicas, You're Reading a algunas Preview placas tienen indicador de fluorescencia 4 f/0 ó f6>>. Unlock full access with a free trial.
La placa seca se coloca en el tanque cromatogrfico o cmara, en el cual Download With Free Trial debe encontrarse saturado el eluente %&ase ?óvil líquida'.El eluente ascender o desplazara por capilaridad en la placa y arrastrar los componentes a lo largo de ésta produciendo @manchasA que representan a los componentes, la separación se da por migración diferencial, es decir que la fase móvil arrastra a las substancias apolares y aquellas ms polare son retenidas por la fase estacionaria dando lugar a la separación. Sign up to vote on this title 8osteriormente se evapora el eluente y la placa se analiza por medio de Useful useful derivados métodos químicos en el que por inmersión o rociado seNot obtienen coloreados o fluorescentes %!dición de 1inhidrina a aminas, Bcido sulf(ric para carbonizar compuestos orgnicos, etc', o por medio de métodos
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. #romatografía en papel. El proceso es bsicamente el mismo, solo que se usan tiras de papel cromatogrfico en el tanque cromatogrfico.
6. #romatografía en #olumna. +e utilizan columnas de vidrio rellenas de !l(mina %!l56', +ílica u 52ido de ?agnesio. La fase estacionaria esta constituida por un sólido poroso, e cual queda soportado en el interior de una columna generalmente fabricad en plstico o vidrio. La fase móvil se encuentra formada por la solución que lentamente va atravesando la fase estacionaria. La solución que sale al fin de la columna se reemplaza constantemente por nueva solución que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna. La migración de las sustancias de la mezcla a través de la columna se encuentra retardada en diferente grado por las interacciones diferenciales que cada una de ellas pueda ejercer con la fase estacionaria. Las sustancias se separan gradualmente formando bandas dentro de la banda total, la separación, y por tanto la resolución, aumenta con la longitud de la columna. La banda individual de cada sustancia puede ensancharse con e tiempo debido a procesos difusiónales, disminuyendo por tanto la resolución.
You're Reading a Preview 0. #romatografía de gases. +e utiliza para la separación de sustancias gaseosas. La &ase ?óvil es un Unlock full access with a free trial. Das %llamado Das 8ortador' y la &ase Estacionaria puede ser un sólido %#romatografía Das+ólido' o una 8elícula de líquido de alto punto de Download With FreeoTrial ebullición %Deneralmente 8olietilénDlicol +ilicón' recubriendo un sólido inerte %#romatografía DasLíquido'. El cromatógrafo de gases esta constituido normalmente por un suministro una entrada del gas portador, un puerto de inyección, una columna normalmente localizada en el interior de una cmara termostatizada %horno', un detector y un sistema computarizado para analizar, registrar e Sign up to vote on this title imprimir el cromatógrama. La muestra se introduce a través del sistema de Not useful Useful inyección dentro de la columna que es el sitio donde ocurre la separación. La columna de aluminio, acero ino2idable, vidrio o teflón contiene la fase estacionaria sólida o líquida y esta sujeta a la superficie por un soporte que
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pico.
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/. #romatografía Liquida de alta eficiencia o rendimiento %F8L#'. Es una #romatografía de alta presión es decir se aplica el flujo a presión %entre 9/GG a GG psi'. El tamao de partícula es entre 6 y 9G micras, la longitud de la columna es entre / y / cm. y requiere de equipo sofisticado +e pueden analizar muestras proteicas. La reducción del tiempo en que la sustancia se encuentra en el interior de la columna, limita el ensanchamiento por difusión de las bandas, aumentando por tanto la resolución. El sistema F8L# requiere una mezcladora de solventes, un inyector, y una bomba que inyecte el líquido a la columna. Deneralmente las columnas de sílica requieren alta presión para que el flujo de líquido sea adecuado, la mezcladora se requiere para variar la proporción de solvente en la fase móvil y el inyector permite la aplicación de la muestra. ! la salida de la columna se coloca un detector generalmente de absorción ultravioleta o de fluorescencia y si se desea recuperar las moléculas que eluyen de la columna, se requiere un colector. En los sistemas modernos el anlisis de la información obtenida se realiza mediante una computadora acoplada al equipo" lo que permite estandariza la cromatografía, identificar la naturaleza los picos eluídos y cuantificar su You're Reading a Preview contenido. Los picos se relacionan seg(n su Htiempo de retenciónH con estndares, full access with a free trial. que permiten identificarUnlock los aminocidos presentes en la mezcla. La cantidad relativa de cada uno de ellos se determina calculando el rea la Download With Free Trial curva del pico correspondiente.
>. #romatografía de intercambio iónico. La &ase Estacionaria es una resina de intercambio iónico que contiene grupos cargados, teniendo la propiedad de separar especies ionizadas %#ationes o !niones'" la &ase ?óvil es generalmente una solución Sign up to vote on this title amortiguadora de pF. En proteínas la cromatografía de intercambio iónico Useful Not useful se basa en las diferencias en signo y magnitud de la carga eléctrica neta d las proteínas a un valor de pF determinado. La afinidad de cada proteína a los grupos cargados de la columna esta
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Las proteínas de mayor tamao migran ms deprisa a lo largo de la columna que las de pequeo tamao, debido a que son demasiado grande para introducirse en los poros de las bolas de polímero y por tanto siguen una ruta ms corta y directa a lo largo de la longitud de la columna. Las proteínas de menor tamao, entran en los poros y su marcha a lo largo de la columna es ms lenta.
<. #romatografía de !finidad. La #romatografía de !finidad permite la separación de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de unión a un determinado ligando. En este caso, las proteínas que se retienen en la columna son aquellas que se une específicamente a un ligando que previamente se ha unido covalentement a la matriz de la columna. )espués de que las proteínas que no se unen al ligando son lavadas o eluidas a través de la columna, la proteína de interés que ha quedado retenida en la columna se eluye o libera mediante el empleo de una solución que contiene bien ligando libre u otro compuesto que rompa la interacción entre el ligando y la proteína. You're Reading a Preview
3especto a estos métodos analizados, se siguiere que por costos y complejidad, full access with a free trial. que se realice la cromatografíaUnlock en placa fina, papel o columna, ya que estos tres métodos son los ms apropiados para la prctica del laboratorio de química de lo Download With Free Trial hidrocarburos.
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Usos y Aplicaciones de la Práctica
El campo de la cromatografía es muy amplio, donde haya productos orgnicos, a tiene aplicación la cromatografía, pero como los cromatógrafos, no son baratos, casi siempre se limitan a empresas muy grandes, transnacionales, o que tengan una cantidad de producción enorme por día. !lgunos ejemplos de aplicación4 9. )eterminación del porcentaje de formación de la molécula de síntesis, en una planta de síntesis orgnica. . )eterminación de porcentaje de solvente en un producto agroquímico terminado.
You'rede Reading a Preview 6. determinación de concentración producto activo, en un producto agroquímic terminado. Unlock full access with a free trial.
0. control de calidad de pureza de solventes, como alcohol etílico anhidro, tolueno 2ileno, benceno, que entran como materias a una planta. Download Withprimas Free Trial /. determinación del contenido de principio activo de un antitusivo en una planta de medicamentos.
>. determinación de concentración de alcohol bencílico, en un producto inyectado en una fbrica de medicamentos. Sign up to vote on this title
Useful Not ;. control de calidad de la pureza de materias primas entrantes a useful bodega de una fbrica de productos medicinales, tales como4 alcohol etílico al :/I, propilenglico glicerina, alcohol isopropilico, otoluidina, paracetamol, butanol, o ctanol,
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9G. en fbricas de alimentos, para control de calidad de producto terminado y materias primas, tales como4 proteínas, sabores, sustancias que dan el olor, o se aromatizantes, pues algunos son sintéticos, como el olor a pollo, y solo este tiene variantes, como pollo con barbacoa, pollo frito, pollo asado, determinación de colorantes. 99. En la industria petrolera, es un método indispensable, para analizar las composiciones de casi todos los productos que van saliendo, del cracJing, los tipos de gasolinas, los compuestos orgnicos destinados a síntesis. 9. En el #51K35L de la producción vinícola, tiene infinidad de usos, desde usarse como una nariz electrónica, para caracterización de vinos, de acuerdo a parmetros previamente establecidos por e2pertos, concentración de componentes, anlisis de aminas, como etanolamina, etilamina, agmatina, triptamina. )eterminación de ocrato2ina!.
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nterpretación de los espectros:
La placa utilizada con la solución !, se puede Unlock full access with a free trial. observar que hay una separación parcial de los Download With Free Trial colorantes utilizados, los espectros revelados nos indican que la solució ! es una medianamente polar. You're Reading a Preview
La placa utilizada con la solución , no se pueden observar cambios con respecto a la placa antes deSign absorber laonsolución, up to vote this title la falta de espectros nosindica solución no es Usefulque Not useful ésta polar.
La placa utilizada con la solución #, se puede
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+e definió el concepto de cromatografía y se aplicó en la purificación de compuestos, así como se indicó en qué consiste la cromatografía de adsorción. +e estableció la relación y la diferencia que e2iste entre la cromatografía e placa fina y la preparativa, también se concretó el conocimiento de la polaridad en una sustancia y su influencia en la cromatografía, el cual nos dice que la fuerza con que es absorbido un componente depende de la polaridad de éste, de la actividad del absorbente y de la polaridad de la fas móvil. En general, cuando ms polar sea un compuesto, es ms fcilmente absorbida. +e definió y se entendió el concepto y la determinación del 3f de las sustancias separadas +e desarrolló la cromatografía en placa y en columna para poder separar los colores que contenía un colorante.
#onclusión general4
)espués de la realización de esta prctica de la interpretación de los resultados obtenidos, se concluye que por medio de la cromatografía es posible identificar lo componentes de una mezcla, adems de que se trabajó con soluciones polar, no polar y medianamente polar, las cuales nos indican que las soluciones polares so Reading a Preview mejores en el empleo de esta You're prctica para poder observar los espectros y así calcular el 3f. Unlock full access with a free trial.
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"bser#aciones:
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!l realizar la prctica al utilizar las soluciones pudimos notar que la solución # er la solución polar, ya que esta pudo desplazar el colorante de manera uniforme en la placa cromatogrfica, la solución no desplazó nada el colorante, y la +olución ! lo desplazó dejando pequeas marcas en la placa El gis al utilizar la solución # desprendió un pequeo color amarillento que se desplazó hasta el final !l realizar la cromatografía en columna y al poner el colorante junto con la solución #, el colorante se separó en 6, dos eran tono de azul muy parecidos y había uno color morado.
$ibliografía:
http4$$MMM.ub.edu$oblq$oblqIGcastellano$cromatografiaNtipus.htmlOsimple http4$$laboratoriotecnicasinstrumentales.es$cromatografa You're Reading a Preview
http4$$es.MiJipedia.org$MiJi$8olaridadN%quI#6I!)mica' Unlock full access with a free trial.
Fernndez Luna Feliodoro. %GG;'. 0P edición, Química orgnica e2perimental a escala semi micro y fundamentos de la espectroscopia. R81, ?é2ico, 8p. 99:966 Download With Free Trial
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