Descrição: relatório sobre cromatografia de coluna
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Cromatografía de líquidos HPLC
Descripción: cromatografia
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Cesar Camilo Navarro Diana Baquero Sergio Heli Triana María Paula Contreras
Individuos Pigmento
Color
H
M
H
M
White Apricot H M
Silvestre
White
Sepia
Plum
Vermilion
X
H
M
H
M
H
M
H
M
Isosepiepterina
Amarillo
Si
Si
No
No
No
No
No
No
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Biopterina 2-amino-4hidroxipterina Sepiapterina
Azul ++
Si
Si
No
No
Si
Si
No
No
Si
No
Si
Si
Si
Si
Azul +
No
No
No
No
No
No
Si
Si
No
Si
No
No
No
No
Amarillo
Si
Si
No
No
No
No
No
No
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
No
No
No
No
Si
Si
No
No
No
No
Si
Si
No
No
No
No
No
No
No
No
No
No
No
No
No
No
Si
Si
No
No
No
No
No
No
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Xantopterina Isoxantopterina Drosopterina
VerdeAzul VioletaAzul Naranja
a) En el fenotipo silvestre no se encontraron los pigmentos 2-amino-4hidroxipterina ni la isoxantopterina. Estos pigmentos corresponden a los colores azul claro y azul-violeta respectivamente. El azul violeta no se encontró en ninguno de los silvestres ni mutantes. El azul claro fue solo característico de mutantes como sepia y plum. Una posible explicación es que el pigmento azul claro sea resultado de una mutación del pigmento azul oscuro, el cual si se encontró en las silvestres y otras mutantes.
b) La diferencia más notable es que las mutantes sepia no mostraron ningún pigmento amarillo como lo reporta Hardon. Con respecto a los pigmentos azules sí se observa similitud. Una posible explicación para la presencia de la sepiapterina es la etapa del ciclo de vida donde se encontraba sepia ya que posiblemente esta pteridina no se expresa en esa etapa en la que se encontraban las moscas del laboratorio. c) Los mutantes White no presentaron ninguno de los pigmentos de las moscas silvestres. Las moscas white apricot solo presentaron biopterina a niveles mas bajos. Otras mutantes como sepia muestran pigmentos que las silvestres no expresan. Esas serian como las diferencias mas apreciables. Los pigmentos amarillos y naranjas se expresan de igual forma en los mutantes vermilion y plum. Estas diferencias indican que para el mutante sepia debe haber una ruta bioquímica que se activa a diferencia de las otras moscas que hace que se produzcan 2-amino4hidroxipterina. Además es claro que los mutantes white expresan pigmentos debido a que como se sabe, white inactiva los transportadores de todos los pigmentos. d) La única diferencia notable de cambio de pigmentos en el sexo se dio en el mutante plum. Se dio en los pigmentos 2-amino-4-hidroxipterina y biopterina. La explicación que se le dio a esto es que como se vio en clase, plum es un mutante que cambia mucho de color de ojos dependiendo de su estadio de vida. Posiblemente las hembras estaban en una etapa diferente a los machos ya que no tenemos certeza de sus periodos de vida en el momento de realizar el laboratorio. Otra posible explicación es que las rutas metabólicas estén influenciadas hormonalmente, que los machos necesiten cierto color de ojos para atraer la atención de las hembras en el cortejo. e) Vermilion tenia como pigmentos principales el naranja y el amarillo los cuales corresponden a drosopterina y sepiapterina y/o isosepiapterina. En general vermilion presenta las mismas pteridinas del fenotipo silvestre. Esto tiene sentido ya que la cromatografía detecta las pteridinas, no los homocromos y en el mutante vermilion, el corte en la ruta bioquímica se da en los homocromos por lo que el cromatograma no debería mostrar diferencia en cuanto a las pteridinas. f) El fenotipo white-apricot presenta un color de ojos ligeramente naranjados. Como se ve en el cromatograma tanto white como white apricot son poco visibles con la única diferencia de un leve pigmento azul oscuro en white-apricot. Esto indica que al igual que white, white apricot corta tanto la ruta de homocromos como la de pteridinas, la única diferencia es que el corte de las pteridinas se da un poco después que en white, permitiendo la formación de al menos una pteridina (suponemos biopterina). Esto se explica mejor en el siguiente grafico:
Figure 1. sacada de http://www.public.asu.edu/~thoffman/commonfiles/lsc348/lsc348drosophilaeyepigment.pdf
Seguramente white apricot permite el transporte de las primeras pteridinas al no inhibir las enzimas que las forman. g) La mosca X presenta un cromatograma muy similar a vermilion y al fenotipo silvestre es decir presenta la mayoría de los pteridios (el naranja, amarillo, verde, y algún azul). Esto tiene sentido debido a que bajo el estereoscopio, el mutante X se suponía que era bar (aunque nosotros no vimos la forma de ojo característica de bar). Esta mutación afecta entre otras cosas la forma del ojo, pero no el color del ojo de una mosca normal. Es por eso que los pigmentos no deberían cambiar a los del tipo silvestre. h)
A mayores valores de Rf, mayor es el desplazamiento de las pteridinas. Como no se evidencio isoxantopterina no se reporto un Rf. La cantidad que se desplazan las pteridinas depende de qué tanta afinidad tengan con el solvente, así se observa que el pigmento 2-amino-4-hidroxipterina es el que tiene más afinidad con el solvente, mientras que la Isosepiepterina no presenta afinidad. Además
influyen factores como tamaños moleculares para pasar por las porosidades de los papeles. BIBLIOGRAFÍA -
Hadrón, E., 1962 Fractionating the fruit fly. Scientific American 206 (4): 100110,
-
Tara C. (2001) Genotype to phenotype investigating eye color mutations using chromatography. Truman State University.
