GUIA Microbiologia

GUÍA PRÁCTICA

7

1

0

2

DE MICROBIOLOGÍA

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” ACCIÓN DE LOS AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS SOBRE LOS MICROORGANISMOS. CONTROL MICROBIANO La inhibición del crecimiento y la destrucción de microorganismos patógenos se realizan ya sea por medios físicos o químicos. Algunos métodos de control microbiano solo se aplica a objetos inanimados, en tanto que otros muestran una toxicidad selectiva y pueden utilizarse in vivo.

Agentes físicos: El control de microorganismos potencialmente patógenos patógenos se lleva a cabo p or métodos físicos mediante la desinfección o la esterilización. Entre estos tenemos: a. Calor. El calor es el método de elección más usada para la esterilización de todos los materiales, excepto los que puedan ser alterados alterados por él.

Llama directa

Para esterilización del asa bacteriológica

Esterilización con calor seco

Se hace uso del horno, para esterilizar materiales como placas Petri.

Esterilización con calor húmedo

Se usa el autoclave.

2

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión”

Pasteurizació n

Consiste en el calentamiento a 62°C durante 30 minutos tres veces. Se utiliza en alimentos.

b. Congelación. Los cristales de hielo pueden lesionar a las bacterias. c. Radiación ultra violeta. Cuando se usan radiaciones de onda cada vez más cortas a partir de 330 nm se produce esterilización bacteriana, lesiona el DNA bacteriano que impide su replicación. d. Radiaciones ionizantes. Pueden utilizarse fuentes de radiactividades intensas para esterilizar materiales hospitalarios, alimentos, etc.

Agentes mecánicos: a. Ondas sónicas y supersónicas .- Los ultrasonidos (con frecuencias que oscilan entre 15,000 y varios centenarios de miles de vibraciones por segundo) desnaturalizan proteínas y destruyen bacterias. b. Filtración .- Si se utilizan filtros con poros menores de 1nm, se pueden obtener filtrados libres de bacterias. Esto se utiliza con soluciones que no se pueden esterilizar con calor.

Agentes Químicos: La acción de las sustancias químicas varía dependiendo de la composición fisicoquímica del medio ambiente, la concentración, T° y el tiempo que dura este contacto. En relación al efecto biológico se tiene una acción “bactericida”, es decir, destrucción de la bacteria; y una acción “bacteriostática”, ósea que inhibe el

crecimiento bacteriano. Tenemos a los desinfectantes, y antisépticos.

Metales pesados Halógenos Agentes alquilantes Agentes con propiedades tensioactivas o tensoactivas Fenoles Alcoholes Material. Cultivos bacterianos de Bacillus, E.coli, Salmonella, Pseudomonas. Tubos con caldo BHI o nutritivo Placas con agar BHI o nutritivo Discos estériles de papel de filtro Pinza estéril Hisopos o torundas estériles Frascos con alcohol, fenol, mertiolate, mercurio cromo, violeta de genciana.

3

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Asa bacteriológica

Procedimiento. 1. Sembrar en tres tubos con caldo nutritivo pH7 por agitación, incubar por 18-24 horas, uno a 60°C, otro a 37°C, y finalmente otro a 4°C.

2. Introduzca un hisopo estéril es la cepa bacteriana, y siembre en toda la superficie de la placa con agar BHI o nutritivo, deje reposar 5 minutos y proceda a colocar los discos de papel de filtro embebidos en los diferentes desinfectantes y antisépticos (un disco para cada desinfectante o antiséptico) coloque una a distancia prudente del otro. Luego incube las placas a 35-37°C por 18-24 hrs.

VIOLETA DE GENCIANA

LEJIA

AGUA OXIGENADA

Resultados. 1. En los tubos incubados a diferente temperatura observe si hubo crecimiento por la presencia o ausencia de turbidez. Explique a que se debe ese resultado. 2. En los tubos sembrados a diferentes pH, también observe si hubo crecimiento por la presencia y ausencia de turbidez, anote los resultados y explique el p or qué.

4

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” 3. Observe alrededor de los discos impregnados con cada uno de los deferentes antisépticos o desinfectantes, si hay o no un halo alrededor, que demuestra si el agente químico es eficaz o ineficaz para actuar contra el microorganismo. Anote todos los resultados y explique por qué algunos químicos son eficaces y otros no.

AGENTE FÍSICO: TEMPERATURA

4° C

37° C CRECIMIENTO NORMAL

60° C

AGENTES QUÍMICOS:

INMUNOLOGÍA. REACIONES DE AGLUTINACIÓN. Tradicionalmente el diagnóstico definitivo pasa por la identificación, el aislamiento en cultivo puro del patógeno; de este modo la morfología, actividad bioquímica y patrón de sensibilidad a los antimicrobianos podrán ser examinados y evaluados.

5

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Sin embargo algunos microorganismos no se pueden cultivar in vitro como Treponema palli du m, My cob ac ter i um L epr ae y en algunos otras enfermedades infecciosas un diagnóstico serológico es mucho más económico y rápido, pero n o definitivo. El método serológico tradicional demuestra una respuesta de anticuerpos específicos humorales contra los microorganismos en cuestión. Ejemplos de reacciones serológicas de aglutinación son las pruebas para anticuerpos contra B rucella y Salmonella que son parte de un panel de pruebas para aglutinaciones febriles.

Aglutinación bacteriana Una de las aplicaciones de aglutinación bacteriana es la llamada prueba de “Reacciones febriles” que está basada en la investigación de la presencia de aglutininas contra la fiebre tifoidea, La brucelosis y el tifo, que indican que el individuo padece enfermedad o que ha estado en contacto con el germen (antígeno) sin llegar a contraerla. Estas reacciones febriles comprenden la Reacción de Widal para la fiebre tifoidea y paratifoidea , La Reacción de Huddlesson para la brucelosis y La Reacción de Weil- Félix para el tifo .

REACCIÓN DE WIDAL

REACCIÓN DE HUDDLESSON

REACCIÓN DE WEIL-FÉLIX

La reacción de Widal utiliza como antígeno una sepa de Salmonella Typhi en fase O (o sea sin flagelos) y otra en fase H (flagelo). Además se tienen otros antigenos Salmonella paratyphi A-B.

Se lleva a cabo con antígeno de Brucella abortus para detectar anticuerpos contra fiebre de malta.

La reacción de Weil-Félix utiliza Proteus OX-19 como antígeno para detectar anticuerpos contra Rickettsia prowaseki, debido a que posee los mismos antígenos y por la facilidad de su manejo en el laboratorio.

Material. Suero de paciente Antigeno (t ifico O y H, paratífico A y B, brucela, proteus OX -19. Láminas de vidrio para aglutinaciones Pipetas serológicas de 0,2 ml Palitos mondadientes

Procedimiento: Técnica cualitativa:

6

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” 1. Colocar una gota de suero problema en cada uno de los espacios marcados en la lámina 2. Agregar una gota de cada uno de los antígenos sobre la gota de suero problema ANTIGENO H

ANTIGENO O

ANTIGENO PA

ANTIGENO PB

ATG. BRUCELLA

3. Mezclar uniformemente con un mondadientes cada gota, rotar la lámina por 3 minutos y observa los resultados.

Lectura. Positivo: Aparición de grum os de tamaño variables que tienden a agruparse en la superficie de la gota. Negativo: La mezcla permanece homogénea. Técnica cuantitativa. 1. Con una pipeta de 0,2 ml. Depositar 0,08, 0,04, 0,02, 0,01, 0,005 del suero problema en la lámina. 2. Añadir una gota de antígeno que dio aglutinación en la prueba cualitativa a cada cuota del suero. 3. Con el mondadientes mezclar y rotar la lámina durante 3 minutos.

Lectura: Realizar la lectura teniendo en cuenta la presencia de grumos de acuerdo a la siguiente equivalencia:

Suero problema:

Título:

0.08 ml 0,04 ml 0,02 ml 0,01 ml 0,005 ml

1/20 1/40 1/80 1/160 1/320

Títulos mayores de 1/80 tienen significación diagnóstico para Salmonella. Títulos mayores de 1/100 tienen significación diagnóstico para Brucella.

Resultados: Títulos de Suero Antígeno 1/20

1/40

1/80

1/160

1/320

7

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Tífico O Tífico H Paratífico A Paratífico B Brucella

1/25

1/50

1/100

1/200

1/400

ANTIBIOGRAMA. RESISTENCIA BACTERIANA A LOS ANTIBIÓTICOS. Muchas bacterias presentan resistencia a los agentes antimicrobianos. Los patrones de resistencia cambian en forma constante. No importa cuán rápidamente se introducen los nuevos agentes terapéuticos, los microorganismos parecen estar dispuesto a sobrepasarles. Cuando no se conoce o no se puede predecir la susceptibilidad de las bacterias, a los agentes antimicrobianos, es necesario estudiar la sensibilidad individual a estas drogas, pudiendo elegir entonces el agente adecuado, que proporciona mayores posibilidades de una evolución favorable. Para realizar las pruebas de sensibilidad in vitro, es necesario emplear un inóculo estándar que contenga 10 6 a 10 8 microorganismo por ml; un medio de cultivo que no interfiere con la eficacia de los antibióticos ni con el crecimiento del microorganismo, en cantidad conocida y un pH regulado como el Miuller Hinton en caldo o Agar medio suplementado con los cationes magnesio y calcio.

ANTIBIOGRAMA POR DILUCIÓN-CUANTITATIVO Método que sirve para evaluar cuantitativamente la actividad de un antibiótico. Se colocan concentraciones de creciente del agente antimicrobiano, en tubos con caldo de cultivo Miuller Hinton que sostendrá el desarrollo del microorganismo, luego se inocula el microorganismo. Un tubo de caldo se mantiene sin el antibiótico y es conocido como el control, luego se llevan a incubar todos los tubos y al día siguiente se observa la turbidez que indicara desarrollo bacteriano. El microorganismo crecerá en el tubo control y en todos los otros que no contengan suficiente agente antimicrobiano como para inhibir el desarrollo. La concentración más baja que impide el crecimiento bacteriano se considera concentración inhibitoria mínima (CIM) del fármaco y esta es detectada por falta de turbidez.

Material. Cultivo bacteriano que contenga 10 6 - 10 8 microorganismo por ml. Solución de antibiótico que contenga 1000 unidades Tubos 13x 100 ml. Estériles Pipetas estériles

8

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Caldo Miuller Hinton

Procedimiento. Colocar 10 tubos 13x100 ml estériles enumerados del 1al 10. Diluir el antibiótico que contenga 1000 U. en proporción 1:5 en caldo, obteniendo una concentración 200 u. por ml. Con una pipeta estéril colocar 0.5 ml del caldo en los tubos marcados del 2 al 10. Agregar 0.5 ml del antibiótico a los tubos 1 y 2, m ezcle el contenido del segundo tubo y trasvase 0.5 ml al tubo 3, continuando de igual forma hasta el 9no tubo. Retirar 0.5 ml del 9no tubo y descartar; el 10mo no recibe antibiótico y sirve como control. Agregue 0.5 ml de la cepa bacteriana a todos los tubos Incubar a 35-37°C por 24 horas

Resultado. Realice la lectura e interprete los resultados obtenidos. Determine la CIM del fármaco estudiado. Determine si el microorganismo probado es sensible o resistente al fármaco probado haciendo uso de la tabla. Interprete correctamente el resultado obtenido

9


CIM: RESISTENCIA CIM: MODERADA SENSIBILIDAD ↓ CIM: SENSIBLE

↑

LÍMITE CRÍTICO DE FÁRMACO

ANTIBIOGRAMA POR DIFUSIÓN-DISOLUCIÓN-CUALITATIVO. Por este método se prueba simultáneamente un germen aislado de un paciente frente a más de un agente antimicrobiana, y esto se consigue inoculando la superficie de la placa de agar Miuller Hinton con el microorganismo en estudio, transcurrido 5 minutos se procede a colocar los discos de antibióticos (con una concentración conocida) equidistante uno de otro, los antibióticos difunden en el medio en forma radial alrededor del disco e inhibe el desarrollo microbiano en la zona donde su concentración es suficientemente alta (halo de inhibición), trascurrido la incubación a 35 -37°C por 24 hrs. Este método también es conocido como disco-difusión. En 1966 después del estudio Kirby-Bauer y otros se uniformizaron criterios y se estandarizó la prueba tomando en cuenta los conceptos de concentración mínima inhibitoria (CIM ) y la concentración promedio en sangre de las drogas frecuentemente usadas.

Material. Placas con agar Miuller Hinton Disco de antibióticos Torundas estériles Pinzas estériles Cepa bacteriana en caldo con una concentración de 10 6 – 10 8 microorganismo por ml

Procedimiento. Introduzca la torunda en la cepa bacteriana, escurrir oprimiendo contra las paredes del tubo y extender uniformemente en la superficie de la placa de Agar Miuller Hinton.

10

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Dejar reposar 5 minutos y colocar con la ayuda de la pinza los discos de diferente antibióticos en la superficie del Agar y presionarlos suavemente. Los discos deben estar equidistantes unos de otros Incube a 35°C 24 hrs.

Resultados Para realizar la lectura, mida el halo de cada disco de a ntibiótico en mm, conocidos los diámetros utilice la tabla para categorizar si el microorganismo es sensible, moderadamente sensible o resistente a los diferentes antibióticos. Explique cuál es o son los mejores antibióticos según el antibiograma in vitro.

11

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN: STAPHYLOCOCCUS Y STREPTOCOCCUS. AISLAMIENTO E IDENTIFICACION STAPHYLOCOCCUS El género Staphylococcus forman parte de la flora microbiana normal de la piel y mucosas del hombre y en ciertas circunstancias pueden comportarse como patógeno. El Staphylococcus aureus ha sido reconocido como un patógeno humano virulento e importante causante de abscesos, diversas infecciones piogénas, neumonía, endocarditis e incluso septicemia mortal. También durante los últimos años los estafilococos coagulasa negativos han surgido como patógenos importantes, principalmente de huéspedes deficientes incluyendo pacientes con algún tipo de prótesis, estos son los S. epiderminis , los S. saprophyticus son responsables de ITU en mujeres jóvenes. Últimamente los estafilococos coagulasa negativos son responsables de bacteriemia en pacientes neutropénicos, de infecciones relacionadas con catéteres permanentes.

Material

Placas con Agar sangre Placas con Agar Manitol hipertónico o baird Parker Láminas portaobjeto Set de colorantes Gram. Tubos con caldo tioglicolato Plasma citratado Disco de novobiocina Peróxido de hidrógeno Asa de kolle Muestra clínica: Absceso, S. nasal, ántrax.etc. Procedimiento 1. DIAGNÓSTICO PRESUNTIVO Examen directo: Realizar una Tinción Gram de la muestra y buscar cocos Gram +.

2. DIAGNÓSTICO DEFINITIVO: Cultivo.

12

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” a. Enriquecer en caldo tioglicolato, inoculando la muestra previamente incube a 35-37°C x 18-24 hrs.

Caldo tiglicolato: Rezarsurina Agar agar 0.016 gr% Tioglicolato b. Aislar en Agar sangre y/o Agar Manitol hipertónico u otro medio selectivo, sembrado por estiras y agotamiento en 4 cuadrantes: Incube a 35-37°C x 18- 24 hrs. c. Identificación: 1. Estudio macromorfológico de la colonia agar sangre y/o manitol hipertónico.

2. Estudio micromorfológico de la colonia GRAM de la colonia.

3. Estudio bioquímico y metabólico de las colonias. Catalasa Coagulasa Hemolisina Resistencia a la novobiocina

13


Resultado Anotar lo obtenido en el exam en directo Anotar la form a de crecim iento en el tioglicolato Describir las colonias típicas de los Staphylococcus en agar manitol hipertónico y agar sangre. Anotar el microorganismo aislado y si existe correlación con el exam en directo.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACION STREPTOCOCCUS Material Placas con Agar sangre y otros con medio selectivo CNA Tubos con caldo tioglicolato Láminas portaobjetos Set de Gram. Discos de bacitracina Muestra clínica: hisopado faríngeo

Procedimiento DIAGNÓSTICO PRESUNTIVO: Examen directo de la muestra clínica : Realizar un Gram. Reacción de Quellung Carbohidrato C de la pared celular

DIAGNÓSTICO DEFINITIVO: Cultivo: a. Enriquecer la muestra en caldo tioglicolato, inoculando el espécimen clínico en el medio de cultivo y dejar incubar a 35-37°C por 18-24 hrs.

Caldo tiglicolato: Rezarsurina Agar agar 0.016 gr% Tioglicolato b. Aislar en Agar sangre, Agar columbia y CNA, sembrando por estría y agotamiento e incubando a 35-37°C por 18-24 hrs.

14


c.

Identificación:

1. Estudio macromorfológico la colonia en agar san gre y/o CNA 2. Realice un Gram . de la colonia y observe la morfología bacteriana microscópica. 3. Estudio bioquímico y metabólico de las colonias. Prueba de catalasa Prueba de bacitracina, optoquinona Prueba de hemolisina Carbohidrato de pared celular

Resultados: Anotar lo obtenido en el examen directo Anotar la forma de crecimiento en el tioglicolato Describir las colonias típicas de los Streptococcus en agar sangre. Anotar el microorganismo aislado y si existe correlación con el examen directo.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE NEISSERIA GONORRHOEAE.N. MENINGITIDIS La Neisseria son cocos gramnegativos. Algunas Neisserias son comensales y otras como N. gonorrhoeae y N. meningitidis son patógenos. En un frotis de muestra clínica coloriado con Gram., estos microorganismos se presentan como diplococos de forma arriñonada (o granos de café) y se pueden observar dentro de los neutrófilos

15

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” polimorfonucleares, esta presentación se conoce como diplococos intracelulares gramnegativos y contribuyen a la identificación de una verdadera infección . Aunque estos cocos son aerobios estrictos desarr ollan me jor en un me dio enriquecido con atmósfera de 2-10% de co2. Las Neisseria patógenas son muy sensibles a las variaciones de temperatura, por la que las muestras clínicas deben ser inoculadas lo más pronto posible. Luego de 24-48 hrs. de incubación la N. gonorrhoeae forma colonias pequeñas (0.5.- 2 mm), traslucidas, grisáceas, convexas, brillantes, con bordes lisos, con frecuencia se despegaran completamente de la superficie del Agar y pueden ser mucoides o gomosas. Son autolítico

Material Placas con agar chocolate y Thayer Martín modificado Láminas Set. De Gram. Reactivo para Oxidasa Muestra: Uretral, cervix y canal anal y de otros localizaciones LCR.

Procedimiento DIAGNÓSTICO PRESUNTIVO: Examen directo de la muestra clínica .- Hacer un frotis de la muestra y teñir con Gram. Diplococos G-, intracelulares, encapsulados

Aislamiento e identificación:

16


DIAGNÓSTICO DEFINITIVO: Cultivo a) Sembrar la muestra en agar chocolate y/o Thayer Martín modificado por estría y agotamiento para obtener colonias aisladas, incubar 24-48 hrs. a 37°C y con CO2 2-10%.

b) Aislamiento: Agar Chocolate Agar Thayer Martin Modi ficado

c) Identificación: 1. Estudio macromorfológico la colonia en agar chocolate, thayer martin modificado: Colonias pequeñas, traslúcidas, autolíticas, gotas del roció

17


2. Estudio micromorfológico: Realizar un Gram. de estas colonias.

3. Estudio bioquímico y metabólico de las colonias. Prueba de oxidasa Prueba de azúcares Virulencia en el ratón No crece a 22ºC

Resultados -

Anotar los resultados ob tenidos en el exam en directo. Describir las colonias típicas aisladas, morfología microscópica y reacciones bioquímicas.

18

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS. UROCULTIVO Y COPROCULTIVO Son las que se aíslan con mayor frecuenciaDesarrollan bien en: Agar sangre, chocolate, medios selectivos (Mac Conkey). Algunas son patógenas clásicas, otros si colonizan sitios sensibles provocan enfermedades. Consideraciones generales, anatomía de las ITU y FMN de la uretra anterior:

Estafilococos coagulasa negativos Estreptococos viridans y no hemolíticos Lactobacilos Difteroides Neisseria sp. Bacilos Gram negativos Anaerobios Mycobacterium sp. Ocasionalmente levaduras.

VIAS DE INFECCION:  VIA ASCENDENTE: Escherichia coli Klebsiella Proteus mirabilis Otras enterobacterias: Citrobacter, Serratia marcensces, Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus saprophyticus Enterococcus. 

VIA DESCENDENTE: Staphylococcus aureus Candida albicans Listeria

19

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Mycobacterium tuberculosis Salmonella

UROCULTIVO RECOLECCION Y TRANSPORTE DE MUESTRAS: La calidad del diagnóstico laboratorio al depender directamente de la muestra enviada.

METODOS DE OBTENCION DE LA ORINA: Aspiración suprapúbica Segundo chorro o chorro medio Cateterización vesical Bolsa recolectora

I. DIANOSTICO PRESUNTIVO: PRUEBAS DE SELECCIÓN RAPIDA PARA ITU: 

Gram de gota fresca – Washington: Colocar 1 gota de orina fresca en lámina porta objetos, no extender y dejar secar Seguir los pasos de Gram.

Resultado: La presencia por lo menos de 01 bacteria/campo (20 campos), se correlaciona con bacteriuria significativa (>100,000 UFC/ml orina) 

Sedimento: Colocar 6 ml. Aprox. De orina en un tubo y centrifugar a 2500 rpm x 3` Decantar y hacer un preparado húmedo del sedimento. Resultado: Leucocitos: > 5 – 10/c (piuria significativa) Bacterias: Escasas, moderadas y abundantes Células epiteliales, hematíes, cilindros, cristales, etc.



Prueba de Griess: Colocar tira reactiva en la orina Resultados: Determina enzimas reductoras de Nitratos y leucocitaria, pH, proteinas, etc.

II. DIAGNOSTICO DEFINITIVO: CULTIVO DE ORINA – UROCULTIVO. A. Aislamiento  usar asa calibrada de 1, 10, y 100 ul., cargar con la muestra e inocular al medio de cultivo  Incubar a 35 – 37 ºC x 18 – 24 hrs.

20




Medios de cultivo: Gram negativos : Agar Mac Conkey, Chromocult, EMB. Gram positivos, Gram negativos: Agar tr iptica sa (T SA) , Agar sangre Otros medios de cultivo: A. sabouraud, ogawa

B. Lectura - Resultados: Recuento de colonias = UFC/ml de orina = nº de colonias totales x (10, 100, 1000) Ejemplo: Recuento=103 col. X 1000 =103,000 UFC/ml orina.

CRITERIOS DE INTERPRETACION DE UN RECUENTO EN UROCULTIVOS: CHORRO MEDIO: Urocultivo negativo:<10,000 UFC/ml orina Urocultivo dudoso: Entre 10,000 – 100,000 UFC/ml orina Urocultivo positivo:>100,000 UFC/ml orina

PUNCION SUPRAPUBICA: Cualquier número es importante.

CATETERIZACION VESICAL: Recuentos mayores de 100 UFC/ml de orina se consideran positivos 2. Identificación del microorganismo aislado – agente etiológico. Macromorfología Micromorfología Identificación bioquímica 3. Pruebas de sensibilidad a los antibióticos:

21

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Determinar si agente etiológico de la ITU es sensible, moderadamente sensible o resistente a las diferentes drogas.

INTEGRACION DE LOS RESULTADOS: I. Dx. Presuntivo : Ex. Directo. II. Dx. Definitivo: Urocultivo: Recuento de colonias Agente etiológico de la IT U Sensibilidad o antibiograma

COPROCULTIVO Viene a ser el cultivo de las heces con la finalidad de aislar a patógenos intestinales como Salmonella, Shigella, Yersinia, Campylobacter, Vibrio cholerae, E. coli patógenos. Se utiliza medios en algunas ocasiones para enriquecer las muestras y otros se aíslan directamente en medio selectivos o altamente selectivos, estos medios tienen capacidad de inhibir el desarrollo de la flora acompañante. Los patógenos intestinales son generalmente lactosa negativos excepto las E.coli patógenos.

B. Aislamiento: Sembrar por estria y agotamiento. Mac Conkey EMB SS TCBS, etc.  Incubar

35 -37ºC x 18 – 24 hrs.

C. Identificacion: 1. Macromorfología 2. Micromorfología 3. Est. Bioquímico – metabólico 4. Serología

D. Antibiograma.

22


CULTIVO Y AISLAMIENTO DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS. OBSERVACIÓN LÁMINAS DE M. TUBERCULOSIS Y M.LEPRAE. I.

DIAGNOSTICO PRESUNTIVO: Examen directo – Baciloscopia Col. Ziehl Neelsen: BAAR Especificidad del 98 % y sensibilidad del 60 – 80 % Kinyoun: BAAR Rodamina auramina

RESULTADO DE LA BACILOSCOPIA: Negativo (-): No se encuentra BAAR en 100 campos observados Positivo (+): Se observa menos de 1 BAAR promedio por campo en 100 campos observados Positivo (++): Se observa de 1 a 10 BAAR promedio por campo en 50 campos observados Positivo (+++): Se observa más de 10 BAAR promedio por campo en 20 campos observados. M. Paucibacilar: Se observa de 1 a 9 BAAR en 100 campos microscópicos observados. II. DIAGNOSTICO DEFINITIVO: CULTIVO. Especificidad del 100% y sensibilidad del 80 – 90%

1. Descontaminación, homogenizacón y/o concentración de la muestra: Agregar NaOH y centrifugar la muestra.

23

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” 2. Aislamiento: Siembra por bañado en rl medio de cultivo: Ogawa, Lowestein jensen, Middlebrook  Incubar a 37ºC entre 8-12 a 60 días. 3. Identificación: a) Estudio macromorfológico de la colonia: Colonias secas, rugosas, polimorfas, cremas o amarillas (coliflor). CUANTIFICACION DE COLONIAS: (-)

: No se observa ninguna colonia Nº de colonias totales cuando son menos de 20

(+) : De 20 a 100 colonias (++) : Mayor de 100 colonias (+++) : Toda la superficie b) Estudio microscópico de la colonia: Ziehl Neelsen. BAAR c) Estudio bioquímico. Test de niacina Reducción de nitratos Catalasa Hidrólisis del Tween 80 Reducción de telurito

PRUEBAS SEROLÓGICAS PARA EL DX DE SÍFILIS: VDRL Y RPR. El género Treponema incluye especies no patógenas y patógenas como el Treponema causante de sífilis, pinta, pian y bejel. Las cepas virulento de estas espiroquetas son de dificil cultivo, solo se pueden cultivar en testículo de conejo o almohadilla plantar del ratón, en 1981 Fieldsteel y Col. obtuvieron el cultivo de T. pallidum, biotipo pallidum, agente causal de la sífilis, empleando un cultivo celular muy complejo constituido por monocapas de fibroblasto. Son microorganismos microaerófilos, Gramnegativos. Como el microorganismo no es cultivable por métodos convencionales, el diagnóstico de laboratorio se realiza básicamente por serología, visualización en microscopio de campo oscuro y la sintomatología clínica. En la muestra de una lesión primaria de sífilis en la fase precoz denominada chancro sifilítico se puede observar la presencia de espiroquetas móviles con un microscopio de campo oscuro.

I.

DIAGNOSTICO PRESUNTIVO: Examen directo: Microscopia de campo oscuro

24


Microscopia fluorescente:

II. DIAGNOSTICO DEFINITIVO: CULTIVO. El Treponemma pallidum no es cultivable in vitro, sólo in (testículos del conejo)

III. DIAGNOSTICO SEROLOGICO: 1. Pruebas serológicas no treponémicas: Son presuntivas De gran sensibilidad pero poca especificidad Reacción antígeno anticuerpo no treponémicos Son los más usados Cualitativos o cuantitativos Pueden dar falsos positivos Tenemos a VDRL y RPR

VDRL y RPR, Técnica cualitativa: Procedimiento: Colocar 50 ul de muestra en el hoyo o círculo de las tarjetas. Añadir 1 gota de reactivo VDRL o RPR Mezclar y rotar VDRL x 4´y RPR x 8´ a 180 RPM

25

Universidad Nacional “San Luis Gonzaga” De Ica Facultad De Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” La técnica VDRL se lleva al microscopio (Microscópica) y el RPR se observa a simple vista (Macroscópica)

RPR

RESULTADOS DE RPR Y VDRL CUALITATIVO: -

Reactivo : Presencia de floculación

-

No reactivo: Ausencia de floculación

TECNICA CUANTITATIVA: Para determinar el título se debe de usar la técnica en forma cuantitativa, haciendo uso de Diluciones en tubos:

Tubo 1 : 0.5 ssf + 0.5 suero 1 : 2, 2 dils Tubo 2 : 0.5 ssf + 0.5 del T. 11 : 4, 4 dils Tubo 3 : 0.5 ssf + 0.5 del T. 21 : 8, 8 dils Tubo 4 : 0.5 ssf + 0.5 del T. 31 : 16, 16 dils Tubo 5 : 0.5 ssf + 0.5 del T. 41 : 32, 32 dils

2. Pruebas serológicas treponémicas: Son de alta especificidad Se usan para confirmar resultados positivos de pruebas no treponémicas Reacción antígeno anticuerpo treponemicos FTA abs, TPI y Hemoaglutinación

26


27

GUIA Microbiologia

Recommend Documents