KAI HPLC

LAPORAN TETAP TETAP KIMIA ANALITIK INSTRUMEN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

Disusun Oleh: Kelompok  AD!I PRA"OGAT PRA"OGATAMA AMA # $%&&$&%'( ) ADI AGUSTIANS"A! # $%&&$&%'& ) AGUNG ADIT"A PRATAMA # $%&&$&%'* ) AK!MAD !AFI+ AD"TIA # $%&&$&%'% ) APRIANS"A! # $%&&$&%', ) C!ERL" MEIGITA # $%&&$&%'- ) DELI KUSUMA .ARDANI # $%&&$&%'' ) ENDA! D!ITA PRATI.I # $%&&$&,$$ ) KELAS: /EGC

INSTRUKTUR:

I01 K1 A1 Ri234n5 M1 T

 JURUSAN TEKNIK KIMIA POLITEKNIK POLITEKNI K NEGERI NE GERI SRI.IJA S RI.IJA" "A /$* KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

I.

TUJUAN Menjelaskan teori kromatograf cair kinerja tinggi Mengoerasikan alat kromatograf cair !engan "aik !an • •

•

"enar Menganalisa s#at# sen$a%a kimia "aik secara k#antitati& ma##n k#alitati& !engan mengg#nakam alat

•

kromatograf cair tekanan tinggi 'aat melak#kan rearasi !engan teat !an ak#rat(

•

serta !aat mengik#ti man#al engoerasian )*+C. 'aat menent#kan,meng-it#ng menent#kan,meng-it#ng ka!ar at a!iti& !alam samel min#man.

II.

Alat 'an /a-an 0ang 'ig# ig#nakan 1eerangkat alat )*+C ata# KCKT Kolom c234 1$ringe *en$aring miliole Neraca analitik +a"# t#kar *iet 5ol#m Corong gelas Gelas kimia Gelas ia • • • • • • • • • •

III.

'asar Teori

11 Se640 4h

Kromatograf a!ala- s#at# istila- #m#m $ang !ig#nakan #nt#k "ermacam2macam teknik

emisa-an

$ang

!i!asarkan

atas artisi samel !iantara s#at# rasa gerak $ang "isa "er#a gas ata##n cair !an rasa !iam $ang j#ga "isa "er#a cairan ata##n s#at# a!atan. *enem# Kromatograf a!ala- Ts%ett $ang a!a ta-#n 3678( menco"a memisa-kan igmen2igmen !ari !a#n !engan mengg#nakan s#at# kolom $ang "erisi ka#r 9Ca1O:;.

lstila-

mel#kiskan

kromatograf

!aera-2!aera-

!icitakan

$ang

ole-

Ts%ett

"er%arna $ang

#nt#k

"ergerak

ke"a%a- kolom. *a!a %akt# $ang -amir "ersamaan( '.T. 'a$  j#ga mengg#nakan kromatograf #nt#k memisa-kan &raksi2&raksi etrole#m( nam#n Ts%ett la- $ang ertama !iak#i se"agai enem# !an $ang menjelaskan tentang roses kromatogra&i. *en$eli!ikan tentang kromatograf ken!or #nt#k "e"eraa ta-#n samai !ig#nakan s#at# teknik !alam "ent#k kromatograf a!atan cair 9+1C;. Kem#!ian a!a ak-ir ta-#n 3687 an !an erm#laan ta-#n 36:7 an( kromatograf m#lai "erkem"ang. 'asar kromatograf laisan tiis 9T+C; !iletakkan a!a ta-#n 3684 oleImailo5 !an 1c-rei"er( !an kem#!ian !ier-al#s ole- 1ta-l a!a ta-#n 36<4. )asil kar$a $ang "aik sekali !ari Martin !an 1$nge a!a ta-#n 36:3 9#nt#k ini mereka memenangkan No"el; ti!ak -an$a

meng#"a-

!engan

ceat

kroinatograf

cair

tetai

1eerangkat #m#m langka- #nt#k engem"angan kromatograf

gas !an kromatograf kertas. *a!a ta-#n 36<= Martin !an James mem#"likasikan makala- ertama mengenai kromatograf gas. 'iantara ta-#n 36<= !an ak-ir ta-#n 36>7 an kromatograf gas !ikem"angkan menja!i s#at# teknik analisis $ang canggi-. Kromatograf cair( !alam raktek !itamilkan !alam kolom gelas "er!iameter "esar(

a!a

!asam$a

!i"a%a-

atmos&er. ?akt# analisis lama !an segala rose!#r

kon!isi "iasan$a

sangat mem"osankan. *a!a ak-ir ta-#n 36>7 an( semakin "an$ak

#sa-a

!ilak#kan

#nt#k

engem"angan kromatograf

cair se"agai s#at# teknik mengim"angi kromatograf gas. )ig*er&ormance +i@#i! C-romatogra-$ 9)*+C; ata# Kromatograf Cair *enamilan Tinggi ata# )ig- *re&ormance

 Tekanan ata#

Kinerja Tinggi( )ig- 1ee!  Keceatan Tinggi !an Mo!ern  mo!eren; tela- "er-asil !ikem"angkan !ari #sa-a ini. Kemaj#an !alam ke!#an$a instr#mentasi !an engeakan kolom terja!i !engan ceatn$a se-ingga s#lit #nt#k memerta-ankan s#at# "ent#k -asil kea-lian mem"#at instr#mentasi !an engeakan kolom !alam kea!aan tertent#. Tent# saja( saat ini !engan teknik $ang s#!a- matang !an !engan ceat KCKT mencaai s#at# kea!aan $ang se!erajat !engan kromatograf gas.

1/1 Kele7ih4n KCKT

Kromatograf Cair Kinerja )ig- *ress#re

Tinggi

9KCKT;

ata#

+i@#i! C-romatogra-$ 9)*+C; mer#akan

sala- sat# meto!e kimia !an &isikokimia. KCKT termas#k meto!e analisis ter"ar# $ait# s#at# teknik kromatograf !engan &asa gerak cairan !an &asa !iam cairan ata# a!at. /an$ak kele"i-an meto!e ini jika !i"an!ingkan !engan meto!e lainn$a 9'one !kk( 36B: 1n$!er !an Kirklan!( 36B6 )amilton !an 1e%ell( 364=  Jo-nson !an 1te5enson( 36B4;. Kele"i-an it# antara lainD cairan !an

&asa

!iam

cairan

ata#

a!at.

/an$ak

kele"i-an

meto!e ini jika !i"an!ingkan !engan meto!e lainn$a 9'one !kk( 36B: 1n$!er !an Kirklan!( 36B6 )amilton !an 1e%ell( 364=  Jo-nson !an 1te5enson( 36B4;. Kele"i-an it# antara lainD

II1 JENIS8JENIS KROMA TOGRAFI

/11 K0om49o04;i p42494n <4i0 #LSC)

 Teknik ini tergant#ng a!a tera!sorsin$a at a!at a!a a!sor"en $ang olar seerti silika gel ata# al#mina. Kromatograf laisan tiis 9T+C; a!ala- sala- sat# "ent#k !ari +1C. 'alam KCKT kolom !ia!ati ata# !iak !engan artikel2 artikel micro or macro artic#late or ellic#lar 9"erk#lit tiis 8B 2:: ;.1e"agian "esar !ari KCKT sekarang ini !i"#at #nt#k mencaa artikel2artikel microartic#late le"i- kecil !ari =7 .  Teknik ini "iasan$a !ig#nakan #nt#k at a!at $ang m#!a- lar#t !alam elar#t organik !an ti!ak terionisasi. Teknik ini ter#tama sangat k#at #nt#k emisa-an isomer2isomer. /1/1 K0om49o04= p409isi

 Teknik ini tergant#ng a!a artisi at a!at !iantara !#a elar#t $ang ti!ak !aat "ercam#r sala- sat# !iantaran$a "ertin!ak se"agai rasa !iam !an $ang lainn$a se"agai &asa gerak. *a!a kea!aan a%al !ari kromatograf cair 9+1C;( rasa !iamn$a !i"#at !engan cara $ang sama seerti en!#k#ng a!a kromatograf gas 9GC;. Fasa !iam 9olar ata# nonolar; !ilaisi a!a s#at# en!#k#ng inert !an !iak ke!alam se"#a- kolom. Kem#!ian

rasa

gerak

!ile%atkan

melal#i

kolom.

/ent#k

kromatograf artisi ini !ise"#t kromatograf cair cair 9++C; Unt#k memen#-i ke"#t#-an akan kolom2kolom $ang !aat

le"i- ta-an lama( tela- !ikem"angkan engeakan &ase !iam $ang "erikatan secara kimia !engan en!#k#ng inert. /ent#k kromatograf artisi ini !ise"#t kromatograf &ase terikat 9/*C  /on!e! *-ase C-romatogra-$;. /*C !engan ceat menja!i salasat# "ent#k $ang aling o#ler !ari KCKT. Kromatograf artisi 9++C !an /*C;( !ise"#t &ase normal "ila &ase !iam le"i- olar !ari &ase gerak !an &ase ter"alik "ila &ase gerak le"i- olar !ari a!a &ase !iam. /1(1 K0om49o04= penuk40 ion #IEC)

 Teknik ini tergant#ng a!a en#karan 9a!sorsi; ion2ion !i antara &ase gerak !an temat2temat "erion !ari engeak. Ke"an$akan mesin2mesin "erasal !ari koolimer !i5inil"enen stiren !imana g#g#s2g#g#s &#ngsin$a tela- !itam"a-. Asam s#l&onat !an amin k#arterner mer#akan jenis resin ili-an aling "aik #nt#k !ig#nakan Ke!#an$a( &ase terikat !an resin tela!ig#nakan. Teknik ini !ig#nakan secara l#as !alam li&e sciences !an !ikenal #nt#k emisa-an asam2asam amino. Teknik ini !aat !iakai #nt#k ke!#an$a kation !an anion. /1&1 K0om49o04= eksklusi

 Teknik ini #nik karena !alam emisa-an !i!asarkan a!a #k#ran molek#l !ari at a!at. *engeak a!ala- s#at# gel !engan erm#kaan "erl#"ang2l#"ang sangat kecil 9oro#s; $ang inert. Molek#l2rnolek#l kecil !aat mas#k !alarn jaringan Kromatograf ekskl#si rnern#n$ai "an$ak nama( $ang aling #m#m !ise"#t ermeasi gel 9G*C; !an &iltrasi gel. Aa#n naman$a( mekanismen$a teta sama. 'alam "i!ang "iologi( 1e-a!e( s#at# Cross2linke! !etran gel( tela- !ig#nakan secara l#as( -an$a engeak keras !an semi keras 9olistiren( silika( glass; $ang !ig#nakan !alam KCKT. 'etran gel l#nak ti!ak !aat

mena-an

kinerja

!iatas

3

ata#

=

atmos&er.

Tenik

ini

!ikem"angkan #nt#k analisis olimer2olimer !an "a-an2"a-an "iologi( ter#tama !ig#nakan #nt#k rnolek#l2molek#l kecil. /1*1

K0om49o04=

p4s4n4n ion #IPC)

Kromatogtaf asangan ion se"agai en$es#aian ter-a!a KCKT

termas#k

"ar#(

emakaian

ertama

sekali

a!a

ertenga-an ta-#n 36B7. 'iteriman$a I*C se"agai meto!e "ar# KCKT mer#akan -asil kerja 1c-ill !an ka%an2ka%an !an !ari "e"eraa ke#nt#ngan $ang #nik. Ka!ang2ka!ang I*C !ise"#t j#ga kromatograf ekstraksi( kromatograf !engan s#at# cairan en#kar ion !an aire! ion c-romatogra-$ 9*IC;. 1etia teknik2teknik ini mem#n$ai !asar $ang sama. *o#laritas I*C m#nc#l ter#tama sekali !ari keter"atasan IEC !an !ari s#kan$a menangani samel2samel tertent# !engan meto!e2meto!e +C lainn$a 9seerti sen$a%a $ang sangat olar( sen$a%a $ang terionisasi secara komleks !an sen$a%a "asa k#at;. I*C !aat !ilaksanakan !alam !#a tie $ait# &ase normal !an &ase "alik. Fase !iam !ari rase "alik I*C !aat ter!iri !ari s#at# engeak silika $ang !isilanisasi 9misaln$a C4 ata# C34 /on!e! *-ase;

ata#

!ari

s#at#

engeak

$ang

!ierole-   secara

mekanik( &ase organik $ang ti!ak !aat "ercam#r !engan air seerti 3 entanol. Fase !iam $ang !iakai a!ala- Cs ata# CI1 /*C *acking. Fase gerak ter!iri !ari s#at# lar#tan "#&er 9!itam"as#at# kosol5en organik seerti metanol ata# asetonitril #nt#k emisa-an &ase terikat; !an s#at# enam"a-an ion tan!ing($ang m#atann$a "erla%anan !engan molek#l samel.

P0insip ke064 ins9umen94si !PLC

)*+C mengg#nakan &asa gerak #nt#k memisa-kan komonen !ari se"#a- cam#ran komonen 9analit;. *rinsi keja )*+C a!ala- emisa-an setiaa komonen !alam samel "er!asarkan keolarann$a.

0ang

aling

mem"e!akan

)*+C

!engan

kromatograf lainn$a a!ala- a!a )*+C !ig#nakan tekanan tinggi #nt#k men!orong &asa gerak. Fasa !iam $ang "iasa !ig#nakan 9a!a kolom; )*+C jenis &asa ter"alik a!ala- RMe =1iCl( !imana R a!ala- rantai alkana C234 ata# C4. 1ementara &asa gerakn$a "er#a lar#tan $ang !iat#r komosisin$a 9gra!ien el#si;( misaln$a D airDasetonitril 947D=7;( -al ini "ergant#ng a!a keolaran analit $ang akan !iisa-kan. Cam#ran analit akan terisa- "er!asarkan keolarann$a( !an %akt# retensin$a akan "er"e!a( -al ini akan teramati a!a sektr#m $ang #nsak2#ncakn$a terisa-. *rinsi !asar )*+C a!ala- emisa-an komonen2komonen terja!i karena er"e!aan kek#atan interaksi antara sol#t2sol#t ter-a!a

&asa

!i"an!ingkan

!iam.

Ke#ngg#lan

kromatograf

gas

mengg#nakan $ait#

terletak

)*+C a!a

kemam#ann$a #nt#k menganalisis c#likan $ang ti!ak meng#a !an la"il a!a s#-# tinggi. )*+C ti!ak ter"atas a!a sen$a%a organik tai mam# menganalisis sen$a%a anorganik( mam# menganalisis c#likan $ang mem#n$ai molek#l tinggi 9"eratn$a;( mam# menganalisis c#lik $ang mem#n$ai titik !i!i- $ang sangat tinggi seerti olimer.  C404 ke064 ins9umen94si !PLC

*rinsi kerja alat )*+C a!ala- ertama &asa gerak !ialirkan melal#i kolom ke!etektor !engan "ant#an oma. Kem#!ian c#likan !imas#kan ke !alam aliran &asa gerak !engan cara en$#ntikan.

'i!alam

kolom

terja!i

emisa-an

komonen2

komonen cam#ran karena er"e!an kek#atan interaksi antara sol#t2sol#t ter-a!a &asa !iam. 1ol#t2sol#t $ang k#rang k#at

interaksin$a !engan &asa !iam akan kel#ar !ari kolom terle"i!a-#l#. 1e"alikn$a sol#t2sol#t $ang interaksin$a k#at !engan &asa !iam akan kel#ar !ari kolom le"i- lama. 1etia komonen $ang cam#ran $ang kel#ar kolom !i!eteksi ole- !etektor kem#!ian !irekam !alam "ent#k kromatogram. Komonen2komonen instr#mentasi )*+C 3.

Fasa Gerak Fasa gerak !ari )*+C mer#akan at cair $ang !ise"#t el#en

ata# elar#t. 'alam )*+C &asa gerak selain "er&#ngsi #nt#k mem"a%a komonen2komonen cam#ran men#j# ke !etektor( selain it# j#ga !aat "erinteraksi !engan sol#t2sol#t. Ole- karena it#( &asa gerak !alam )*+C mer#akan sala- sat# &aktor enet# ke"er-asilan roses emisa-an. *ers$aratan at cair $ang akan !ig#nakan se"agai &asa gerak se"agai "erik#tD a. Hat cair -ar#s "ertin!ak se"agai elar#t $ang "aik #nt#k c#likan $ang akan !ianalisis ". Hat cair -ar#s m#rni( #nt#k meng-in!ari mas#kn$a kotoran $ang !aat menggangg# interretasi kromatogram c. Hat cair -ar#s jerni-( #nt#k meg-in!ari en$#m"atan a!a kolom !. Hat cair -ar#s m#!a- !ierole-( m#ra-( ti!ak m#!a- ter"akar !an ti!ak "erac#n e. Hat cair ti!ak kental !an -ar#s ses#ai !engan !etektor Fasa gerak se"el#m !ig#nakan -ar#s !isaring terle"i!a-#l# #nt#k meng-in!ari artikel2artikel kecil. 1elain it# a!an$a gas !alam &asa gerak j#ga -ar#s !i-ilangkan( se"a" a!an$a gas akan "erk#m#l !engan komonen lain ter#tama !o oma !an !etektor se-ingga akan mengaca#kan analisis. El#si !aat !ilak#kan !engan cara isokratik 9komosisi &asa gerak teta selama el#si; ata# !engan cara "ergra!ien 9komosisi &ase gerak "er#"a-2#"a- selama el#si; $ang analog !engan emrograman s#-# a!a kromatograf gas. El#si "ergra!ien

!ig#akan #nt#k meningkatkan resol#si cam#ran $ang komleks ter#tama jika samel mem#n$ai kisaran olaritas $ang l#as. Fase gerak $ang aling sering !ig#nakan #nt#k emisa-an !engan &ase ter"alik a!ala- cam#ran lar#tan "#er !engan metanol at#a cam#ran air !engan asetonitril. Unt#k emisa-an !engan &ase normal( &asa gerak $ang aling sering !ig#nakan a!ala- cam#ran elar#t2elar#t -i!rokar"on !engan elar#t $ang terklorisasi ata# mengg#nakan elar#t2elar#t jenis alko-ol. *emisa-an !engan &ase normal ini k#rang #m#m !i"an!ing &ase ter"alik. =. Kolom Kolom )*+C "iasan$a ter"#at !ari stailess steel( akan tetai a!a j#ga $ang ter"#at !ari gelas "er!in!ing te"al. Kolom #tama "erisi &asa !iam( teat terja!in$a emisa-an cam#ran menja!i komonen2komonen. /ergant#ng keerl#ann$a kolom #tama !aat !ig#nakan #nt#k analisis ata# rearati& setia komonen $ang kel#ar kolom !itam#ng a!a ta"#ng $ang "er"e!a !an kel#aran )*+C !i-#"#ngkan !engan &raction colector selain kolom #tama !ikenal #la kolom engaman. Kolom #tama "erisi &asa !ian !an jenisn$a "er5ariasi "ergant#ng a!a keerl#an( misaln$a !ikenal kolom C4( C234( c$anoro$l( !an en#kar ion. Kolom #tama #nt#k )*+C "iasan$a "er#k#ran anjang "erkisar antara <287 cm !an !iameter !alam "erkisar :(< 37 mm. Kolom engaman 9g#ar! colo#mn; !ise"#t j#ga ra2kolom karena letakn$a se"el#m sistem emas#kan c#likan. Kolom ini "er#k#ran en!ek < cm !engan !iameter :(> mm "iasan$a !iaking !engan artikel silika "er#k#ran "esar !ari #k#ran artikel kolom #tama. Kolom engaman mem#n$ai !#a &#ngsi $ait#D men$aring kotoran $ang ter"a%a ole- &asa gerak !an #nt#k menjen#-kan &asa gerak !alam rangka meng-in!arkan terja!in$a erosi &asa !iam ole- aliran elar#t.

Kolom mer#akan jant#ng kromatogra&( ke"er-asilan ata# kegagalan analisis "ergant#ng a!a il-an kolom !an kon!isi kerja $ang teat. Kolom !aat !i"agi menja!i !#a kelomokD a; Kolom analitik Garis tenga- !alam =2> mm( anjang "ergant#ng a!a jenis kemasan( #nt#k kemasan elikel "iasan$a anjang kolom <72377 cm( #nt#k kemasan mikroartikel "erori "iasan$a 37287 cm. "; Kolom rearati&  Um#mn$a "ergaris tenga- > mm ata# le"i- "esar( !an anjang =<2377 cm. 8.*oma *a!a )*+C( oma ini "er&#ngsi #nt#k mengalirkan &asa gerak cair melal#i kolom $ang "erisi ser"#k -al#s. 'ig#nakan oma "ertekanan tinggi !alam meto!e ini se"agai aki"at engg#naan &asa gerak $ang "er#a at cair $ang akan s#kar mengalir !alam kolom $ang !ia!atkan !engan ser"#k -al#s. Olekarena it#( agar at cair !aat mele%ati kolom secara teat maka !i"#t#-kan "ant#an oma $ang "ertekana tinggi. *oma $ang !ig#nakan !alam )*+C -ar#s memen#-i ers$aratan se"agai "erik#t D a;

Meng-asilkan tekanan samai <777 si

";

Keceatan alir "erkisar antara 7(3237 m+,menit

c;

/a-an ta-an korosi

!;

Kel#aran "e"as #lse

'ikenal 8 jenis oma $ang masing2masing memiliki ke#nt#ngan $ait# D a;

*oma Recirocating

*oma ini ter!iri !ari r#angan kecil temat elar#t $ang !ioma

!engan cara

gerakan iston

maj#

m#n!#r

$ang

!ijalankan ole- motor. Gerakan iston mem"erikan aliran el#en $ang konstan( memiliki 5ol#me internal kecil 98<2:77 m+; meng-asilkan tekanan t inggi 9samai 37.777 si;. *iston "er#a "atang gelas !an "erkontak lengs#ng !engan elar#t. ";

*oma 'islacement

*oma ini men$er#ai s$ringe 9alat s#ntik; tersiri !ari ta"#ng $ang !ilengkai en!orong $ang !igerakkan ole- motor. Meng-asilkan aliran $ang cen!er#ng ti!ak tergant#ng a!a tekanan "alik kolom !an 5iskositas elar#t. Memiliki keter"atasan kaasitas elar#t 9  =<7 m+; !an ti!ak m#!a- #nt#k ergantian elar#t.

c;

*oma *ne#matic

'alam

oma

ini

tinggi.*oma jenis

elar#t ini

!i!orong

ole-

gas

"ertekanan

m#ra-( tetai memiliki keter"atasan

kaasitas !an tekanan $ang !i-asilkan 9=777 si; keceatan alir "ergant#ng a!a 5iskositas elar#t !an tekanan "alik kolom. :. Injector 1amle 1amel2samel cair !an lar#tan !is#ntikan secara langs#ng ke !alam &ase gerak $ang mengalir !i"a%a- tekanan men#j# kolom mengg#nakan alat en$#ntik $ang ter"#at !ari tem"aga ta-an karat !an kat# teLon $ang !ilengkai !engan kel#k samel 9samle loo; internal ata# eksternal. 1ala- sat# jenis en$#ntik #nt#k memas#kan samel ke !alam sistem 9kolom; kromatograf a!ala- en$#ntik loo.

'alam raktekn$a( loo ti!ak erl# !iisi en#-( tai "ila ti!ak !iisi en#- akan mengaki"atkan le"i- jelekn$a resisi -asil ekserimen

!an

ketergant#ngan

resisi

terse"#t

kea!a

"agaimana si2oerator mengg#nakan en$#ntik. *erl# !iingat( "a-%a en$#ntik ti!ak "ole- !ica"#t se"el#m egangan 9-an!le; en$#ntik !i#tar !ari osisi loa! 9engisa; ke osisi inject 9s#ntik;. Karena samel akan mengalir ke sal#ran em"#angan. )al $ang terak-ir ini tent#n$a ti!ak !iinginkan( egangan en$#ntik -ar#s !i#tar ceat agar em#t#san aliran ke !alam !iinginkan.

*egangan en$#ntik -ar#s !i#tar ceat agar em#t#san aliran ke !alam

kolom(

antara

osisi

engisian

9loa!;

!an

osisi

en$#ntikan 9inject; "erlangs#ng ceat.  0ang menja!i &aktor keti!ak teatan eng#k#ran )*+C salasat#n$a terletak a!a keter#langan emas#kan c#likan ke!alam aking kolom. Masala-n$a ke"an$akan memas#kan c#likan ke!alam kolom !aat men$e"a"kan "an! "roa!ening. Ole- karen it# c#likan $ang !imas#kkan -ar#s sekecil "e"eraa #l#mikroliter. /e"eraa teknik emas#kan c#likan ke!alam sistem !aat !i#raikan se"agai "erik#t D a;

Injeksi 1$ringe

1$ringe !is#ntikan melal#i set#m 9seal karet; !an #nt#k ini !irancang s$ringe $ang ta-an tekanan samai 3<77 si. Akan tetai keter#langan injeksi stringe ini se!ikit le"i- "aik !ari =28  !an sering le"i- jelek. ";

Injeksi 1to Flo%

Aliran elar#t !i-entikan sementara( sam"#ngan a!a #j#ng kolom !i"#ka !an c#likan !is#ntikan langs#ng ke!alam #j#ng

kolom.

1etela-

men$am"#ng

kem"ali

kolom maka

elar#t

!ialirkan kem"ali. Unt#k memas#kkan c#likan ke!alam &asa gerak erl# !#a langka- D sej#mla- 5ol#me c#likan !is#ntikkan ke !alam loo !an osisi Ploa!Q. C#likan masi- "era!a !alam loo  kran !i#tar #nt#k meng#"a- osisi Ploa!Q menja!i osisi PinjeksiQ !an &asa gerak mem"a%a c#likan ke!alam kolom 9kran c#likan;. c;

Kran C#likan

 Jenis emas#kan c#likan ini !ise"#t j#ga loo !an aling "an$ak !ig#nakan. Unt#k memas#kan c#likan ke !alam aliran &asa gerak erl# = langka-( $ait#D sej#mla- 5ol#me c#likan !is#ntikan ke !alam loo !alam osisi loa!( c#likan masi- "era!a !alam loo kran !i#tar #nt#k meng#"a- osisi loa! menja!i osisi injeksi !an &asa gerak mem"a%a c#likan ke !alam kolom. <.

'etektor

A!a !#a jenis !etektor $ait# !etektor selekti&( a!ala- !etektor $ang eka ter-a!a golongan sen$a%a tertent# saja. 'an !etektor #ni5ersal( $ait# !etektor $ang eka ter-a!a golongan sen$a%a aa#n kec#ali elar#tn$a. 'iantara !etektor $ang !ig#nakan !alam KCKT a!ala-

a 'etektor Uni5ersal 

'etektor Ultra Siolet  Sisi"le 91inar Tamak;

'etektor US ter#tama !ig#nakan #nt#k en!eteksian sen$a%a2 sen$a%a organik. 'etektor US !ilengkai !engan engat#r anjang gelom"ang( se-ingga anjang gelom"ang US $ang !ig#nakan !aat !iili- ses#ai !engan jenis c#likan $ang !i#k#r. 'etektor US2Sisi"le 9#52sinar tamak; aling "an$ak !ig#nakan( karena sensiti5itasn$a $ang "aik m#!a- mengg#nakann$a( ti!ak

mer#sak sen$a%a $ang !i analisis( !an mem#ngkinkan #nt#k melak#kan el#si "ergra!ien. A!a $ang !iasang a!a anjang gelom"ang teta $ait# a!a anjang gelom"ang =<: nm( !an a!a $ang anjang gelom"angn$a !aat !iili- ses#ai !engan !iinginkan antara 3672>77 nm. 'etektor !engan anjang gelom"ang 5aria"el ini a!a $ang !ilengkai alat #nt#k memilianjang gelom"ang secara otomatis !an !aat me2nol2kan sen!iri 9allto ero;. 'etektor jenis ini j#ga a!a $ang mengg#nakan !ro!e erra$ 9se"agai engganti -oto t#"e;( se-ingga !aat melak#kan em"acaan a"sor"an $ang kontin$# a!a "er"agai anjang gelom"ang. 

'etektor In!eks /ias

'etektor in!eks "ias mem"eri resons ter-a!a sen$a%a $ang !ianalisis aa#n( termas#k elar#tn$a sen!iri. *rinsi !asar kerja !etektor ini a!ala- er#"a-an in!eks "ias karena a!an$a komonen samel !alam elar#t. 'etektor ini "ersi&at ti!ak mer#sak 9non2!estr#kti&;( sensiti5itasn$a c#k# tinggi 9minim#m 372> g; !an #m#mn$a !ig#nakan !alam ekerjaan rearati&. 'engan !etektor ini ti!ak !aat !ilak#kan el#si "ergra!ien. 'etektor ini !ig#nakan !alam kromatograf ekl#si !an !alam analisis kar"o-i!rat. /e"eraa -al $ang -ar#s !ier-atikan !alam mengg#nakan !etektor in!eks "ias D a. /ila !ig#nakan le"i- !ari sat# elar#t( maka cam#ran !a-#l# -ingga -omogen !an "e"askan !ari gas terlar#tn$a. ". 1etela- !etektor !i-i!#kan( t#ngg# "e"eraa lama se"el#m !ig#nakan samai !etektor sta"il. c. /ila !ig#nakan le"i- !ari sat#

!etektor

$ang

!iasang

"er#r#tan( maka tematkanla- !etektor in!eks "ias a!a #r#tan terak-ir.

!. Unt#k

sal#ran

em"#angan(

g#nakanla-

selang

teLon

"er!iameter !alam 9inner !iameter; $ang "esar tai en!ek. e. Tematkan !etektor a!a kon!isi s#-# $ang !ieli-ara teta.

 Jaga agar sel in!eks "ias selal# "ersi-. 1el em"an!ing -ar#s !iisi !engan elar#t $ang tela- !ile%atkan melal#i kolom( 

'etektor 1ektrometer Massa



'etektor 1ektrometer In&ramera-

";

'etektor 1elekti& 



'etektor Fl#oresensi

'i!asarkan kea!a rinsi "a-%a molek#l2molek#l tertent# !aat men$era energi a!a anjang gelom"ang $ang le"i- en!ek mem"ent#k s#at# kea!aan tereksitasi !an kem#!ian secara -ami "ersamaan t#r#n kem"ali ke kea!aan !asar 9gro#n! state; !engan memancarkan energi a!a anjang gelom"ang $ang le"ianjang. 

'etektor Kon!#kti5itas +istrik

'etektor elektrokimia "iasan$a !i!asarkan a!a !a$a -antar listrik

9kon!#ktometri;

!an

olarograf.

'etektor

jenis

kon!#ktometri "iasan$a !ig#nakan #nt#k men!eteksi sol#t2sol#t $ang !aat mengalami reaksi re!oks "aik sen$a%a organik ma##n anorganik. A!a#n ers$aratan !etektor $ait#D c#k# sensiti&( sta"ilitas( !an keter#langan tinggi( ti!ak er#sak c#likan( reson

linier ter-a!a

sol#t( relia"ilitas

tinggi !an m#!a-

!ig#nakan. I!ealn$a( s#at# !etektor -ar#s mem#n$ai karakteristik se"agai "erik#t D a. Mem#n$ai reson ter-a!a sol#t $ang ceat !an rero#si"el ". Mem#n$ia sensitiftas $ang tinggi( $akni mam# men!eteksi sol#t a!a ka!ar sangat kecil

c. 1ta"il !alam engoerasiann$a !. Mem#n$ia sel 5ol#me $ang

kecil

se-ingga

mam#

meminimalkan ele"aran ita e. 1ignal $ang !i-asilkan "er"an!ing l#r#s !engan konsentrasi sol#t a!a kisaran $ang l#as &. Ti!ak eka ter-a!a er#"a-an s#-# !an keceatan alir &asa gerak

>.Rekor!er Rekor!er a!ala- alat #nt#k mencetak -asil erco"aan a!a lem"ar "er#a k#m#lan #ncak 9kromatogram; kromatogram )*+C

$ang

!i!aat

"erg#na

#nt#k

analisis

k#alitati&

!an

k#antitati&. +#as eak men$atakan konsentrasi komonen !alam cam#ran !an j#mla- eak men$atakan j#mla- komonen. Analisis k#alitati& !aat !ilak#kan !engan cara mem"an!ingkan %akt# retensi 9rt; analit ata# samel !engan %akt# retensi stan!ar. 1e!angkan analisis k#antitati& !eat !ilak#kan !engan !i!asarkan a!a l#as eak ata# tinggi eak !engan meto!e stan!ar kali"rasi.  Penen9u4n K4;ein :

Ka&ein a!ala- s#at# sen$a%a organik $ang mem#n$ai nama lain $ait# ka&ein( tein( ata# 3(8(B2trimetilantin. Kristal ka&ein !alam air "er#a jar#m2jar#m "erca-a$a. /ila ti!ak mengan!#ng air( ka&ein melele- a!a s#-# =8:oC  =86oC !an men$#"lim a!a s#-# $ang le"i- ren!a-. Ka&ein m#!a- lar#t !alam air anas !an kloro&orm( tetai se!ikit lar#t !alam air !ingin !an alko-ol 9A"ra-am( =737;

Ka&eina8:( ata# le"i- o#lern$a ka&ein( iala- sen$a%a alkaloi! antina "er"ent#k kristal !an "erasa a-it $ang "ekerja se"agai o"at

erangsang

sikoakti&

!an

!i#retik

ringan<. Ka&eina

!item#kan ole- seorang kimia%an Jerman( Frie!ric- Fer!inan! R#nge( a!a ta-#n 3436. Ia mencitakan istila- kaein #nt#k mer#j#k a!a sen$a%a kimia a!a koi.> Ka&eina j#ga !ise"#t g#aranina ketika !item#kan a!a g#arana( mateina ketika !item#kan a!a mate( !an teina ketika !item#kan a!a te-. 1em#a istila- terse"#t sama2sama mer#j#k a!a sen$a%a kimia $ang sama. Ka&eina !ij#mai secara alami a!a "a-an angan seerti "iji koi( !a#n te-( "#a- kola( g#arana( !an matV. *a!a t#m"#-an( ia "ereran se"agai estisi!a alami $ang mel#m#-kan !an mematikan serangga2serangga tertent# $ang memakan tanaman terse"#t. Ia #m#mn$a !ikons#msi oleman#sia !engan mengekstraksin$a !ari "iji koi !an !a#n te-. Ka&eina mer#akan o"at erangsang sistem #sat sara& a!a man#sia !an !aat meng#sir rasa kant#k secara sementara. Min#man $ang mengan!#ng ka&eina( seerti koi( te-( !an min#man

ringan(

sangat

!igemari.

Ka&eina

mer#akan

at

sikoakti& $ang aling "an$ak !ikons#msi !i !#nia. Ti!ak seerti at sikoakti& lainn$a( ka&eina legal !an ti!ak !iat#r ole- -#k#m !i -amir sel#r#- $#ri!iksi !#nia. 'i Amerika Utara( 67 orang !e%asa mengkons#msi ka&eina setia -ari 9Anonim( =737; Koi a!ala- sejenis min#man $ang "erasal !ari roses engola-an !an ekstraksi "iji tanaman koi.= Kata koi sen!iri "erasal !ari "a-asa Ara" @a-%a- $ang "erarti kek#atan( karena a!a a%aln$a koi !ig#nakan se"agai makanan "erenergi tinggi.8 Kata @a-%akem"ali mengalami er#"a-an menja!i ka-5e- $ang "erasal !ari "a-asa T#rki !an kem#!ian "er#"a- lagi menja!i koWe !alam

"a-asa /elan!a.r#j#kanX *engg#naan kata koWe segera !isera ke !alam "a-asa In!onesia menja!i kata koi $ang !ikenal saat ini.8 1ecara #m#m( ter!aat !#a jenis "iji koi( $ait# ara"ika 9k#alitas ter"aik; !an ro"#sta.: 1ejara- mencatat "a-%a enem#an koi se"agai min#man "erk-asiat !an "erenergi ertama kali !item#kan ole- /angsa Etioia !i "en#a A&rika sekitar 8777 ta-#n 93777 1M; $ang lal#.< Koi kem#!ian ter#s "erkem"ang -ingga saat ini menja!i sala- sat# min#man aling o#ler !i !#nia $ang !ikons#msi ole- "er"agai kalangan mas$arakat.r#j#kanX

In!onesia

sen!iri

tela-

mam#

memro!#ksi le"i- !ari :77 ri"# ton koi er ta-#nn$a.> 'i saming rasa !an aroman$a $ang menarik( koi j#ga !aat men#r#nkan risiko terkena en$akit kanker( !ia"etes( "at# eme!#( !an "er"agai en$akit jant#ng 9kar!io5ask#ler; 9Anonim( =737; Ka&ein mer#akan jenis alkaloi! $ang secara alamia- ter!aat !alam "iji koi( !a#n te-( !a#n mete( "iji kola( "iji coklat( !an "e"eraa min#man en$egar. Ka&ein memiliki "erat molek#l 36:.36 !engan r#m#s kimia C4)37N4O= !an ) >.6 9lar#tan ka&ein 3 !alam air;. 1ecara ilmia-( e&ek langs#ng !ari ka&ein ter-a!a kese-atan se"et#ln$a ti!ak a!a( tetai $ang a!a a!alae&ek tak langs#ngn$a seerti menstim#lasi erna&asan !an  jant#ng( serta mem"erikan e&ek saming "er#a rasa gelisa- 9ne#roses;( ti!ak !aat ti!#r 9insomnia;( !an !en$#t jant#ng tak "erart#ran 9tac-$car!ia;. 'ari "e"eraa

literat#r(

!iketa-#i

"a-%a

koi !an

te- "an$ak

mengan!#ng ka&ein !i"an!ingkan jenis tanaman lain( karena tanaman koi !an te- meng-asilkan "iji koi !an !a#n te- !engan

sangat

ceat(

sementara

eng-anc#rann$a

sangat

lam"at

9)ermanto( =77B;  Tai( !i "alik kan!#ngan ka&ein $ang l#ma$an "esar it#( koi se"et#ln$a memiliki seg#!ang man&aat "agi man#sia. K-asiat koi $ang s#!a- #m#m !ikenal orang sejak !#l# a!ala- meng#rangi rasa kant#k !an lela-. Ka&ein $ang terkan!#ng !alam koi mam# merangsang sistem sara& #sat( se-ingga kita "isa "erikir cemerlang( ti!ak mengant#k( !an konsentrasi kita terjaga. Ini karena sara& kita terstim#lasi( terang 1ata%ati /ar!osono( akar gii !ari Uni5ersitas In!onesia. 1elain it#( sen$a%a ka&ein $ang tergolong alkaloi! it# se"et#ln$a j#ga mam# meningkatkan ke%asa!aan

sara&

motorik.

Ka&ein

#n

menim"#lkan

erangsangan a!a sistem erna&asan !an sistem em"#l#!ara- !an jant#ng. )asiln$a( orang $ang memin#m koi akan mam# le"i- "erkonsentrasi !alam melak#kan ekerjaann$a. 1elain it#( orang akan merasa le"i- segar setela- memin#m koi. )al inila- $ang mem"#at "an$ak orang mengkons#msi koi !i agi -ari. Nam#n( teori it# !itentang ole- *ro&esor *eter Rogers !ari Uni5ersitas /ristol( Inggris. Men#r#t enelitian $ang !ilak#kann$a( ka&ein $ang terkan!#ng !alam koi terse"#t ti!ak akan akan mem#nc#lkan k-asiat2k-asiat it# "ila orang $ang memin#mn$a s#!a- ter"iasa !engan engar#ka&ein 9Anonim( =774;.

IS.

*RO1E'UR *ERCO/AAN A1Ope04sion4l K0om49o04= C4i0

Catatan D Jangan erna- mem"iarkan oma "eroerasi tana flter elar#t teren!am !alam elar#t

*ili- anjang gelom"ang US2sinar tamak !an n$alakan !etektor #nt#k stan!"$. 1etela- 3 menit n$alakan !etektor ke osisi ON. *engat#ran 7(7:AUF1 akan c#k#.  Jika oma "el#m !in$alakan( ertama ili- sol5ent line $ang !ierl#kan 9solvent select dial) !an kel#arkan solvent line !engan gam"ar sekitar =7 m+ elar#t kel#ar melal#i fush outlet  9"era!a !i"a%a- solvent select dial;. +ak#kan ini

!engan mengg#nakan s$ringe( mas#kkan !alam o#tlet( "#ka kat# !an kel#arkan sol5ent. T#t# kat# kem"ali. *a!a saat elar#t tela- terili- !engan teat( t#rn on oma !an secara erla-an naikkan laj# aliran a!a le5el $ang !iinginkan. T#ngg# sekitar 3<2=7 !etik antara tia kenaikkan !alam engat#ran aliran. /ila aliran tela- !i2set( t#ngg# aling ti!ak 3< menit agar kolom men$es#aikan !engan elar#t $ang "ar# se"el#m menginjeksikan samel./ila aliran elar#t !i#"a- a!a saat r#nning( misal !ari 7(4 ke 3(= m+,menit( lak#kan engat#ran ke aliran $ang "ar# !engan erla-an !an t#ngg# <237 menit -ingga sta"il.Jika aliran elar#t -ar#s !i-entikan( k#rangi Pt-#m"%-eel setting !engan erla-an ke angka nol( !an s%itc- o oma. *a!a saat ini( elar#t !aat !i#"a- ke ili-an selanj#tn$a.Melak#kan Injeksi D 1em#a 5ol#me injeksi $ang akan !ilak#kan a!ala- 37Y+. /ilas s$ringe "e"eraa kali !engan elar#t !an samel se"el#m mengam"il 37Y+ aliquot . *astikan ti!ak ter!aat gelem"#ng #!ara !alam

ta"#ng s$ringe $ang m#ngkin mas#k. *#tar kat# injeksi ke loa!( #tar retaining arm ke"a%a- #nt#k meleas  plug stopper  !an ca"#t l#g. Mas#kkan jar#m s$ringe ke !alam

injection loo !an injeksikan lar#tan. Kem"alikan l#g( #tar retaining arm #nt#k mengencangkan l#g( !an selesaikan

injeksi !engan cara mem#tar kat# ke osisi inject. *encatat 9recor!er; akan start secara otomatis. *engat#ran recor!er D Mengg#nakan 1-ima!# recor!er. At#r see! a!a <( !an atten#ation a!a 8. 1-#t2!o%n roce!#re D *a!a saat kromatogram terak-ir tela- terekam kolom se"aikn$a !ikem"alikan ke kon!isi $ang ses#ai #nt#k storing( $ang mana ini "erarti kolom -ar#s !isiram !engan <7,<7 MeO),air a!a 3 m+,menit selama sekitar =7287 menit !an kem#!ian laj# aliran !ikem"alikan ke nol. Maka ganti !engan elar#t ini !engan mengg#ankan rose!#r se"el#mn$a !an lak#kan seeri !iatas.

S.

ANA+I1I1 *ERCO/AAN Kromatograf Cair Kinerja Tinggi 9 KCKT ; ata# )*+C a!ala- meto!e emisa-an komonen !alam lar#tan "er!asarkan #k#ran !an olaritas molek#ln$a. Fase gerak !alam erco"aan ini a!ala- etanol !an a@#a!est( se!angkan &ase !iamn$a a!ala- kolom. 'engan langka- kerja !aat !ili-at a!a jo"s-eet kimia analitik instr#ment( *oliteknik Negeri 1ri%ija$a. 'alam erco"aan ini( aliran kolom !alam &ase gerak $ang !iinginkan !engan Lo% 3 ml , menit !an kami -an$a mengg#nakan caeine se"agai "a-an #ji( !engan mengasilkan %akt# retensi $ait# B(3B.

SI.

KE1IM*U+AN 3. Kromatograf Cair Kinerja Tinggi 9 KCKT ; ata# )*+C a!alameto!e emisa-an komonen !alam lar#tan "er!asarkan #k#ran !an olaritas molek#ln$a. =. Keolaran !aat memengar#-i retensi %akt#.

SII.

'AFTAR *U1TAKA 3. Jo"s-eet *en#nt#n *raktik#m Kimia Analitik Instr#men(  J#r#san Teknik Kimia( *rogram 1t#!i '  IS Teknik Energi( *oliteknik Negeri 1ri%ija$a( =73: , =73<.

GAM>AR ALAT

Alat Kromatograf Cair Kinerja Tinggi 9 KCKT ; , )*+C