TOMA DE MUESTRA OBJETIVO:
Obtener de forma precisa suero sanguíneo para su uso en pruebas inmunológicas INTRODUCCION:
La toma de muestra es el conjunto de procedimientos destinados a obtener una parte representativa cualicuantitativamente cualicuantitativamente a partir de un todo, en nuestro caso, el paciente. La muestra obtenida debe tener las siguientes características:
Ser cualitativamente óptima para su estudio
Alcanzar cualitativamente un volumen razonable
Ser de emisión reciente en la mayoría de los casos
Obtenida siguiendo criterios anatómicos y funcionales, con material esterilizado y en condiciones de asepsia.
Comúnmente las muestras muestras obtenidas para su análisis análisis en inmunología son muestras sanguíneas sanguíneas y líquidos corporales como suero, plasma, líquido pleural, sinovial, cefalorraquídeo, etc. En serología la determinación de pruebas inmunológicas es mayormente en suero. Obtención de Muestra de Sangre. Para efectuar análisis serológicos, las muestras de sangre
pueden ser de sangre capilar o periférica y de sangre venosa.
Sangre capilar o periférica . Es la que fluye después de aplicar una punción superficial
cutánea. Se puede obtener de la yema del dedo. Algunas pruebas pueden realizarse con sangre capilar o periférica y se aconseja cuando no es posible obtener una muestra de sangre venosa o no se desea puncionar la vena.
Sangre venosa. Esta muestra se obtiene por punción de una de las tres venas del pliegue
del codo: la basílica, la cefálica o la mediana cubital.. Previamente se realiza la limpieza del área elegida con torunda y alcohol. Antes de puncionar se coloca el torniquete aproximadamente a 8 cm de distancia arriba del pliegue del codo. No debe olvidar soltarlo tan pronto empiece a obtenerse la muestra. La cantidad máxima de sangre a extraer será estrictamente la necesaria para las pruebas.
Anticoagulantes. Los anticoagulantes más usados son el citrato de sodio, oxalato de sodio y EDTA.
El citrato de sodio se emplea al 3.8% y el oxalato de sodio al 1.4%. Se usan en relación de una parte de anticoagulante por cada nueve partes de sangre, habitualmente se usan 0.25ml de la solución para completar a 2.5ml de volumen total con la muestra de sangre. El EDTA (ácido etilen-diaminotetra-acético) se utiliza al 10% y es uno de los anticoagulantes de elección para el trabajo de rutina. Manejo y conservación de la muestra . La muestra debe rotularse correctamente y separase según
el caso en plasma o suero, y dependiendo del tipo de análisis debe analizarse inmediatamente o puede conservarse adecuadamente refrigerada entre 4 y 8ºC para el análisis posterior. MATERIALES Y REACTIVOS:
Jeringas de 3, 5 o 10 ml
Torniquete
Alcohol etilico
Algodón
Tubos de hemolisis
Baño Maria
Centrifugadora
PROCEDIMIENTO:
- Para obtener la muestra sanguínea:
Realizar la asepsia de la región elegida (red venosa de la flexura del codo, en niños a nivel yugular)
Obtener la cantidad minima y necesaria, extraida por puncion venosa
Realizar la toma de muestra con extremas condiciones de asepsia
- El tubo que contiene sangre sin anticoagulante, al que fue transferida la muestra de sangre completa, debe dejarse 10 minutos en reposo en baño María a temperatura ambiente, para que coagule - Luego centrifugar a 3000 r.p.m. durante 5 minutos para separar las células del suero. - Luego con una pipeta Pasteur se debe separar el suero o sobrenadante y transferir a un tubo de almacenamiento para la realización de las diferentes pruebas. CONCLUSIONES:
El suero sanguíneo es principalmente agua, de un color amarillento puesto que se disuelve con proteínas, hormonas, minerales y dióxido de carbono, así como también es una fuente muy importante de electrolitos. El plasma contiene suero y factores de coagulación, una vez se eliminan los coagulantes como la fibrina este líquido se convierte en suero. Muchas de las pruebas serológicas se realizan en suero sanguíneo, por lo tanto la obtención de este debe ser de importante conocimiento.
SOLUCIONES, DILUCIONES Y MICRODILUCIONES OBJETIVO:
Elaborar cálculos de diluciones y microdiluciones para su posterior uso en pruebas inmunológicas INTRODUCCION:
Una solución es una mezcla homogénea de dos o mas sustancias, en la que la sustancia disuelta se denomina soluto y esta presente generalmente en pequeña cantidad en comparación con la sustancia donde se disuelve denominada solvente. El primer requisito de las soluciones consiste en poder especificar sus composiciones, es decir, las cantidades relativas de los diversos componentes. La concentración de una solución expresa la relación de la cantidad de soluto a la cantidad de solvente. El proceso por el cual se disminuye la concentración de una solución se denomina dilución. Una dilución se puede definir como una solución con concentración menor obtenida al agregar volúmenes conocidos de diluyente a una solución de concentración conocida. Una microdilucion es un dilución que se realiza en pequeñas cantidades, dichas cantidades son inferiores a 0,9 y 0,5 ml. Las diluciones se expresan en forma de una proporción, por ejemplo 1/10 (1:10) donde la primera cifra o numerador (1) corresponde al volumen de lo que se está diluyendo y la segunda cifra o denominador (10) al volumen total en que se encuentra. Así, una dilución 1/10 indica que se tiene un volumen de la solución original contenido o diluido en 10 volúmenes totales, de los cuales 9 corresponden al diluyente. En la práctica las diluciones se pueden efectuar de dos maneras diferentes:
Dilución directa: tienen el inconveniente de que cuando es necesario hacer una dilución alta por ejemplo 1/ 10 000, se desperdicia mucho reactivo o se incurre en un error de medición.
Dilución en serie: soluciona los inconvenientes que presenta las diluciones altas. Permite el cálculo de la muestra de estudio, de la cual se toma una alícuota que se diluye en varios tubos. La diferencia entre la dilución de dos tubos consecutivo se conoce como factor de dilución, siendo 2, 4 y 10 los más usados. Solo el primer tubo lleva la alícuota de la muestra sin diluir, los demás tubos toman la alícuota ya diluida del tubo previo. El número de tubos
y las diluciones intermedias se plantean considerando el volumen de los tubos así como el volumen mínimo. PROCEDIMIENTO:
Preparar 50 ml de una solución al 3%
1.
3 ml
100 ml
x
50 ml x = 1,5 ml
R. Medir 1,5 ml de solución inicial y enrasar a 50 ml con agua
Preparar 30 ml de una solución al 10% 10 ml
100 ml
x
30 ml x = 3 ml
R. Medir 3 ml de solución inicial y enrasar a 30 ml con agua
Preparar 80 ml de una solución al 5% 5 ml
100 ml
x
80 ml x = 4 ml
R. Medir 4 ml de solución inicial y enrasar a 80 ml con agua
Preparar 40 ml de una solución al 15% 15 ml
100 ml
x
40 ml x = 6 ml
R. Medir 6 ml de solución inicial y enrasar a 40 ml con agua 2.
Preparar 10 ml de una solución al 3% a partir de una solución al 30% Datos C1 = 30% V1 = C2 = 3% V2 = 10 ml
C1 * V1 = C2 * V2 V1 =
V1 =
V1 = 1 ml R. Medir 1 ml de solución inicial y enrasar a 10 ml con agua
Preparar 20 ml de una solución al 15% a partir de una solución al 80% Datos C1 = 80% V1 = C2 = 15% V2 = 20 ml C1 * V1 = C2 * V2 V1 =
V1 =
V1 = 3,75 ml R. Medir 3,75 ml de solución inicial y enrasar a 20 ml con agua
Preparar 50 ml de una solución al 25% a partir de una solución al 50% Datos C1 = 50% V1 = C2 = 25% V2 = 50 ml C1 * V1 = C2 * V2 V1 =
V1 =
V1 = 12.5 ml
R. Medir 12,5 ml de solución inicial y enrasar a 50 ml con agua
Preparar 30 ml de una solución al 15% a partir de una solución al 60% Datos C1 = 60% V1 = C2 = 15% V2 = 30 ml C1 * V1 = C2 * V2 V1 =
V1 =
V1 = 7,5 ml R. Medir 7,5 ml de solución inicial y enrasar a 30 ml con agua
Preparar 3 ml de una solución al 1/50
3.
1 ml
50 ml
x
3 ml x = 0,06 ml
R. Medir 0,06 ml de solución inicial y enrasar a 3 ml con solución fisiológica
Preparar 5 ml de una solución al 1/20 1 ml
20 ml
x
5 ml x = 0,25 ml
R. Medir 0,25 ml de solución inicial y enrasar a 5 ml con solución fisiológica
Preparar 10 ml de una solución al 1/80 1 ml
80 ml
x
10 ml x = 1,25 ml
R. Medir 0,125 ml de solución inicial y enrasar a 10 ml con solución fisiológica
Preparar 50 ml de una solución al 1/1000 1 ml
1000 ml
x
50 ml x = 0,05 ml
R. Medir 0,05 ml de solución inicial y enrasar a 50 ml con solución fisiológica
Preparar 20 ml de una dilución al 1/2000 a partir de una dilución al 1/1000
4.
Datos VF = 20 ml DF = 1/2000 DI = 1/1000
FD =
FD = 1 ml
=2
2 ml
x
20 ml x = 10 ml
R. Medir 10 ml de dilución inicial y enrasar a 20 ml con solución fisiológica
Preparar 50 ml de una dilución al 1/30 a partir de una dilución al 1/2 Datos VF = 50 ml DF = 1/30 DI = 1/2
FD =
FD =
= 15
1 ml
15 ml
x
50 ml x = 3,33 ml
R. Medir 3,33 ml de dilución inicial y enrasar a 50 ml con solución fisiológica}
Preparar 100 ml de una dilución al 1/80 a partir de una dilución al 1/50 Datos VF = 100 ml DF = 1/80 DI = 1/50
FD =
FD =
= 1,6
1 ml
1,6 ml
x
100 ml x = 62,5 ml
R. Medir 62,5 ml de dilución inicial y enrasar a 100 ml con solución fisiológica
Preparar 30 ml de una dilución al 1/200 a partir de una dilución al 1/10 Datos VF = 30 ml DF = 1/200 DI = 1/10
FD =
FD =
= 20
1 ml
20 ml
x
30 ml x = 1,5 ml
R. Medir 1,5 ml de dilución inicial y enrasar a 30 ml con solución fisiológica CONCLUSIONES:
Una dilución es el proceso por el cual se disminuye la concentración de una solución agregando un diluyente. Las microdiluciones son procesos similares en pequeñas cantidades de solución y diluyentes. Las diluciones y microdiluciones son procesos muy utilizados en los ensayos de inmunología, por lo que su conocimiento y elaboración en la práctica deben ser tomados muy en cuenta y de forma precisa. Se deben realizar cumpliendo las expectativas que lo requieran.
