IDENTIFICACION IDENTIFICACION CUALITATIVA DE ALCALOIDES Y GLICOSIDOS ESTEROIDES DE “Hyptis “Hyptis capitata” capitata” Alexander Puentes Parra Departamento de Química, Estudiantes de la Universidad de la Amazonia
Florencia, Caquetá, Colombia
Resumen Se realizó un análisis cualitativo para la determinación de glucósidos cardiotónicos y alcaloides presentes en el extracto metanolico de Hyptis capitata una especie perteneciente a la familia de las lamiaceae conocida como botón negro, usada principalmente como antiséptico y cicatrizante en ulceras varicosas, eczema y afecciones cutáneas de tipo inflamatorio y alérgico. Se realizaron diferentes pruebas, dragendorff, mayer, Wagner para identificación de alcaloides y baljet, keller killiani, tollens para glucosidos cardiotónicos entre otras. Palabras claves: Hyptis capitata, glucosidos cardiotónicos, alcaloides, lamiaceae, análisis cualitativo. Abstract A qualitative analysis was performed for the determination of cardiac and alkaloid glycosides present in the ethanol extract of Hyptis capitata, a species belonging to the lamiaceae family known as the black button, used mainly as an antiseptic and cicatrizant in varicose ulcers, eczema and cutaneous conditions of Inflammatory and allergic type. Different tests were performed, dragendorff, mayer, Wagner for identification of alkaloids and baljet, keller killiani, tollens for cardiotonic glucosides among others. Key words: Hyptis capitata, cardiotonic glucosides, alkaloids, lamiaceae, qualitative analysis. INTRODUCCION Desde tiempos antiguos los recursos vegetales han sido utilizados por el hombre principalmente para usos alimenticios. Esto se debe al contenido de
metabolitos secundarios que poseen las plantas y han que han constituido un punto de partida para descubrir nuevas sustancias bioactivas. 1-5 Son muchas las
poblaciones en el mundo que dependen en gran manera del uso de plantas medicinales, tanto es así, que la Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que cerca de 80 % de la población mundial utiliza plantas medicinales para atender sus principales problemas de salud.6-9 También es sabido que Colombia es un país con una incalculable riqueza natural; ocupa el segundo lugar entre los doce países con mayor diversidad biológica del mundo, con 10 % de la población mundial vegetal después de Brasil. 10-11 Colombia posee cerca de 50 000 especies de plantas, de las cuales en la región del Caribe se encuentran alrededor de 3 400; muchas son utilizadas por poblaciones de esta región en la medicina popular, por sus propiedades medicinales. 8 Hyptis es un género tropical en una
familia que crece principalmente en lugares templados, las Lamiaceae. Son especies que tienen flores pequeñas en cabezuelas; además son aromáticas, como muchas especies de la familia.
Figura 1. Hyptis capitata
Hyptis es un género de 300 especies de las
regiones calidad del nuevo mundo, especialmente Brasil, con unas pocas especies representativas en el viejo
mundo.12 Hyptis capitata es una maleza muy común en los trópicos de América, desde México hasta Colombia y Venezuela y el oeste del Perú y ecuador. Está distribuida ampliamente en toda Colombia Esta planta se usa como antiséptico y cicatrizante en ulceras varicosas, eczema y afecciones cutáneas de tipo inflamatorio y alérgico. La decocción de las hojas se emplea para limpiar heridas.13-14 La diversidad estructural y la variedad en la actividad biológica, de los alcaloides y los antibióticos, hacen de estos dos grupos, los más importantes entre las sustancias naturales de interés terapéutico. Un gran número de medicamentos se han obtenido de plantas que contienen alcaloides, estos se han aislado principalmente en plantas superiores y se han encontrado en más de 100 familias de Fanerógamas (aquellas plantas que se reproducen por semillas producidas en sus inflorescencias), en menor proporción en Criptógamas (Plantas que tienen sus órganos reproductores ocultos) del tipo licopodios, también en microorganismos (ergot) y animales como peces y ranas del género Phyllobates cuyos alcaloides constituyen algunas de las sustancias más venenosas para el hombre 15. Su actividad biológica a nivel del sistema nervioso, dio pie a las primeras investigaciones, siendo los alcaloides las primeras sustancias naturales estudiadas. No existe una definición exacta para los alcaloides, pero se puede considerar como: “Un compuesto orgánico de origen
natural (generalmente vegetal), nitrogenado (el nitrógeno se encuentra generalmente intracíclico), derivados
generalmente de aminoácidos, de carácter más o menos básico, de distribución restringida, con propiedades farmacológicas importantes a dosis bajas y que responden a reacciones comunes de precipitación15-16
Para la identificación de estos metabolitos se utilizó el extracto etanólico de la planta: Prueba de Baljet: Se adicionaron 0,5 ml de
extracto en un tubo de ensayo, posteriormente se adiciono unas gotas del reactivo de Baljet. La prueba se considera positiva si se torna de un color anaranjado/rojo oscuro. Prueba de Keller Killiani: A 0,5 mL de
Grafica 1 Morfina, alcaloide extraído de la amapola.
Las saponinas esteroides son glicósidos esteroides con un núcleo espirostano (Figura 2) que tienen la propiedad de hemolizar los glóbulos rojos y forman espuma abundante y estable al agitar sus soluciones acuosas17-18.
extracto, se le adicionaron unas gotas del reactivo de Keller-Killiani. El cambio de coloración a verdoso al cabo de 5-20 minutos significa prueba positiva para la presencia de dos desoxiazúcares. Prueba de tollens: Se adiciono 1 mL de
extracto en un tubo de ensayo, posteriormente se adicionaron de 5 a 8 gotas de piridina y se añadió posteriormente de 4 a 6 gotas de reactivo de Tollens. Se calentó el tubo de ensayo. La prueba se considera positiva cuando se observa la formación de una película de plata en el tubo de ensayo.
Pruebas para saponinas
Para la identificación de estos metabolitos se utilizó el extracto etanólico de la planta. Grafica 2 Estructura cardiotónico.
general
de
un
glucósido
Son sustancias amargas, derivadas de los esteroides, que actúan sobre el corazón fortaleciendo el trabajo cardiaco. La fracción de hidratos de carbono que constituyen los glicósidos, contiene de tres a cinco monosacáridos, por lo general desoxiazúcares o azucares especiales. METODOLOGIA Pruebas para glucósidos cardiotónicos
Prueba de Vainillina-Acido ortofosfórico (VAO): A 0,5 ml del extracto
metanólico, se le adicionaron unas gotas de la solución de vainillina. El resultado se considera positivo cuando se produce una coloración de azul a violeta para la determinación de saponinas. Prueba de Antrona: Se adicionó en un
tubo de ensayo una gota de agua y 1 mL de extracto, posteriormente se adicionó por las paredes del tubo de ensayo solución de recientemente preparada de Antrona. La aparición de un anillo
verdoso o azul en la interface significa que la prueba es positiva. Reacción de la espuma: Se adicionó 1,5
mL de extracto en un tubo de ensayo con solución de HCl a pH 1 y se agitó vigorosamente. La prueba se considera positiva cuando hay aparición de espuma. La prueba es también realizada con NaOH a pH 13.
Vainilla-ácido ortofosforico Antrona Reaccion de espuma Rosenthaler
+ -
grafica 6 Grafica 7
-
Reacción de Rosenthaler: A 1 mL de
extracto se adicionó reactivo de Rosenthaler, la prueba se considera positiva cuando se torna de color violeta, y es considerada negativa cuando se torna de color verde. Grafica 3 Prueba de Baljet
Prueba alcaloides
Para las pruebas de alcaloides se tomaron aproximadamente 0,5 mL del extracto metalonico, a cada una de ellas se le adiciono su respectivo reactivo. Prueba dragendorff Prueba dragendorff modificada Prueba mayer
Grafica 4 Prueba Keller Killiani
Prueba Erhlich Prueba Wagner Prueba hager Prueba marne Prueba bouchardat ANALISIS Y RESULTADOS Tabla 1 Resultado análisis cualitativo de glicósidos esteroides
Prueba Baljet Keller killiani Tollens
resultado Grafica Grafica 3 + Grafica 4 + Grafica 5
Grafica 5 Prueba Tollens
Grafica 6 Prueba Vainilla
Prueba de Keller Killiani:
Grafica 7 Reacción de espuma
El ensayo de Baljet, permite reconocer en un extracto la presencia de compuestos con agrupamiento lactónico, en particular coumarinas, aunque otros compuestos láctonicos pueden dar también positivo este ensayo. El reactivo de Baljet está constituido por acido pícrico y NaOH, dicho reactivo tiene interacción química directa con el anillo lactonico de los glucósidos cardiotónicos, la apertura del anillo lactonico se realiza en medio básico. En si se basa en la obtención de un complejo formado entre el ácido pícrico y la lactona α, β y γ insaturada, dicho
complejo presenta coloración rojo claro o anaranjado a rojo oscuro19
Mediante el ensayo de Keller-Killiani. Se reconocen los carbohidratos ligados incluyen generalmente a la D-glucosa, LR hamnosa y desoxiazúcares. Muestra la presencia de carbohidratos en la molécula de los diversos heterópsido cardiotónicos, como la 2-desoxiazucares20.
Prueba de tollens:
Se utiliza como reactivo una disolución amoniacal de plata, con presencia de un aldehído se produce un precipitado de plata elemental en forma de espejo de plata21. Reacción:
Reacción:
Prueba de ortofosfórico (VAO):
Vainillina-Acido
Prueba específica para esteroides y triterpenoides, con el fin de detectar el núcleo esteroidal de los cardiotónicos. Las γ-lactonas α-β insaturadas producen coloraciones violeta que desaparecen rápidamente. De esta manera, sólo aquellas manchas que revelan considerarse cardiotónicos pues poseen el núcleo esteroidal además de la lactona insaturada. Esto se evidencia claramente con un patrón de digitoxina. Prueba de Antrona:
La Antrona forma un compuesto verde en medio ácido fuerte (Ácido sulfúrico) con ciertos carbohidratos y sacáridos, en especial con azúcares y almidones. La reacción de la Antrona (9.10 dihydro 9 ketoantraceno) en medio sulfúrico produce un derivado del furano que tiene su máximo de absorción en 620 nm22. Reacción
glucosidico, para |obtener el aglicon el cual disminuye la tensión superficial generando espuma, sin embargo esto no requiere decir que todas las saponinas produzcan espuma23. Reacción de Rosenthaler :
La formación de las saponinas se indica por el ácido cianhídrico al benzaldehído en presencia de una mezcla de enzimas conduce exclusivamente al nitrilo, que por hidrolisis se transforma en el ácido mandélico23. Alcaloides Tabla 2 Resultado análisis cualitativo de alcaloides
Prueba Dragendorff Dragendorff modificado Wagner Marne Bouchardat Mayer Erlich
resultado ±
Grafica Grafica 7 Grafica 8
± -
Grafica 9 Grafica 10 Grafica 11 Grafica 12 Grafica 13
Para las pruebas de identificación de alcaloides se utilizaron dos controles positivos: cafeína, cocaína.
Grafica 7 Prueba Dragendorff
Reacción de la espuma (saponinas):
Consiste en la adición de ácido al extracto etanólico con el fin de romper enlace
Grafica 9 Prueba Erlich Grafica 8 Prueba Dragendorff
Prueba dragendorff
Grafica 9 Prueba Wagner
Grafica 10 Prueba Marne
Grafica 11 Prueba Bouchardat
Grafica 8 Prueba Mayer
Las pruebas de identificación de alcaloides positivas en las que se debía observar la formación de un precipitado, se basan en una reacción del alcaloide con el reactivo, el nitrógeno presente en la molécula reacciona con una especie iónica presente en el reactivo, se generan otras reacciones que finalmente dan como resultado la formación de una sal del reactivo que es la que finalmente precipita, estas pruebas en general no son del todo seguras debido a que pueden ocurrir los conocidos falsos positivos entre ellos algunos metabolitos presentes en el extracto como proteínas, α -pironas, cumarinas, hidroxiflavonas, lignanos, por tal motivo es necesario realizar análisis espectroscópicos para determinar con certeza que se trata de alcaloides. COLCLUSIONES Se concluye que las pruebas evidentemente permiten la identificación cualitativa de alcaloides y glicósidos esteroides, se evidencia la presencia de estos en el extracto metanolico de hyptis
capitata, sin embargo para mayor certeza, debido a los falsos positivos que se pueden presentar en las pruebas, se recomienda hacer las pruebas por duplicado o utilizar otros métodos para identificarlos como un análisis espectroscópico. AGRADECIMIENTOS Agradecer a la universidad de la amazonia de la ciudad de Florencia Caquetá por permitir realizar estas pruebas en sus laboratorios y por equiparnos con todos los materiales y reactivos necesarios para tal fin, a las auxiliares del laboratorio que están siempre pendientes y disponibles ante cualquier necesidad y principalmente al Doctor Jhon Ironzi Maldonado quien es la persona encargada de dirigir dichas actividades y de despertar en nosotros un interés demasiado grande en la ciencia y sobre todo en la parte de productos naturales, haciendo ver de esta una materia demasiado hermosa e importante para entender ciertos fenómenos naturales y su importancia en el futuro del planeta.
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