Macromoléculas de la levadura A. F. F. Bermúdez, S.A. García, M.A Giraldo Giraldo Programa académico de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad del Valle, alle, Cali (Colombia) 24 de abril de 20! RESUMEN
"n esta #r$ctica se obtuvieron datos cualitativos re%erentes a la #resencia de macromoléculas en la levadura de #anadería, &a 'ue esta al igual 'ue todas las células eucariotas, #resentan una estructura 'uímica com#lea, en base a esto la #osibilidad de obtener #ruebas a #artir de la #reci#itacin de #roteínas, la se#aracin #or densidad del glucgeno (al igual 'ue ' ue la #rueba del almidn & el glucgeno con *ugol) & la com#aracin entre las muestras mediante el orcinol con +-, +-, +.+.- & los $cidos nucleicos nucleicos obteni obtenidos dos en la #r$cti #r$ctica, ca, #udier #udieron on evidenc evidenciar iar 'ue las macromoléculas cum#len una %uncin estructural en las células/ INTRODUCCION
"n esta #r$ctica se logr identi%icar cualitativamente los di%erentes ti#os de macromoléculas, #resentes en las células eucariotas, también se conocieron algunos métodos de identi%icacin (coloracin de com#uestos es#ecí%icos)/ *as macromoléculas tienen masas moleculares elevadas (gran gru#o de $tomos), las cuales %orman #olímeros/ #o límeros/ Pueden ser tanto org$nicas como inorg$nica, un eem#lo de estos en %orma sintética son los #l$sticos/ "s necesario la inclusin de %ueras de van der 1aals, 1aals, #uentes de idrogeno, interacciones idro%bicas & enlaces covalentes/ *as macromoléculas m$s im#ortantes & comunes en los sistemas vivos son3 #olisac$ridos com#uestos #or subunidades de acar, #roteínas %ormadas #or cadenas lineales d e amino$cidos, $cidos nucleicos %ormados #or bases nucleotidicas & lí#idos %ormados #or glicerol $cidos grasos o colesterol/ "l organismo utiliado #ara llevar a cabo el #roceso es la levadura, ongos microsc#icos unicelulares con organiacin eucariota, 'ue #resentan características es#ecí%icas 'ue %acilitan ser obeto de estudio como es su %$cil & r$#ida re#roduccin, %$cil de modi%icar genéticamente, ada#t ada#tabi abili lidad dad & vers versat atil ilid idad ad #ara #ara crece crecerr en ambi ambien ente tess contr control olad ados os adem$ adem$ss de sus sus #oca #ocass necesidades nutricionales/ "stas características es#ecí%icas son tenidas en cuenta #ara #oder realiar la #r$ctica &a 'ue se aco#la al obetivo #rinci#al/ Una de las #ruebas 'ue se utili #ara obtener resultados cualitativos es la reaccin de biuret, #rueba 'ue detecta la #resencia #resenc ia de enlaces #e#tídicos/ "l sul%ato de cobre cob re es el reactivo utiliado, este reacciona con el enlace #e#tídico & cambia de color cuando entra en contacto/ "l color verde, es el color #ositivo #ara la #rueba/ METODOLOGÍA
*a #rimera #arte de la #r$ctica inicio con la trituracin de la levadura de #anadería con $cido triclo tricloroac roacéti ético, co, #oster #osterior iormen mente te se de de re#osa re#osarr durant durantee algunos algunos minutos minutos & se agregar agregaron on e5actamente 20g de la sus#ensin de #roteínas a la centri%uga/ *uego se obtuvieron sedimentos
con #roteínas & $cidos nucleicos 'ue %ueron agregados en un ba6o ielo, mientras el sobrenadante %ue decantado & luego #reci#itado con alcool etílico, nuevamente se agregaron 20g de esta sus#ensin & se #as a la centri%uga, #or ltimo se reali la #rueba del *ugol 'ue consisti en com#arar la coloracin entre el sedimento de glucgeno obtenido de la centri%ugacin & una solucin de almidn/ *a siguiente #arte consisti en la se#aracin de las #roteínas & los $cidos nucleicos, & esto se reali mediante la adicin de una solucin de -aCl & un ba6o de agua irviendo, luego se #asaron 20g de esta sustancia a la centri%uga, el sobrenadan te con $cidos nucleicos %ue decantado a otro tubo & el #reci#itado de #roteínas %ue deado en un ba6o de ielo/ *a #reci#itacin del $cido nucleico se llev a cabo mediante alcool etílico & la utiliacin de la centri%uga, #osteriormente se reali la #rueba con el orcinol, en la cual se agregaban 7 m* de esta sustancia, 2 m* de amortiguador salino #8 9 a tres tubos de ensa&o con +-, +.- & los $cidos nucleicos obtenidos de la levadura de #anadería, & %inalmente se realiaba un ba6o de agua irviendo asta el cambio en la coloracin de estas sustancias/ *a #arte %inal del laboratorio consisti en la #rueba de Biuret, donde se tom el sedimento de #roteínas anteriormente obtenido & se le agregaron 2 m* de solucin -aCl, %inalmente se agreg m* de sul%ato c#rico & 2m* de idr5ido de sodio, al realiar esto, se observ un cambio en la coloracin de la muestra #ara las #roteínas/ RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Para la #rueba realiada sobre las #roteínas, denominada #rueba de Biuret, se io uso de #roteínas #rovenientes de células maceradas de levadura de #anadería (Saccharomyces spp), & Cu:;4 en solucin salina de -a;8, las #roteínas se obtuvieron #or el tratamiento con $cido tricloroacético, centri%ugado de las células maceradas, & %inalmente una resus#ensin en una solucin de -aCl #ara centri%ugarse nuevamente< des#ués de esto %ue a6adido el Cu:;4 lo 'ue dio como resultado una solucin de color violeta, *o 'ue indica el #ositivo de esta #rueba < también se observaron algunos grumos blancucos c omo #reci#itado, esto no ocurri #ara el tubo de ensa&o 'ue contiene solucin salina sola , a la 'ue también se le a6adi Cu:;4/ =eniendo en cuenta lo anterior, se #uede a%irmar 'ue la reaccin ocurre debido a las #roteínas de la solucin, & no a las sales #resentes en ella, en este caso las sales nicamente desestabilian las %ueras eléctricas débiles de las #roteínas #ara 'ue ad'uieran una %orma no globular & menos soluble en agua< de a'uí se tiene también 'ue la solucin cambia de color debido a la %ormacin de un com#leo coordinado entre los electrones de los -itrgenos del enlace #e#tídico de las #roteínas & el ion Cu>2 liberado #or la disociacin del sul%ato c#rico/ "sta #rueba %unciona nicamente #ara moléculas 'ue contengan 2 o m$s enlaces #e#tídicos &a 'ue el Cu>2, re'uiere de 4 interacciones coordinadas de -itrgenos de este ti#o #ara estabiliarse/ CONCLUSIONES
Para la e5traccin de las di%erentes macromoléculas #resentes en la levadura es necesario modi%icar el medio de reaccin como la tem#eratura, rom#imiento mec$nico de moléculas, reaccin con otros reactivos, etc/ •
*a #rueba #ara determinar cuantitativamente la #resencia de $cidos nucleicos dio #ositiva, aun'ue no con un resultado com#letamente o#timo, una #robable causa del %racaso de esta #rueba se #uede deber a 'ue los reactivos se encontraban contaminados #or errores en la mani#ulacin o #erdida en la cantidad de la macromolécula en cada eta#a de la #r$ctica/
REFERENCIAS [1]Guarnizo, A y Martínez, P. 2009. Experimentos de química orgánica con enfoque en ciencias de la vida . Ediciones Elizcom. Armenia. •
