INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL Escuela Nacional de Ciencias de Biológicas “Bioquímica General !I"# Córdo$a %&li' (uan "anuel Es)e*el +i$era Sergio Ar,uro Resultados.
Práctica 5.1 “Curva tipo de azucares reductores”
Reacci Reacción ón del 35 !initr !initrosa osali lic"l c"lico ico #!$%& #!$%& con 'z(cares Reductores
Introducción La in$er,asa -./0/1ruc,o1uranosidasa2 ./0/ 1ruc,o1uranósido 1ruc,o3idrolasa2 1ruc,o3idrolasa2 EC !454#45672 ca,ali8a la 3idrólisis de res,os Blan ,erminales no ubo $o. co reduc,ores ./0/ 1ruc,o1uranósidicos 1 de 1ruc,o1uranósidos4 1ruc,o1uranósidos4 A9sor9ancia En,re los sus,ra,os .4 so9re los que ac,ua es2 sin duda2 la A8:car sacarosa2 de a3í que +educ,or 1 la en8ima se designe -@moles754? con el nom9re de mL sacarasa4 La denominación ,ri$ial de in$er,asa2 con la que ,am9i&n se conoce2 3ace re1erencia al 3ec3o de que los )roduc,os de la reacción son conocidos desde an,es como “a8:car in$er,ido ;a que mien,ras la sacarosa es de',rorro,a,oria2 la me8cla equimolecular de glucosa ; 1ruc,osa que resul,a de su 3idrólisis es le$orro,a,oria4
Pro9lemas 2 .134 2
3
-
5
1.) *ecturas de 'bsorbancia obtenidas en el 1 espectro+otó,etro a 5- n, con di+erentes concentraciones de az(cares reductores. .2
.552
.4-
!iscusión de Resultados
El m&,odo 0NS -,&cnica de "iller7 es una ,&cnica colorim&,rica que em)lea !2< dini,rosalicilico )ara la 3idrólisis de )olisac=ridos )resen,es en una mues,ra4 Se de,ermina las a9sor9ancias )or medio de un es)ec,o1o,ome,ro es)ec,o1o,ome,ro a <>? nm4 Es,a ,&cnica sir$e )ara cuan,i1icar los a8ucares reduc,ores )roducidos duran,e una 1ermen,ación o )ara cuan,i1icar los )roduc,os )roduc,os de una reacción en8im=,ica4
"edian,e es,a )r=c,ica logramos o9,ener una cur$a ,i)o de a8:c a8:car ares es redu reduc, c,or ores es dond donde e rela relaci cion onam amos os la a9sor9anc a9sor9ancia ia medida medida en un es)ec,ro1 es)ec,ro1o,óm o,óme,ro e,ro a <>? nm -den,ro -den,ro de la región región $isi9le7 $isi9le7 con res)ec,o res)ec,o a di1eren,es di1eren,es concen,raciones de un a8:car reduc,or en -@moles754? mL7 que en es,e caso 1ue las di1eren,es concen,raciones de la solución de Glucosa ?4??< " %ruc,osa ?4??< "4
El 0NS reacciona :nicamen,e con los a8ucares reduc,ores4 La sacarosa es un disac=rido no reduc,or2 )ero ,ras su 3idrólisis en medio acido se li9eran glucosa ; 1ruc,osa que si son reduc,ores ; reaccionan con el 0NS generando un )roduc,o coloreado4 La in,ensidad del color2 que se )uede medir )or m&,odos es)ec,ro1o,om&,ricos es)ec,ro1o,om&,ricos es )ro)orcional a la concen,ración de sacarosa4
0ond 0onde e )or )or medi medio o de la reac reacci ción ón de los los a8:c a8:car ares es reduc,ores reduc,ores /lucosa /lucosa 0 +ructosa +ructosa -con$er,id -con$er,ida a a glucosa glucosa median median,e ,e NaOD ;a que )or la )osición )osición de su gru)o car9onilo que es,= com)rome,ido la 1ruc,osa no )uede reducir en un inicio7 de la solución con el reac,i$o !2< 0NS nos )ermi,o o9ser$ar o9ser$ar el )oder reduc,or de es,os es,os a8ucares a8ucares de manera manera $isual $isual median,e median,e la 1ormación 1ormación de =cidos =cidos deri$a deri$ados dos del 0NS reduci reducidos dos en di1ere di1eren,e n,es s )osiciones -en ! ; <7 a )ar,ir de la o'idación de es,os a8:car a8:cares es los cuales cuales )resen )resen,ar ,aron on color color al 1ormar 1ormarse se22 colores que se dieron desde amarillos 3as,a anaran*ados con1orme la concen,ración de los a8ucares era ma;or )or es,a misma ra8ón ,omamos las lec,uras de a9sor9ancia del es)ec,ro1o, es)ec,ro1o,óme, óme,ro ro a <>? nm como se o9ser$a o9ser$a en la imagen
Objetivo Se ela9orara una Cur$a Ti)o de A8ucares +educ,ores a )ar, )ar,ir ir de lec, lec,ur uras as de a9so a9sor9 r9an anci cia a o9,e o9,eni nidas das en el es)e es)ec, c,ro ro1o 1o,ó ,óme me,r ,ro o con1o con1orm rme e a di1er di1eren en,e ,es s conc concen en,r ,rac acio ione nes s de a8uc a8ucar ares es redu reduc, c,or ores es que que al reaccionar con el 0NS en,regan com)ues,os con colores que $aría $arían n acorde acorde al )oder )oder reduc, reduc,or or de los a8uca a8ucares res mues,ras que son )osi9les
de leer en la región $isi9le -<>? nm74
INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL Escuela Nacional de Ciencias de Biológicas “Bioquímica General !I"# Córdo$a %&li' (uan "anuel Es)e*el +i$era Sergio Ar,uro Imagen # Imagen de coloración o9,enida en los di1eren,es ,u9os con dis,in,as concen,raciones del a8:car reduc,or que reaccionaron con el !2
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Com)ro9amos que aunque la sacarosa es,= 1ormada )or glucosa ; 1ruc,osa no es un a8:car reduc,or4 Com)ro9amos que la a9sor9encia de)ende de la can,idad de glucosa ; 1ruc,osa )resen,e en la mues,ra4
Gráfca Absorbancia vs [Azucar Red Pre/unta 67tra 0.8
Cin8tica enzi,ática
0.6
Absorbancia
0.4 0.2 0 0
2
4
6
8
1
[Azucar Reductor] (μmoles)/2.
"edian,e es,a gr=1ica o9,u$imos un )a,rón de re1erencia acerca del com)or,amien,o del )oder reduc,or de a8:cares con1orme al incremen,o de su concen,ración2 la cual nos ser$ir= como re1erencia )ara discu,ir las di1eren,es )rue9as que reali8aremos $ariando los 1ac,ores que a1ec,an la actividad enzi,ática -)D2 Tem)era,ura2 Concen,ración de Sus,ra,o ; de en8ima2 in3i9idores2 e,c7 en )r=c,icas siguien,es4
Conclusión •
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En es,a )r=c,ica com)ro9amos que la 1ruc,osa ; la glucosa son a8ucares reduc,ores al reaccionar con el 0NS4 Com)ro9amos que al reaccionar el 0NS con los a8ucares reduc,ores es,os se o'idan ; se 1orman =cidos4
La cin&,ica en8im=,ica es,udia las $elocidades de las reacciones ca,ali8adas )or en8imas4 Es,os es,udios )ro)orcionan in1ormación direc,a acerca del mecanismo de reacción ca,alí,ica ; de la es)eci1icidad de la en8ima4 La $elocidad de reacción ca,ali8ada )or una en8ima )uede medirse con rela,i$a 1acilidad2 ;a que en muc3os casos no es necesario )uri1icar o aislar la en8ima4 La medida se reali8a siem)re en las condiciones o),imas de )D2 ,em)era,ura2 e,c ; se u,ili8an concen,raciones de sus,ra,o4 En es,as condiciones la2 $elocidad de reacción es la $elocidad m='ima4 La $elocidad )uede de,erminarse midiendo la a)arición de los )roduc,os o la desa)arición de los reac,i$os4
9iblio/ra+ia Nelson 04L ; Co' "4"2 Le3ninger Princi)ios de Bioquímica2 >,a Edición2 Ed Omega2 5??62 )=gs
